Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi İmmünoloji Laboratuvarı tx immünolojik...
Transcript of Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi İmmünoloji Laboratuvarı tx immünolojik...
Transplantasyon öncesi immünolojik değerlendirme
Dr.Hüseyin Tutkak
Ankara Üniversitesi Tıp Fakültesi
İmmünoloji Laboratuvarı
Cosmas and Damian miraculously transplant the (black) leg of a Moor onto the (white) body of Justinian. Ditzingen, 16th century.
“GERÇEKLEŞTİRMEK İÇİN ÖNCE DÜŞ KURMAK GEREKİR, HAYAL EDİNANCAK DÜŞ DÜNYASINDA YAŞAMAYIN ! “
Dr. Joseph MurrayThe Brigham Hospital, Boston, MANobel Prize in Medicine in 1991(… 2012)
Performed First Successful Clinical Kidney Transplantation
December 23, 1954
İmmünolojik bariyerTek yumurta ikizleri arasında yapılan transplantasyonla aşıldı
23/10/2014 431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 531.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CDC CROSSMATCH / BÖBREK NAKLİ
Rejeksiyon (≥ 48h) Rejeksiyon yok
Positive crossmatch 24 6
Negative crossmatch 8 187
Patel R., Terasaki P.I. : N.Engl. J. Med. 1969; 280: 735
Pozitif crossmatch: Akut greft kaybı için yüksek risk (80%)
Crossmatch pozitif ise transplantasyon önerilmez.
Bazı antikorlar (anti-HLA dışındakiler) direkt donör lenfositlerine karşı
olmakla birlikte klinik olarak ilişkisiz.
% 80%4,1
23/10/2014 631.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Transplantasyon immünolojisi
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak7
ARAŞTIRMALARIN AMACI
•Rejeksiyon ↓•Polimedikasyon ↓•Toksisite ↓•Tolerans
•Sağ kalım ↑•Adaptasyon ↑
Böbrek Tx öncesi değerlendirme
Kan grubu (A, B, AB, and O)
Rh faktör problem değil
Human Leukocyte Antigen (HLA), Doku tiplendirmesi
Lenfosit Crossmatch testi, (LCM) daha önce yapılmış olsa bile
nakilden önce yeniden yapılmalı
Panel reaktif antikorlar (PRA)
Serolojik testler; HIV, CMV, hepatitis
Kardiyopulmaner ve kanser taraması
23/10/2014 831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Organ AlıcısınınUygun olmadığı durumlar
Çoğu <60 yaş altı
Aşağıdaki durumlarda nakil düşünülmez;
Yakın zamanda MI
Aktif enfeksiyon
Malignite
Uyuşturucu bağımlısı
İlişkisiz hastalık nedeniyle sınırlı sürede yaşam beklentisi
23/10/2014 931.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Otograft, Isograft, Allograft, Xenograft
23/10/2014 1031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Organ nakli bekleme listeleri
TÜRKİYE (Sağlık Bakanlığı)
• Aktif bekleme listesi (Eylül 2013) 47.109 hasta
• 2012 yılında bekleme listesine eklenen yeni hasta 9.559
• Toplam 4004 nakilCanlıdan 3659Kadavradan 345
2013 verileriToplam 2944 böbrek nakli
Canlı 2359 (80,13)Kadavra 585 (19,87)
Türkiye’de Nefroloji, Diyaliz ve Transplantasyon, Registry 2013
Edt.Süleymanlar G., et all. 2014TEŞEKKÜRLER
ABD (Registry of Transplant Recipient2013)
• Aktif bekleme listesi 75.000 hasta
• Yapılan organ nakli 30.000
Avrupa (Eurotransplant , 8 ülke, 135 milyon, 2013)
• Aktif bekleme listesi Ocak 2013, 15.027 hasta
• Aktif bekleme listesi 2012 11.210 hasta
• Yapılan organ nakli 7.357
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak11
ABO Sistemi
1901 yılında keşfedilmiştir
Dr. Karl Landsteiner
4 ana fenotip (A, B, AB, O)
ABO geni 9.kromozomun uzun kolu üzerinde
31.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -Dr.H.Tutkak
1223/10/2014
ABO grup antijenleri/Yapı
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak13
Kan grubu Antijenleri & Antikorları
31.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -Dr.H.Tutkak
14
Kan grubuRBC
üzerindeki Antijenler
Serumdaki antikor Genotipi
A A Anti-B AA or AO
B B Anti-A BB veya BO
AB A ve B Yok AB
O Yok Anti-A ve anti-B OO
23/10/2014
Transplantasyon / Kan grubu
Donör
O
A
B
AB
Olası Alıcı
O, A, B, AB
A, AB
B, AB
AB
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak15
ABO uyumsuz nakil yapılabilir mi?
Isoaglutinin titreleri düşürülerek (1/8 - 1/16 )
ABO uyumsuz nakiller yapılabilmekte.
ABO uyumsuz Tx nakil sayılarını arttırabilir !!!
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak16
HLA antijenleri / MHC
Bağışıklık sisteminin kendinden olanı ve olmayanı tanıması için gerekli
olan “doku antijenlerini” kodlayan gen bölgesi Büyük Doku Uyum
Kompleksi, MHC (Major Histokompatibilite Kompleksi) olarak
adlandırılır.
İlk olarak kemirgenlerde tanımlanmış (17. kromozom)
İnsanlarda 6. kromozomun kısa kolunda
Akyuvarlarda saptanan bu genler Human Leukocyte Antigens
(HLA) bölgesi olarak da isimlendirilir.
MHC, kodlanan proteinlerin özelliklerine göre sınıf I, sınıf II ve sınıf III
olarak alt bölgelere ayrılır.
23/10/2014 1731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA / MHCSolid organ Tx
Tx antijenleri HLA-A, B, DR
SINIF I HLA –A, B, C
SINIF II HLA -DRA, DRB, -DQA, -DQB, -DPA, -DPB, -DNA, -DMA, -DOB
SINIF III C4B, C4A, C2, HSP-70, TNFα, TNFβ
6. kromozom
17.kromozom
23/10/2014 1831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA sınıf I de α1, α2,
HLA sınıf II de β1
bölgeleri yüksek
derecede polimorfik
23/10/2014 1931.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Figure 5-12
23/10/2014 2031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
MHC ≈ 4100 Baz çifti içeriyor
MHC / Hangi hücrelerde?
23/10/2014 2131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Figure 3-19 part 2 of 2
23/10/2014 2231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
MHC / Hangi hücrelerde?
Human Leukocyte Antigen (HLA)Doku uygunluk antijenleri
HLA Antijenleri akyuvarların (WBC) üzerinde bulunur
HLA nın fonksiyonu tanımak ve kendinden olmayanla savaşmaktır.
Nakilde, Sınıf I için, HLA-A, B ve sınıf II İçin,HLA-DR önemli
Sınıf I, antijenleri APC’leri kullanarak sitotoksik T lenfositlere (CD8), Sınıf II, antijenleri helper T (CD4) lenfositlere sunar.
Nakilde alıcının, donör HLA antijenleriyle uyumu rejeksiyondankaçınmak ve graft yaşam süresi için önemli
23/10/2014 2331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
MHC sınıf I
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak24
MHC’nin telomerik ucunda
HLA -A, -B, -C (klasik transplantasyon antijenleri)
HLA -E, -F, -G (klasik olmayan sınıf I antijenleri)
HLA -H, J, K, L, X (pseudogenler ve gen segmentleri)
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak25
MHC sınıf II
Sentromere yakın
HLA – DRA, DRB, DQA, DQB, DPA, DPB, DNA, DMA, DOB
Pseudogenler, LMP1, LMP2, LMP7, TAP1, TAP2 (antijen
işlemesinde rol alan genler)
DRA nonpolimorfik
DQA, DQB, DPA, ve DPB polimorfik
HLA-sınıf I /Yapı
23/10/2014 2631.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA-sınıf II / Yapı
23/10/2014 2731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Figure 5-14
23/10/2014 2831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA GENETİĞİ / HAPLOTİP
6/6 MATCH0 MISSMATCH
HLA-A1, HLA-B7, HLA-DR1
HLA-A3, HLA-B13, HLA-DR3HLA-A1, HLA-B7, HLA-DR1
HLA-A3, HLA-B13, HLA-DR3
HAPLOTİPHAPLOTİP
HAPLOTİP HAPLOTİP
23/10/2014 2931.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
3/6 MATCH3 MISSMATCH
ANNE, BABA ÇOCUKLAR 3/6 MATCH
HLA-A1, HLA-B7, HLA-DR1
HLA-A29, HLA-B44, HLA-DR5HLA-A1, HLA-B7, HLA-DR1
HLA-A30, HLA-B49, HLA-DR4
23/10/2014 3031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 3131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Impact of HLA Matching and HLA Antibodies in OrganTransplantation: A Collaborative Transplant Study View
Caner Süsal and Gerhard Opelz, 2012
23/10/2014 3231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Kadavradan Böbrek TxGraft Survival
23/10/2014 3331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Böbrek naklinde HLA uyumu
HLA uyumu arttıkça graft sağ kalım süresi artıyor
0 missmatch de (6/6uyum) en uzun graft sağ kalımı.
0 missmatch de HLA antijenlerine karşı antikorlar ?
6 missmatch de HLA antijenlerine karşı antikorlar ?
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak34
23/10/2014 3531.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
BAŞARILI NAKİL İÇİN SADECE HLA UYUMU YETERLİ Mİ ?
ALLOANTİKORLAR REJEKSİYON NEDENİDİR
ALLOANTİKOR TAYİNİ
NAKİL ÖNCESİ PRA TANIMLAMA
NAKİL ÖNCESİ LCM
HLA UYUMU 5/6
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak36
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak37
HLA antijenlerine karşı antikorlar
• Niçin oluşuyorlar?
• Tx da alıcıda bu antikorlar varsa ne olur?
• Alıcıda donör spesifik (DSA) antikorlar varsa ?
• Tx öncesi veya nakil sonrası oluşan DSA lar graftsağ kalımını etkiliyor mu?
• Bu antikorları nasıl saptayacağız ?
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak38
Kadınlarda
• İlk gebelik %15-25
• 2. gebelik %50-6o
HLA ANTİKORU
Kan transfüzyonu
• İlk kan transfüzyonu %20
• 10 kan transfüzyonu %40
• 20 kan transfüzyonu %70
HLA ANTİKORU
BÖBREK NAKLİ BEKLEME LİSTELERİ
• İlk nakil %17
• 2. nakil %64
• 3. nakil %84
• 4. nakil %92
HLA Antikoru mevcut(Antikor tarama ELISA ile yapılmış)
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak 39
Organ naklinde presensitizasyonMajör problem
Böbrek bekleme listelerindeki hastaların %20-40 ‘ı presensitize
HLA ALLOANTİKORLARI
23/10/2014 4031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA antijenlerine karşı antikorlar;
Transfüzyon,
Gebelik,
Daha önceden organ nakli yapılmış kişiler
Anti-HLA antikorlarının organ alıcısında
transplantasyondan veya retransplantasyondan önce
tayini ve tanımlanması önemlidir.
Alloantikorlar
• Donör - spesifik antikorlar (DSA)
Anti-HLA
Anti-endothelial cell antikorlar
Anti-human MHC Class I chain-related genes (MICA,B)
Doku spesifik antijenlere karşı antikorlar
ABO isoagglutininler
• Non donör - spesifik antikorlar
Anti-HLA antikorlar
Anti-MICA antikorları
23/10/2014 4131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Alloantikorlar
Gerek önceden mevcut gerekse de novoalloantikorlar mevcut ise, hiperakut, akut ve kronik rejeksiyon gelişebilir.
Nakil sonrası antikor takibi
◦ Alıcının humoral yanıtını izlemek
◦ İmmünsüppresif tedavinin optimizasyonu
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak42
31.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -Dr.H.Tutkak
43
• Gebelik (-)
• Kan transfüzyonu hiç yapılmamış
• Transplantasyon yapılmamış
ALLOANTİKORLARIN MEVCUT OLMAMASI GEREKİR
• Doğal anti-MHC antikorları ?
• MHC antijenleriyle cross reaksiyon verebilen anti mikrobiyal antikorlar
SensitizasyonNedeni
23/10/2014
PRA
(Panel Reactive Antibodies)
CDC
İyi tanımlanmış panel hücreleri hasta
serumunda alloantikor reaktivitesi ve
spesifikliğinin tayininde kullanılır.
PRA, pozitif hücrelerin oranıdır.
23/10/2014 4431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA antikorları
Nakillerden hemen önce
Lenfosit crossmatch(CM) testi
• CDC (lenfositotosisite)
• Flow CM
• ELISA CM
Nakile hazırlanan hastalarda
Panel Reaktif antikor
HLA sınıf I ve II tarama (+, -)
HLA sınıf I ve II tanımlama
Antijene spesifik antikorlar
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak45
Collaborative Transplant Study , Opelz
PRA> %50 PRA≤%50
23/10/2014 4631.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
PRA greft yaşam süresini etkiliyor
Nakil öncesi Anti-HLA Antikor
23/10/2014 4731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 4831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Yıllar
23/10/2014 4931.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
50
60
70
80
90
100
0 1 2 3 4
No Antibody (1096)
DSA (57)
Non-DSA Antibody (145)
Perc
en
t G
raft
Su
rviv
al
Years after Testing
Log-rank p=0.0037All HLA Antibodies are De novo
DSA are most detrimentalKIDNEY: ALL Workshops
Banu Sis, MD, FRCPC-2009
23/10/2014 5031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -Dr.H.Tutkak
23/10/2014 5131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Antikor taramada kullanılan teknikler
Hücre temelli teknikler1. CDC yöntemiDüşük duyarlılıkta ancak hiper
akut rejeksiyona eşlik eden antikorları belirler
2. Flow sitometrik XMRiski gösterir, bu Tx için
kontraendike olmak zorunda değildir
Farklı Ig sınıf ve alt grupları belirlenebilir
Solid faz immunassayyöntemleri (SPI)
Çözünmüş HLA molekülleri ELISA da mikrotitrasyonplağına, Flow ve luminex de polistiren boncuklara bağlanmıştır.
ELISA da Ab bağlanması OA ölçümü ile yarı niceliksel
Luminex de yarı nicelikseldir Ab bağlanması rapörtörsinyalin mean floresansşiddeti (MFI) ile ifade edilir
23/10/2014 5231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 5331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
YÖNTEMLERİN DUYARLILIKLARI
23/10/2014 5431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
YÖNTEMLERİN ÖZGÜLLÜK VE DUYARLILIKLARI
Role and Value of Luminex-Detected HLA Antibodiesbefore and after Kidney Transplantation
Caner Süsala Gerhard Opelza Christian Morathb, 2013
23/10/2014 5531.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CDC ELISA FCM SPA (Luminex)
Duyarlılık + ++ +++ ++++
Özgüllük +++ + ++ +++
HLA antikorları + + + +
Non_HLA antikor + - + + , MICA
C fikse eden antikorlar + + + +
C fikse etmeyen
antikorlar
- + + +
Alt sınıf IgG1,G3,IgM IgG1,G2,G3,G4 IgG1,G2,G3,G4,IgA,IgM IgG1,G2,G3,G4
Canlı hücre
gereksinimi
+ - + -
Avantajı Fonksiyonel
test
C fikse eden /
etmeyen
antikorların ikisi
de tayin edilebilir
Bütün antikorları tayin
eder,
sensitize/retransplant
hastalarda önemli
DSA’ları tanımlar
Sanal CM
Sınırlamaları C fiske
etmeyen
antikorları
tayin edemez
Non HLA
antikorları tayin
edemez
Yanlış +/- sonuçlar
Yanlış +/- sonuçlar,
Optimal MFI
değerleri konusunda
konsensus yok
23/10/2014 5631.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
HLA ANTİKOR TARAMA YÖNTEMLERİ
23/10/2014 5731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 5831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Nakil sonrası HLA antikor düzeylerinin önemi
Nakil öncesi DSA mevcut olmadan nakil yapılan hastaların 1 yıl sonunda yaklaşık % 10’nunda de novo DSA oluşumu görülmektedir. İlk yıldan sonra de nova DSA artışı yılda %3-4 civarındadır.
De nova DSA görüldüğünde, bir yılda bu olgulardaki organ yetmezlikleri yaklaşık %15-20, beş yıl içinde ise olguların yaklaşık %50’si organlarını kaybetmektedir.
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak59
Non HLA antikorlar
Organ Antikorlar
Akciğer Col V
K-α1T
Kalp Miyozin
Vimentin
Col V
K-α1T
Böbrek Fibronektin
Col IV
Vimentin
ACTR1
Karaciğer Col III
Pankreas ICA
İnsulin oto antikorları
GAD
23/10/2014 6031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Kısaltmalar, Col;Kollagen, K-α1T;K-α1 Tubülin, ACTR1; anjiyotensin II tip 1 reseptör, ICA; adacık hücre antikoru,GAD; glutamik asit dekarboksilaz.
Nakilden hemen önce CM yapılmalı
23/10/2014 6131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Alıcı ve donör HLA antijenleri tayin edilmiş
Alıcıda PRA tarama ve tanımlama ve varsa donör spesifik antikorlar saptanmış
Son kontrol, alıcı serumu ile verici lenfositleri kullanarak CM testi yapılmalı
CM (1)
1969. Standard-, direct NIH-CDC.
1969. Uzamış inkübasyon T ve B CDC.
1970. Amos (3 yıkama) ve Amos-modifiye (1 wash) T ve B CDC: yıkamalar antikomplementer faktörleri elimine eder.
1972. AHG – CDC T (Johnson A.H.): İnsan anti-globulin eklenmesi hem düşük titredeki ve hem de in vitro olarak komplemanı fikse etmeyen antikorların antikorların tanımlanmasını sağlar.
1984. AHG – CDC B (Gebel H.M.): AHG, B hücrelerinin eksprese ettikleri yüzey immunoglobulinlerine bağlanabilir ve durumda kompleman aktive olur, YANLIŞ POZİTİF SONUÇİki renkli immunfloresans teknikle, B hücreleri önce floresansla konjugeanti-immünglobulinle işaretlenir ve böylece AHG nin yüzeyimmünglobulinlerine bağlanmasına engel olunur.
23/10/2014 6231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
1983. T ve B Flow crossmatch (FCXM) (Garavoy): alıcı serumu ile inkübasyondan sonra donör lenfositleri florokromla konjuge sekonderantikorla işaretlenir (anti-insan IgG veya IgM)
CM (2)
Anti-CD3 ve anti-CD-19 ile işaretlemeyle anti-T ve anti-B antikorları ayrı ayrı tayin edilebilir.
Antikor tipi tayin edilebilir (IgG, IgM).
Antikor tayini kompleman aktivasyonundan bağımsızdır.
CDC ‘ den 25 - 250 kez daha duyarlıdır.
Antikor bağlanması yarı kantitatif olarak ölçülebilir.
23/10/2014 6331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
ALLOANTİKORLARIN TANIMLANMASI (3)
1976. Oto antikorlar (IgG veya IgM) nedeniyle oluşan crossmatch
pozitifliğinin klinik olarak önemi yoktur;
- serumun otolog lenfositlerle absorbsiyonu
- serumun DTT ile absorbsiyonu
1999. Anti-HLA spesifikliğinin saflaştırılmış HLA antijenlerinin mikro
boncuklara kaplanarak tanımlanması (Pei R.).
2001. Anti-HLA spesifikliğinin soluble HLA antijenlerinin katı faza fikse
edilerek ELISA ile tayini (Zachary A.A.).
2003. Anti-HLA antikor spesifikliğinin tek antijenin mikro boncuklara
bağlanarak Flow sitometrede saptanması (Pei R.):
- Daha duyarlı
- Yüksek PRA mevcudiyetinde anti-HLA antikorlarının analizinin kolay
yapılabilmesi
23/10/2014 6431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Crossmatch - yöntemler
• LENFOSİTOTOKSİSİTE (Complement-dependent cytotoxicity CDC)
T HÜCRE
1. Standart (NIH)
2. Amos (Yıkama )
3. AHG (Anti-human globulin)
4. DTT (dithiothreitol, IgG, IgM antikor ayırımı)
B HÜCRE
• FLOW SİTOMETRİK
• EIA
23/10/2014 6531.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CROSSMATCH / BÖBREK NAKLİ
CDC
Negatif Crossmatch Nakil yapılabilir
Pozitif Crossmatch Kontraendikasyon
23/10/2014 6631.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CM - Lenfositotoksisite
Lenfosit (donör) + Serum (alıcı)C
+ vital boya (%5 eosin vb.)
Hücre lizisi var (LCM +)Hücre lizisi yok (LCM - )
23/10/2014 6731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
LENFOSİTOTOKSİSİTE TESTİ (CDC)
POZİTİF REAKSİYON
(LİZİS)
NEGATİFREAKSİYON
23/10/2014 6831.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
%5 lik Eosin
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak69
Acridine orange-ethidinium bromide (AO/EB)Terasaki plağında hücrelerin canlılığı ve sayısını kontrol etmek ;
Kuyucuğa 1 λl lenfosit süspansiyonu + 5 λl boya ekleBirkaç dakika sonra floresans mikroskopta canlılık ve sayı kontrolü yap
Kuyucuktaki lenfosit sayısı 100-200 arasında olmalı !
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak70
CM – DTTCM Pozitif, DTT CM Pozitif : ANTİKOR IgG
CM Pozitif, DTT CM Negatif : ANTİKOR IgM
Lenfosit + Serum (alıcı)(0.01M DTT/PBS de)
30 dk. 37º C
Sistin ( 5 dk. )
C
23/10/2014 7131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CM – flow sitometrik
Donör lenfosit + Alıcı serum30 dk
Yıkama
Goat anti-Human IgG (FITC)10 dk
CD19(PE) + CD3(PerCP)20 dk
YIKAMA ANALİZ
23/10/2014 7231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
CM - EIA
HLA antijeni + Alıcı serumu
30 dk
Yıkama
Goat anti-human IgG (alkalen fosfataz konjuge)
30 dk
Yıkama
p-nitrofenilfosfat
23/10/2014 7331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
31.NEFROLOJİ
KONGRE
Sİ 201
4
74
TRANSPLANTASYONDACDC ve Flow CM
T Flow crossmatch
NEGATİF
T Flow crossmatch
POZİTİF
T CDC crossmatch
NEGATİF
T CDC crossmatch
POZİTİF
Düşük risk
Hiperakut rejeksiyon
beklenmez
Orta derecede risk !
Hiperakut rejeksiyon
riski az
Akut rejeksiyon riski
artar
Yüksek risk !!!
Hiperakut rejeksiyon
olasılığı yüksek
23/10/2014
CDC CM, FCM, Luminex HLA antikor tarama Risk değerlendirme
Yüksek Risk Orta Düzeyde Risk Düşük Risk
T hücre CDC CM :
Pozitif
HLA DSA (MFI>5000)
T hücre FCM IgG:Pozitif
/
B hücre CDC CM:Pozitif
MICA antikoru
HLA DSA (MFI<5000)
ELISA anti HLA antikoru
Luminex Antikor
Tarama
(MFI<1000)
T hücre CDC CM :
Negatif
23/10/2014 7531.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
DSA / Antikor aracılıklı rejeksiyon
Donör spesifik antikor düzeyleri rejeksiyonunne kadar hızlı olabileceğini belirler.
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak76
50
60
70
80
90
100
Perc
en
t G
raft
Su
rviv
al
0 1 2 3 4Years after Testing
Log-rank p<0.0001
Kidney Allograft Survival 13th, 14th, 15th Workshops
No HLA Antibody (4757)
HLA Antibody (1087)
All HLA Antibodies are De novo
92%
76%
Banu Sis, MD, FRCPC-2009
23/10/2014 7731.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/201431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak78
TRANSPLANTASYON İMMÜNOLOJİSİ VE GENETİĞİ DERNEĞİ (TİGED) 5.Ci KONGRESİ
15-18 NİSAN 2015 BELEK/ANTALYA
23/10/2014 7931.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
TEŞEKKÜR EDERİM
Organ Transplantasyonu (1)
1903-1905: Modern transplantasyon vasküler anastomazla başlamıştır (Alexis Carrel)
1914-1918: 1. dünya savaşında cilt greftleri
1952: Akraba olmayan bir donörden (unrelated) insandan insana (allograft) ilk böbrek nakli yapıldı ve takılan böbrek kronik üreminin alıcıdaki immünfonksiyonları baskılaması nedeniyle kısa bir süre fonksiyon gördü (Dr. Hume at Peter Bent Bringham Hospital, Boston)
1953: HLA’nın tanımlanması (Medawar, Billingham and Brent)
1954: Tek yumurta ikizleri Ronald Herrick’den kardeşi Richard Herrick’e başarılı böbrek nakli yapıldı ve 8 yıl yaşadı (Dr. Joseph E. Murray)
1956: İlk kemik iliği transplantasyonu ikizler arasında (Alıcının nakil öncesi tüm vücuduna radyasyon uygulanmış (Dr. Donnall Thomas)
23/10/2014 8031.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
Organ Transplantasyonu (2)
1957: Azathioprine Geliştirilmesi (Hitchings and Elion)
1966: İlk başarılı pankreas nakli (Kelly and Lillehei)
1967: İlk başarılı kalp nakli (Christiaan Barnard – Güney Afrika, alıcı 54 yaşındaki erkek 18 gün sonra Pseudomonas pneumonia dan kaybedildi.
İlk başarılı karaciğer nakli (Thomas Starzl)
1981: İlk başarılı kalp/akciğer nakli (Dr. Reitz, Standford)
1983: İlk başarılı akçiğer nakli (Dr. Joel Cooper) Cyclosporin denendi
1984: National Organ Transplant Act (NOTA) yasası kongreden geçti (organ satın alınması/ organların satılması yasak ), OPTN and UNOS oluşturuldu (the scientific registry of transplant recipients)
1990: tacrolimus geliştirildi
1995: mycophenolate mofetil geliştirildi
1997: daclizumab geliştirildi
1999: Pankreatik islet cell nakli (Dr. Shapiro)
2008: Yüz nakli
23/10/2014 8131.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 8231.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
De Novo DSA düzeylerindeki artışlar greftkaybına neden oluyor
23/10/2014 8331.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak
23/10/2014 8431.NEFROLOJİ KONGRESİ 2014 BELEK -
Dr.H.Tutkak