Analysis of Tumor Cell Evolution in a Melanoma: Evidence of Mutational and Selective Pressure for...

7
Analysis of Tumor Cell Evolution in a Melanoma: Evidence of Mutational and Selective Pressure for Loss of p16 ink4 and for Microsatellite Instability Albert Ru Èbben, Philipp Babilas, Jens M. Baron, Anja Hofheinz, Mark Neis, Florian Sels, and Markus Sporkert Department of Dermatology, University Hospital of the RWTH Aachen, Germany Tumorigenesis and tumor progression can be con- sidered an evolutionary process. In order to deduce information on the mutational and selective pres- sures during melanoma progression we performed microsatellite analysis at 42 autosomal and two X-linked loci in a microdissected primary melanoma and its nine metastases. Loss of heterozygosity at locus D9S259 was the only genetic change observed in all metastases. The pattern of loss of hetero- zygosity at loci D9S162 and D9S171 within the region of common loss on chromosome 9p21 which encompasses the tumor suppressor gene p16 ink4 enabled the distinction of four genetically different tumor cell populations. Three cell lineages showed homozygous loss of the p16 ink4 gene, which evolved independently in each tumor cell population within the primary tumor. Additional allele losses could be demonstrated at markers D14S53 and DXS998. The fourth lineage did not demonstrate loss of hetero- zygosity at loci D9S162 and D9S171 and contained the wild type p16 ink4 gene but was characterized by abundant microsatellite instability. The evolutionary approach towards tumorigenesis and tumor progres- sion used in this study thus con®rms the role of p16 ink4 inactivation for melanoma progression but not for melanoma initiation; it suggests the existence of additional putative tumor suppressor genes located on 9p as well as on the long arm of chromosome 14 and shows that microsatellite instability may repre- sent an alternative pathway of tumor cell evolution in malignant melanoma. Key words: microdissection/ SSCP analysis. J Invest Dermatol 114:14±20, 2000 T umorigenesis and tumor progression can be con- sidered an evolutionary process in which mutant and more tumorigenic subpopulations are sequentially selected and derived from less tumorigenic or benign progenitor cells (Nowell, 1976). Many human tumors are the result of a set of multiple mutations (Loeb and Christians, 1996) which seem to be speci®c for the affected tissue and tumor entity. The sequence of the required mutations is known only for a few cancers such as colon cancer (Fearon and Vogelstein, 1990; Boland et al, 1995) but for most other human malignant tumors the exact number and nature of mutations has still to be determined. The main focus of current research is the identi®cation and description of mutations and the analysis of the mutation rate during the process of malignant conversion and progression. Less attention is directed towards the other determinants of tumor cell evolution such as the degree of the selective pressure, the ®tness of the selected tumor cells (Tomlinson and Bodmer, 1999), and the exact number of possible genetic pathways during tumor progres- sion. Knowledge of the main factors determining the evolutionary process in malignant tumors could be used to predict disease progression in individual patients and to evaluate the effects of speci®c treatment modalities that alter the selective and mutational pressures in the tumor microenvironment. Genetic heterogeneity within the primary tumor is indirect evidence of the mutational and selective pressures during tumorigenesis and early steps of tumor progression whereas heterogeneity between the primary tumor and its metastases elucidates the processes during later steps of malignant progression. Genetic heterogeneity re¯ects the multistep nature of the neoplastic transformation and it can be observed in many human malignancies (Shibata et al, 1992, 1993; Mirchandani et al, 1995; Fujii et al, 1996; Tollenaar et al, 1997) as well as in malignant melanoma (Wiltshire et al, 1995; Boni et al, 1998; Morita et al, 1998). Information concerning the possible pathways of tumor cell evolution can be obtained by generating a genealogic tree based on genetic markers (Dracopoli et al, 1987). In a recent study, this approach has been re®ned by analyzing colon cancers with mismatch repair de®ciency (Tsao et al, 1999). Mismatch repair de®ciency leads to multiple mutations within repetitive micro- satellite DNA. These mutations can be utilized as a molecular clock of tumor cell evolution because the noncoding microsatellite DNA does not underlie a selective pressure. It is thereby possible not only to identify individual tumor cell populations but also to determine the phylogenetic distance between individual tumor cell clones during the process of tumor cell evolution. Manuscript received March 9, 1999; revised September 17, 1999; accepted for publication September 20, 1999. Reprint requests to: Priv.-Doz. Dr. A. Ru Èbben, Hautklinik, Universita Ètsklinikum der RWTH Aachen, Pauwelsstraûe 30, 52074 Aachen, Germany. Email: [email protected] Abbreviations: CA, cytosine-adenosine; cdk, cyclin-dependent kinase; LOH, loss of heterozygosity; pRb, retinoblastoma protein; TG-SSCP, temperature-gradient single strand conformation polymorphism. 0022-202X/00/$15.00 ´ Copyright # 2000 by The Society for Investigative Dermatology, Inc. 14

Transcript of Analysis of Tumor Cell Evolution in a Melanoma: Evidence of Mutational and Selective Pressure for...

�������� � ��� ���� ��������� �� � ��������� �������� ����������� ��� ��������� � ���� � � ���� � ������� ��� � ��� ���������� �����������

������ ������ � ����� �������� ��� �� ����� ��� ��� ���� ���� ����� ������ ����� �������� �������� �����!�� �� ��!�����"#� $�%�����# �������� �� � � �&'� ��( �� )��!�#

��� �������� ��� ���� � �� ������ ��� �� �������� �� �� ���������� � � ������ �� � �� �� ��������� ������ �� � � ���������� ��� ��������� � ����� �� �� ��� �������� � �� ������ !� �� � ������ ���������� �������� �� "# ��������� ��� �!�$����%�� ���� �� � ��� ���������� � ��� � ����������� ��� ���� ����������� ���� � ��� �&������� ������� '(�#)( !�� � � ���� ������� � ���� ���� ����� ��� ����������� � ����� � � ���� � ��� ��&������� �� ���� '(�*+# ��� '(�*,* !�� �� � � ����� � ������ ���� �� � ������� (�#* ! �� ����������� � � ���� ���� ���� ���� �������

������� � � ����������� � �� ����������� ��� ������� ���� ������������ �� ���� �������� � �!�� ���&����� ���� � � � ������� ����- ! �� �������������������� �� ��� ���� ���� ���������� !�� ��

� � � ��� � ���� � ���������� ������ ������ ����� ��������� ���� �� �� %� � '*"�). ��� '$�((/� ��� � ������� ��� ��� ������� ��� ���� � ��� ��&������� �� ���� '(�*+# ��� '(�*,* ��� ���������� � !��� ���� ������� ���� ��� !�� � � ���� �&�� ���������� ��� ���������� ������������ � ���������� ���� ��� ��!� �� ���� �������� ��� ���� � �� ������� ���� �� � �� ����� � �� ���0 �� � � ��� �������� ������������ � �������� � �� ������ ��� ���� �������� ����������1 �� �������� � � �2������� ����������� �������� ���� ���� ���� ����� ��������� (� �� !��� �� �� � � ���� � � � � ������� *"��� � �!� � �� ��� ���������� ����������� ��� �� ������ �� ���� ������ ��� !�� � ���� ���� ����������� ��������� ��������� � �� ��� ��� ��������������� �������� � ����� � ����� ������� !" !!!

'�!���"����� �� ��!�� ���"������ (� �� (�*������� � �%��������# ���(��� � + �( !���� ��!��� ��!���"��( ������������� ��� ��,�������#����(��� �� ����%�� ���! ���� ��!���"��( �� ���"���"����� (���� -��+���� ./012� ��# �!� ��!���

��� � � ������ �� � ��� �� !������� !������� -3��� �� 4 ��������.//12 + �( ���! �� �� ���(�5( ��� � � ����(��� ������ �� ��!������#� ' � ��,��(� �� � � ��,����� !������� �� ��+ ��#��� � ��+ (�(��� ��( �� (��� (�(�� -����� �� 6�"�������.//78 ����� �� ��� .//92 ��� ��� !��� �� �� �!� !���"����!��� � � �:�(� �!��� �� ����� �� !������� �� ����� �� �������!����' � !�� ��(�� �� (����� ������( �� � � �����5(���� ��

���(������ �� !������� �� � � ���#��� �� � � !������ ��������" � � ���(��� �� !���"�� (�%����� �� ���"������� 3���������� �� ����(��� ��+���� � � �� �� �����!���� �� ��!�� (����%������ ��( �� � � ��"��� �� � � ����(��%� ��������� � � 5���� ��� � ����(��� ��!�� (���� -'�!���� �� ���!��� .///2� �� � ��:�(� �!��� �� �������� "����( ��� +�#� ����" ��!�� ���"���*

���� ;�+���"� �� � � !�� ��(���� �����!��" � � �%��������#���(��� � !���"�� ��!��� (���� �� ���� �� �����(� ����������"������ � ���%����� ������� �� �� �%������ � � ����(�� �����(�5( �����!�� !��������� � �� ����� � � ����(��%� �� !����������������� � � � ��!�� !�(���%���!���)����( �����"����# +�� � � � ���!��# ��!�� �� �����(�

�%���(� �� � � !�������� �� ����(��%� ��������� ����"��!���"����� �� ����# ����� �� ��!�� ���"������ + ����� �����"����# ���+�� � � ���!��# ��!�� �� ��� !������������(������ � � ���(����� ����" ����� ����� �� !���"�� ���"�������)����( �����"����# ��<�(�� � � !�������� ����� �� � � ��������(�������!���� �� �� (� �� �����%�� � !�# �!� !���"�(���-� ����� �� ��� .//=� .//>8 ���( ���� �� ��� .//98 ����� �� ��� .//18'������� �� ��� .//02 �� +��� �� � !���"�� !����!� -&���� ��� ����� .//98 ��� �� ��� .//?8 ������ �� ��� .//?2�@���!���� (�(���" � � �������� ��� +�#� �� ��!�� (���

�%������ (� �� ������� �# "������" � "�����"�( ���� ����� �"����( !������ - ��(����� �� ��� ./?02� @ � ��(�� ����#� � ��������( �� ��� ��5�� �# ���#��" (��� (�(��� +�� !��!��( ������ ��5(��(# -'��� �� ��� .///2� ���!��( ��������5(��(# ����� �� !������� !������� +�� � ��������%� !�(��*��������� ��� ' ��� !������� (� �� �������� �� � !���(���� (��(��� ��!�� (��� �%������ ��(���� � � �(���" !�(����������� ������ �� ������� � ����(��%� ��������� @� �� � ����# �������� �� ��#�� ������# ���%����� ��!�� (��� ���������� ��� ���� �� �����!��� � � #��"����( �����(� ���+�� ���%����� ��!�� (��� (��������" � � ���(��� �� ��!�� (��� �%�������

����(���� ��(��%�� ���( /� .///8 ��%���� �����!��� .0� .///8�((����� ��� �����(���� �����!��� =7� .///������� ��,����� ��A ���%�* ��� �� �� ������ ����������

$�%��������������! ��� �&'� ��( �� ���+�������B� >7� 9=70C��( �� )��!�#� D!���A �������������E������+� *��( ���������%������A 4�� (#�����*�������8 (��� (#(��*������� �����8

3F�� ���� �� ������#"����#8 ���� �����������!� ������8 ')*��4����!��������*"������ ��"�� ����� (����!���� ���#!��� ��!�

77==*=7=GH77HI.9�77 J 4��#��" � � =777 �# ' � ��(���# ��� @%����"���%� ��!�����"#� @(�

*"

@ � �� ����# +� ���� � ��!���� ������( � ����� �� ���(���� � ��%��������# ���(��� � � !���"�� !����!�� ' � �����!����"���! �� "����( ���������# � !���"�� !����!� ���!� �� �� � ��((����(� �� ����(����� !������� �� ����(����# �� ���"� ����������� �� � � !��!��( ������ ��5(��(# -����# �� ��� .//18 F �� �� ���.//18 ������ �� ��� .//?8 &�"�� �� ��� .//?2� &� #��� ������ � ��"����( ���������# +�� � !����!� (���� � ���� ���� �� � "�������(����� � � � �!��� �� ����! �� �������� ����" � � ���(����� !����!� ���"������� �� �������� (� �� ��!�������� �#���� �� ������#"����# -3F�2 �� !�(����������� �� ��(� ���" � ����#!����� ( �� ���(��� -����� �� ��� .//92� 3F� �� � ������!����� ��� �����"��� �" ���%����� ��!�� (��� ���������� ��� ��#�����(��� !������� (� �� ���� �� (�������� � !���(���� (��(� ����!�� ���"������� @� �� �� ��+ � ������ + �( �������� ���"�� ���!�� ���������� "�� �� ��� � �� ����(��� �� + �( !��������%��%� +�� ��� ����(���� @ � �� ����# +� �%� � ������� �����!���3F� �� !������� �� ����!�# ����������� !�(����������� ��(� � ���%�(�� ��� ���+�# ���"�����" !����!�� &� ����!�� � �� � � �������(���� (��� � � ��!�� (���� � ���� �%� �� ���" ��!� ���((�!����� � ���5(��� �!��� �� ����(��� �� +��� �� �����(�������(����� !������� ����" ��!�� ���"������� + �( (���� ���������� �� !������ � � ��"��� �� "����( ���������# ����" ��!�����"������� �� �����!�� � � �!��� �� "����( �����"����# � � ����!��# ��+��� �� �!���������� �� �������� � "�����"�( ���� ��<�(��"��!�� (��� �%������ � � � ���#��� ������� �� �� ����!��� � �� #��"����( �����(� ���+�� "����(���# �������� ��!�� (��������������

��'D�@�3� �� �D'�F �

������� ��� �������� ���� ��������� @ ./?0 � ���"� ������!����!� �����:�!����# > (! � ���!���� +�� � %����(�� � �(���� ��.9!! + �( ������# � �+�� � ��������� !��������� �� ��� !��"� +����!�%�� ���! � � ��" � ������! �� � C1*#*��� ��!��� ������� &�� � ? #�� � ������ ��%������ ��" � (������� !��������� �� � � ��" � ��!� � ����:�����# �#!� ��� !��������� �� �� "�����( !��������� + �( ��� �� � ����� �� � � ������� &� +��� ���� �� ���#�� ������ �� � � ���!��# ��!���� � ��������� !���������� ���� �� � � ��" � (������� !��������� �� +��� �� � ��#!� ��� �� "�����( !��������� �# !�(����������� ���#!����� ( �����(��� -�4�2�

��� ����������� ��� '3� �2� ������ �� +�� �:���(��� ���!���!���*5:�� �����5*�!������ ������ ���(�!��� �� ���! � �!��������� +�� ������� ���! .7 (���(���%� ������ ��(���� .7�! � �(�+ ��� �� ���! � � ���!��# ��!�� +�� �:���(��� ����� !�(�������(������(�������(��� +�� ������!�� � .7�! � �(� �������5���� ��������(���� ���" �� ���%� ��� ��(��" �� � � (���� �� ���%�����# ���(�����-'������ �� ��� .//12� &�� � �� ��( �,�� +� �������� ��"��� �� ��������(�����" �����:�!����# 9777K.7777 !���"�� (����� ' � ���(�!��+��� ��"����� +�� ��������� ; �� � � �� +�� ������ ���" � �L��"�!� '����� ;�� -L���"�� ������ )��!�#2 �((����" �� � �!����(�����M� ��(�!!�������� �� ������� ���! !��������� +�������� � .77�� �� �=F����� �� �� ������� ���! !�(�������(��� �����+�� ������ � 97�� �� �=F�����

��� ���������� �������� �� ���! � � !��������� +�� ���#��� �� CC!�(����������� ��(� + �( +��� ( ��� � ����� �� ���#�� � � ��"�� ��(�!!� ���� � !����!� � � � � ��� ��! �� ( ��!���!� / � ������ ��+��� �� �� �(��� � � "��!� ��� ���� �� ������#"����# �� ����! -���� �2� �� ���! � � !�(�������(��� ���!��# ��!�� +�� ���#��� ��# ��� ���(�5(������ ������� �4� +�� �������� !�(����������� ���!��� -������( )����(�� ����%����� �32 �� +�� ���!��� ������� 9� +�� ��"�:�"��-)����� ������ ���(�2 +�� ������!�� ���" � 5�� ���!�� (�(������� ��.�9��� �4� +�� ��� � � ����� %���!� �� 97�� +�� =�9$ �� � � '�,*���#!����� �!���'�, )��� -����� D�!��� ��( � ��"����(�� �������+��������2 �((����" �� � � !����(�����M� ��(�!!������� ->9 (#(���A.!� 99�4� .!� 0=�4� .!� /C�42 ���" � � �� ' ��!�� 4#(��� C?7-����� D�!��2� �4� +�� �� ���! !��������� +�� ������!�� ���" .K=�� �� � � �� ������� + ����� �4� +�� �� ���! !�(�������(�������� ����� =K9�� �� �� ������� ��� ��( ����#��4� �����(�� +��� ���#��� � � ��� �������� +�#�� ��� ��!���� +���

5��� �(����� �# ��!��������*"������ ��"�� ����� (����!���� ���#*!��� ��! -')*��4�2 ���#���� ' �� ��( �,�� ����+� � � ��!�������� ��3F� �� +��� �� � � %����������� �� !������� +�� � � � �!���5����������%� �� (����� �# !�(����������� ���������#� ')*��4� ���#��� +��

������!�� �� ���%�����# ���(����� -����� �� ��� .//92� ����<#� >�9�� ����( �4� �����(� +��� !�:�� +�� � ���� ������� (�����" >�� �� /9N���!�!���� .7!� ��F�� 7�79N ���!�� ��� ���� �� 7�79N :#���(#���� ' � !�:���� +�� �������� �� .77�4 ��� 9!�� ������# ( ����� ��(� ��� >!� �� � � 5���� � � ��"�� +��� �� � �������� ���(���� ������"��� D��(���� ������ +�� � ����� ��!�������� "������ ���! � � (�� ��� ��� � ���� ��"�" ���! ./�4 �� =>�4 +�� ������!�� � � 7�9N �#������"�� !����: -�' ���( �!� ���%��� ��2 �� >776 ��� >�9 ���" �(�!!��(����# �%������� ��!��������*"������ �������� "�� ���(���� ��������%�(� - @�)D� '))D �#���!� ������ )��!�#2� ��(���( �(��� +���%��������� �# ���%�� �����"� �� ����� �+� �������� �4� ����#� �� �+�')*��4� ���#��� +��� �����!�� +�� ��( ��!��� � �+�" 3F� ������ �� ���� ��� �4� �� ')*��4� ������(��� � ��������� ���������4� +�� ������!�� +�� �� ���!�� ������� 9� +�� ��"�:�"�� � ������� (�5�! 3F� � � ��� ��!���� �# (�%������ ��,��(�" "�� ���#����' ��� �4� �����(�� +��� ����(��# ������� ��� � #�� !�!���� ����"���(���� ������ ���" � � )�'4 .977 ����(� ������" ��,��(�� -)�'4�;������ )��!�#2� ���� +��� %��������� ����� �(������ �� � �!�!����� +�� � �����"�:�"�� ������# -��� ��"��� �� ��!�)��!�#2 (���"���� �� ��������� ����:����� ���" � � � �(��( �!���!���(�(� �#���! -D43 ����(��� �#���!� �!��� �!� ��!�(��� $������� �+���2� 4 �!���!���(�(� +�� ��(����� �G*��# 5�!� -;���� '*!��*)2� ' � ��!� !�!����� +��� ���� �� #�������� +�� � <�����(��*������� -4�2.7*���"��(������� -)����2 ������ �� �:(���� �4� ������(�� + �( �����# �((�!����� ����" �4� ���!���!���*5:�� ������ ���(�!��� �#���������� +�� ������!�� ��������"�� (������� -9� ��4� 7�.N � �2 ��� C �� 97�4� ����� +�� �"-.� ��4� 7�.N � �� 97�4� .9!�2� #���������� +�� ��!�������� +�� � ���<�����(�� ������# (���"���� �� ��������� ����:������

�������� �������� � � � ������� ���� D:� . �� � � ����� "�� +���!���5�� �# �4� +�� � � ���!�� ����A 9��)4�)4�'))�)*44''4))>�� 9�4'�444�44'))�'4))4>�� + �( "�%�� ���� �� ������(� �� .C. �� ��"� � �����" ��!�������� +�� 17�4� D:� = +���!���5�� � �+� �%�������" ���"!��� �� .?= �� �� ./C �� ��"� ���"� � �����+�" ���!�� �����A 9�'))4�))'4�')�')�'))))>��9�)4�'4)4)4�4)'44�)4>�� �� 9�))�4�4)4'))'))'*)4'>�� 9�'44'4�44')�)))�44'>�� ' � �����" ��!������������� +��� 17�4 �� 9?�4 �� � � ���!�� (�(������� +�� .�9��� �4�+�� ������!�� +�� >9 (#(��� � � ����� %���!� �� 97 �� +�� =�9$ �� � �'�,*���#!����� �!���'�, )��� �((����" �� � � !����(�����M���(�!!������� �� � � �4� �����(�� +��� ���#��� �# ')*��4����#��� �� ���(����� �������

�������� � ���&����� ���� � � � ������� ���� 4�!������%�!�������: �4� +�� ������!�� � ����� �� ��!������� �!��#"��� ������ � � ����� "��� ' � ./C �� �����(� �� �:� = +�� (��!���5�� +�� ���� �� � � ��� �� "��� ��� �!���5(���� �� �:� > �� � � ��� �� "�� +����� � � ���!�� ���� G���=7� G���.0 -������( )����(�2 + �( "�%������ �� � =?/ �� �����(�� ' � 5�� ���!�� (�(������� +�� .�9��� @����� �� �!����# �4� �����(�� �� �,��� ,�����#� � � ����� ���+�� � ����!��� ��� � � ��� �� "�� �� � � ����� "�� +�� ������� �� >A.-4�� *�2� �4� +�� ������!�� +�� >9 (#(��� ���" � �����"��!�������� �� 9?�4�

�D�$3'�

��� ���������� �������� � � � ���������� ' � !��������� ��� � ������ +��� �(����� �# ')*��4� ���#��� ��� 3F� �� ���!�(����������� ���������# �� CC !�(����������� ��(�� 3F� +��(�5�!�� �# ���#��� � � (�%������ ��,��(�" "������(�5(��# �� � � �!���5�� �� +�� ���� �� ������ �#���� �� ���� #���������� +�� � -4�2.7*���"��(��������4��� � # �:�!���5�� � � !�� ��� ����� ')*��4� ���#��� ��

!�(����������� /�.1= �����(�� ���� �����# �%�������" ����-4�� #�2 + �( (���������� �� � � �+� ������� �� ��������!���(���� ���� -4�� ##2� ' � !�(����������� ��(�� /�.1= +�� ������#"��� � �� ������� ���! ��!�� ���!���*5:�������5*�!������ ������ -�.� �=2 �� � � ������� 3F� �� � ������� �� �" �� !���(���� ���� +�� ���� � !��������� �.� + ������ � �!����� ������ +�� ���� � !��������� �=�4��� � #-#2 � �+� � �� ������� �� ��+�� !���(���� ���� +���

�!���5�� +�� �" �� ��5(��(# �# � � �4� ���(��� � ��!� (����-�=2� ' � ��"��� �� � �� ���� ���!�� �� %��# ������" � � �,�����# �� � � �� ���"����" ���! ���!���*5:�� ������ -�.������ �=2�

6F3� ..C� �F� . ���$��O =777 '$�F� 4D33 D6F3$'@F� @� �D3��F�� *)

��(����������� ���������# (���� �� %��������� �# ��� ��( �,����' � ��� � ��� ��!�������� �# ')*��4� ���#��� +�� !�(��*��������� /�.0. � !��������� �1 -4�� #�2 (��������� �� � !���������� �� ��+�� !���(���� +��" � � � � ��,��(�" "�� -4�� ##2�@ ��!� ��!����� �4� �!���5(���� ���! ���!���*5:�� ������

#������ ����(�5( ���� +�� � � � ��"� �� � � �:��(���!�(����������� �� �� ��!�������� �# ���� �� ���� #����������-4�� #�2� @����������� �� ')*��4� ���#��� +�� ���� ��������� �#� ��� ����(�5( �4� �����(�� �� � � ��� ������ "������� �#')*��4� ��<�(�� � � �� ��,��(�� F � � �� �� ���

������������ �� ')*��4� ��� ������� ��,����� ��!� ���(��(��� ��"�� ����� �� !���(���� !�# ����� ������� (����!���������" ���(���� ������� + �( !�# � � !�!�( � ��� � �������� � ��!!������ � � !�(����������� ���� �� ��� !����������

����� ��� �� � � ������ ��(� +��� ����!���%� ��� 3F� ���#�������������� �.K�9 �� �0K�/ ��!�������� � ������ �� 3F�������(��� �� � � ��"�� �� (�!!� ���� � ( ��!���!� /� �� +����� � �+� ��������� ��(� �� .C�9> -.C,=C�>*,>.2 �� G�//?-G,=02� @ (������� !��������� �1 � �+�� !������� 3F� �� +��� ��!�(����������� ���������# �� �������� ��(� �(������� � %������

���� �� 5�������� � �������� ���������� ���� ����� �� "" ��� ���������� �����

���!��# !���������

�� �. �= �> �. �= �> �C �9 �1 �0 �? �/!�� H#��� 9H?0 9H?0 9H/7 .7H/7 .7H/7 ..H/7 .=H/. .=H/C .=H/C 1H/9��(�������� -��" � ��!2 ������! ������! ����� ��! ������! ����� ��! ������! �:���� �:���� �:���� ���!�(

( ��!���!��!�(����������� ��(�������� �������

.�.?0 .�== � � � �� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � 4 ?� =�.= � � � �� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � =�=.. =,>C*,>0 � � � �� � � � � @ � � � �FG0 C�.1�. � � � �� � � � � � � � � C�.0. C�.>*�.. � � � �� � � � � � � � � C�./= C,=0*,>. � � � �� �H� �H� �H� �H� @H� �H� �H� � 9�>97 9�.>*�.C � � � �� � � � � � � � � 9�.70 9,..*,.> � � � �� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� � 1�.79 1�=.�> � � � �� � � � � @ � � � 1�=/0 1,=0 � � � � � � � � @ � � � 0�9C0 0�=.*�.> � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� � D)�� 0�.=*,.. � � � � � � � � @ � � � 3�3 ?�== � � � � � � � � � � � � ?�?9 ?,=.*,== � � � � � � � � � � � � /�.1= /�==*�=. �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� @H� �H� �H� /�.0. /�=. �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� �H� /�.=1 /�=. � � � � � � � � � � � � /�=19 /�=. � � � � � � � � � � � � /�=9/ /�=. �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� /�=07 /�=. � � � �H� �H� �H� �H� �� @H� �H� �H� � .7�.1/ .7,=1*,��� � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � �)�> ..,.> � � � � � � � � @ � � � ..�=/ ..,=>�> � � � �H� �H� �H� �H� �H� �� �H� �H� � .=�1. .= � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .>�.>/ .>,.=*,.C � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .>�.9/ .>,>= � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� � .C�9> .C,=C�>*,>. �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .9�9./ .9 � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� � .9�9/ .9,.C*,��� � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .9�.70 .9,=1 � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .0�..01 .0�.>�. � � � � � � � � @ � � � .0�9=7 .0�.= � � � � � � � � @ � � � �FG=� .0,=.*,== � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � .?�C7 .?�..�=. � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H@ �H� �H� � .?�C= .?,=.�=*,=.�> � � � � � � � � @ @ � � ./�C/ ./,.=*,.>�. � � � � � � � � @ � � � ;3; ./,.>�>*,.>�C � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � =7�=0 =7�.= � � � �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� � ��4 =7,..�= � � � �� � � � � � � � � =.�=9? =.,.. � � � �H� �H� �H� �H� �H� @H@ �H� �� � @3=�� ==,.= � � � �H� �H� �H� �H� �H� @H� �H� �� � ==�=/C ==,.>�.*,��� � � � � � � � � � � �� � G�/?C :,=9*,=1 � � � � � � � � � � � � G�//? :,=0 �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� �H� @H� �H� �H� �H�

3F�H����!���%�( ��!���!� ��!�A

� � � >H.9 >H./ >H./ >H./ >H./ /H.? >H./ >H.0 �

!�(����������� ���������#H������ ��(�A

� � � 7H>C .HCC 7HCC 7HCC 7HC> =7HC> >HCC 7HC. �

��������A �H�� ������#"���8 �� �����!���%�8 �H�� ���� �� ������ �� ��+�� !���(���� ����8 �H�� ���� �� ������ �� �" �� !���(���� ����8 @� !������ ������ -!�(��������������������#28 ��� � �4�*�����(�8 � � �� ����

*+ �$ ��D� �� �� '�D �F$���3 F� @�6D�'@)�'@6D D���'F3F)O

( ��!���!��� ' � ��"��� �� "����( ���������# +�� �" ��� �!��������� �1 +�� 3F� � �� �� .? ( ��!���!� ��!� �������" ����!���%� !�(����������� ��(� �� !�(��������������������# �� =7 �� C> ���#��� !������� ��(����������� ���������#� �1 +�� (�5�!�� �# #���������� +�� � � -4�2.7 ������ ' ��� �� !��������� � �+�� ��"�5(���# ��+�� "����( ���������# +�� 3F� �� � ��� �� .9K./ ( ��!���!� ��!� ������" ����!���%�!�(����������� ��(� �� !�(����������� ���������# �� 7K> �� CC ������!�������' � ������ �� 3F� �� ��(� /�.1= �� /�.0. +�� � � �

��"�� �� (�!!� ���� � ( ��!���!� /� + �( �(�!������ � �

��!�� ���������� "�� ����� ������ � � �����(��� �� � ���"����(���# �������� ��!�� (��� ���������� � � � !����������'�!�� (���� � !��������� �. �� �> �������� ���! ��!�� (���� �!��������� �=� �CK�9� �0K�/ �# � � ���� �� � � �������� ��������� �+� !�(����������� ��(� -���� �� 4�� #2� @ (������� (���� ��!��������� �1 ��� �� ������ 3F� � � �� ��"�� ��� ������#��!�(����������� ���������# �� /�.0. -4�� # �� 4�� .2� 3F� �� ��(�� /�=9/ +�� � � ��# "����( ( �"� �����%�� � ��� !����������

��� ���������� �������� � � � � ��� � ���� ��(��������*�#��" �� � � ���!��# ��!�� +�� ������!�� � ����� �� �����"��� + �� �� � � �����%�� "����( �����"����# �%��%�� +�� � � ����!��# ��!�� �� � � � !���������� ������ �������� !�(�������(�����"��� �� � � ���!��# ������ !����!� +��� ���#��� ��� 3F��� !�(����������� ��(� /�.1=� /�.0.� /�=9/� G//?� �� .C�9>� ' ��� ��"��� -�.K�>2 �� � � ���!��# ��!�� ��%�������!�� (��� ���������� �� �������� "���#��� -���� �� 4�� .2�

�������� � � � ������� ���� 3F� � � � ��"�� �� (�!!� ����� ( ��!���!� /� ��""����� ������#"��� �� �!��#"��� ���� ��� � ����� ��!�� ���������� "��� ' � ������ �� � � ����� "�� �� � !�(�������(��� (��� ���������� �� � � ���!��# ��!�� �� +��� ��� � � !��������� +�� ���#��� �# (�!������%� !�������: �4�� �����%�����# � �+ � 4�� #� � � ��+ ,�����# �� �� ���! ���!���*5:�� ������ (���� ���� �� �%���!���5(���� �� � � �!����� �4������(� ����" !�������: �4�� ' �������� � � �4� �����(� ��� � ����� "�� +�� ( ��� �� �� �!����� � ���� � � � � (�����"�� �*� �� � ����� �� ���%�� � �� � � ��+ ,�����# �� �� (����!�!�( ���� �� ������ ��!��#"��� ���� �� � � ����� "�� (���� ��

4��� � *� ����������� ��������2 ��6 � ������� ����� � ���� �� � ������� ����� -�2 4��������� �� ���!�� ������ -�2 �4� +�� �:���(��� �� ���! ���!��# ��!�� -�.K�>2� !��������� -�1� �02 �� ����� �� � �������� ���>==� !���(���� ���� !������

4��� � #� ����� ���� � � � ��� ��� ���� � � � �������� � ��6������0�� ��� ���������� '3�� -�2 ')*��4� ���#���� -�2 ���#��� � ���,��(�" "��� - 2 (�%������ ��,��(�" "�� ������ ���� �� ���� #���������� �� � � ������� ��,��(�" "�� +�� � -4�2.7*���"��(�������8�� !���������8 �� ��!�� ���!���*5:�� ������ ���(�!��8 � ���� �� ������ -3F�28 � !������ �� ���� -!�(����������� ���������#28 �� ������� ����(�5( �� �����

4��� � .� � � ���� �&����� � ���� ���� ������������ ')*��4����#��� �� �4�*�!���5�� !�(����������� �� ������� ���! !�(��*�����(��� ������ �� � � ���!��# ��!�� -�.K>2� ���! !��������� -�0� �12 �����! � � ������M� ����� -�2� � ���� �� �� ���� -3F�28 � !������ �� �����

6F3� ..C� �F� . ���$��O =777 '$�F� 4D33 D6F3$'@F� @� �D3��F�� *,

��!�������� � � ��� ��"��� �� � � ���!��# ��!�� -�.��>2 �� +����� � ��� !��������� + �( ���� ������#�� 3F� �� � � ��(� /�.1=�� /�.0. -4�� *#2� �� ���� �� � � ����� "�� (���� �� ����(���� !��������� �1� ' � +��� �!���5(���� �� � � �*� �� "�� +����� �� � � ����(�� ,�����# �� � � ������ �� ���! � �� !����������')*��4� ���#��� �� �:�� . �� = �� � � ����� "�� +��������!�� +�� �� ���! !��������� �1 ��� ��� �� ��!�������� !������ +�� � � � ���#��� (���" ��,��(��� + �( !�" � �%� (��������� � ��������%� !�( ���! �� ����� ��(��%�����

@�4$��@F�

' � ��! �� � �� ����# +�� �� "�� ����!���� � � � !���������� ����(��%� ��������� ����" !����!� ���"������ �# � � ���#����� 3F� �� !������� "����( ��(� � �� ���!��# !����!� �� ����� !���������� ' � ������ �� 3F� �� �������� !�(����������� ��(����� � !�(�������(��� ������ ���(�!�� �� � � ���!��# ��!�� ��� � � !��������� ��%����� � �" ��"��� �� "����( �����"����# �� � ��!���' ��� ���� ����+ � � (�����(��� �� � ��!��� � #��"����( ����

�� ��!�� (��� �%������ � � � ���#��� ������ � ����"# �� � ��%��������# ���� ���(����" ���(��� �������� -4�� "2A ����!�" �!��(���� ���"� �� !���"�� !����!� � � ���� ���(��� ����#��"��"���� �� ��!�� (��� ���������� +�� � � � ���!��# ��!����� ���� �������� ����"��� � ��� ��!�������" �!��#"��� ������ � � ����� "�� �� � � ����� ( ���(������� �# !�(��������������������# �����" �� !��������� �1� '�!�� (���� +�� �!��#"������� �� � � ����� "�� (� �� �����%���� ��� � ��� ����������!�� (��� (���� -�.� �=� �>2 �# � � ������ �� 3F� �( ��!���!� /�� ���������� �0 ���!� �� ���"���� ���! �= �� ��� � ���� !�(����������� ���������# �� /�=9/� �C� �9� �?� �� �/���! �� �������� �� ����"� �� � �# ��� �� � ��� �# ����(�����!�(����������� ���������# �� � �� ��(��� @� �� ��������" �� ��� � ��� � !���( ����� (������� �� �:�����# !��������� ���"����� ���!�������� ��!�� (��� (���� � � � ���!��# ��!���' � ������ #��� ���� �� ��� ����# +�� � �� "����( ���������#

+�� � !����!� (���� � ���� ���� �� � "������ �(����� � � ��!��� �� ����! �� �����(��� �� �������� ����" � ����(��� �� !����!� ���"������� + �( (���� � � �� �������� ��(�������� � !���(���� (��(� �� ��!�� (��� �%������� ' ������!���� (���� �� �� %���5�� � ��� ����# �� +� �����:����%� "����( �����"����# +�� � ��!�� (��� ���������� ��

� � ���!��# ��!�� ��� ��# %��# ��+ ��������� ����(�����!������� � � � �������" !���������� ��� � � ��!� ����� �� +���� �������� �� ��� � � "����( ���� ������� �# 3F� ���#��� ��� ��:�(� !������!�� �� � � ��"��� �� "����( ���������# ����"��!�� ���"������ �� ��� ������!�� �� � � � #��"����( �����(����+�� "����(���# �������� ��!�� (��� �������������%��� ������ � � ��!�� (��� "�����"# �������� ����+� �� ��

���+ �����!���# (�(������ ����� �!������ ����(�� �� ��!��*�"����� �� ��!�� (��� �%������ � !���"�� !����!��' � ��!�� ���������� "�� ����� -4 ;�=H�'�.2 ��(���� �

� � � ��� ��! �� �!� ( ��!���!� / ���#� � ��# ���� � (��� (#(��(������ @� ���� �� � � (#(��*������� ����� C ��#!� �� � ��� ����� ��� ������# �� � ��� ��#���� ���������� � �� ����� � � ������� ���" � � ). � ���� ���

�� �� ���,����# ������� � !����!� (������� �� �� ���� �� �� !������ � � ������ �� ��!����� +�� ��������# !���"�� !����!� -;�!� �� ��� .//C8 )������� ��'�(���� .//02� @� �� � ������� �����%�� �� �������� � ���!��#"����( ���"�� � !����!� ��!���"������ @ � � ���#��� ��!���� ��� �������� �� �������� ( ��!���!�� ������"�!����������� � �!��#"��� ���� �� ����� �� ��� �� �����(� ��!�� (���(���� + �( �� ��+��� �������� �� �� "����(���# ��� �� �������' �� �� ���(���%� �� � �" ����(��%� �������� ��� ���� �� ����� � � ���!�� !�(���%���!�� �� �� �������� � � �!�����(� ������� ��(��%���� ��� !����!� ���"������� ' � ��(�� +��� �������� �� �� -.//?2 � �+�� � ��!���� ��(���� �� !����!��%������� �# ���#��" "����( ���5��� � ���!��# !����!���� � ��� !��������� � �# (���� ������# � !����!� + �( ����������#�� �+� �����(� ��!�� (��� ���������� � �+�" ������ ���� ��������" ��(� � /�� ��� ��" ���� �� ����� �� �����%�� ���������� � (�!!� �� �!������ ���� � !����!� ���"�������� ���!� �� �� ����"�# ����(��� � � � ���#��� ��!��� �� �� �������� � ��� (���� �� ��%�(�� !���"�� !����!� -)�����"�� ��� .//98 ����# �� ��� .//18 &�"�� �� ��� .//?2� ' �� ��������(������(# !�# � ���� �� �:������ �# � � (�(��� �� ��"������#��� +�#� ���"���� �� ��(����� ���� ����" ��!���"������ @� ����� ��!�������� � �� !������� �� ��� �� �� �%� � � ��!�����(� � (��� (#(�� (����� �� ���������� ��� ���� �� ��(��� ������� � !����!� (��� ���� -������%� �� ��� .//12� �� �� �� �������!�� � �� � � �����*(#(�� H ������ ��� +�# �� ������� �� � !������# �� !����!� (�����4����%���# �� ����� ����� � � ��!����� �� ����� ��(��%�*

��� ����" !����!� ��!���"������ ' � 5��" �� �����

!������� � ����� �� ����� �� ��� ������� +�� ��!�����!���"�� !����!� �� � � ��!�������� �� ����� !�������� �#�������( �%� �� ���(���� � �� ���� �� ����� ��(��� !�" ��������� � �������" �%�� � !����!� ��!���"����� -&������� ��� .//98 )������� �� '�(���� .//08 3�� �� ��� .//02� F � ��� �� ��� ���#��� �� �:������� �� ����� � !����!�� ���������� ���"�� �� � �+ � �� ���� �� ����� ��(��� �� !���#������(��� �� �%���%� �� !��������( ��!��� �� ���� �� ���! �� ����,����� ��� ��!�� �������� -���� �� ��� .//98 '��%� �� ��� .//02������%��� � �������( !���"�� !����!�� � � �����!��� �#���� !������ �����" �� ����� ��(��%���� ���!� �� �� �!��#"������� ��� �� � � ���� !������ -����# �� ��� .//18 F �� �� ��� .//18������ �� ��� .//?8 &�"�� �� ��� .//?2� ' � �((����(� �� �!��#"��� ���� 5�� ������ �� � � (�(��� �� � ��(����# "����(( �"� ����" ���(� � � ������# "����(���# ������� !���"�� (���(���� F�� ���� ������� � �� ����!���� �� ���� �� � � ����� "���%��%�� � � � ���#��� ��!�� ���������# � � ��� �����(�!���"�� (��� (���� �� !��� � ������� �������� � "����( �%��� �� ����� ����� � � ������ (���� �:������ �� ��� ����# ��#��(���� � �� ��"�� ��!��� +� (��� ���� ��� � �� � � ��������"����( �����" �� ����(����# � ������� +�� "��! ��� �����

!�������� ���� �� ����� ��(��� !�# ����� �� � � �������""����( �%��� @ (��� (�(�� + ��� � � "��� �%��%�� ���!���"����� ��� ������ ( ���(������� � � � !����!� �� !�����!��� �%� ��� ���#��� �# !�(�������(���� !���(���� ������������ � ��������� ��� �� �%������� ����� �� "����( ����������

4��� � "� �������� ���������� � �� � ���� ���� ��������� �� � ��������� ������� �������� �� ���� ����� �&�� �� ���� ��

*/ �$ ��D� �� �� '�D �F$���3 F� @�6D�'@)�'@6D D���'F3F)O

-����� �� 6�"������� .//72� + �( !�# ���� ����# �� � � ��!�"�� ����� ��(��%���� � !����!��@ � � ���#��� ��!��� 3F� �� !�(����������� /�=9/ �%��%��

���������# �� �!��#"��� ���� �� ������ F�� ���� � �� �������� � ����!���� �� �� �� "����� � ��� ������� ������ �� ����� ����������� ��!�� ���������� "�� �%��%�� � !����!� ���"���*��� !��� �:��� � � � � ��� ��! �� ( ��!���!� / -������ �� ���.//C8 ���" �� ��� .//98 F �� �� ��� .//18 ������ �� ��� .//?8 &�"���� ��� .//?2�' � �����*�"���%� (��� ���������� ���� �� ����� (���������

�� G�//? �� .C�9>� 3F� � � � G*( ��!���!� �!���"�� !����!� �� ��� ���%�����# �������� - ��(������� ��� ./?02� @� �� �����%�� �� �������� ���� �� � � ��(��%� �� ���������(���" G� + �( +���� (���� � �����������%� ��%���"� �� � ���!�� (��� ��� �� � �����" �� � � (��� (#(��� 3F� �� .C�9>���������# ����� � �� ����� �+� ��!�� (��� ����"�� ����!�������� �# 3F� ����(��" ������" �������� ' � "�����"�(���� ������� � � �!�����(� �� � �� "����( ( �"� �� �� �� ������#� �� �� �((����� ��# �# ( �(�� ���� ��!���� 3F� � � � ��"��! �� ( ��!���!� .C �� � (�!!� "����( ��������� � �%����(��(��!� �� �+� ������%� ���������� "�� ��(� (���� �����������A �� �� .C,.=K.> �� � � �� �� �� .C,>= -������ ����� .//02� &� (��� �:(���� � � ����������# � �� �� �� ����(�����!������� ���# � ���� � � � ���"������ �� � � ���#��� !����!��� � � ( ��� !�(����������� ��(� �� �� (�%�� ��� ( ��!���!� ��!��� ��� ��+ ��!�� ���������� "����' � �((����(� �� (��������� �������� � � (�(��� �� ��!��

(��� �%������ � ���" ���(�5( �%��������# ��� +�#� � �� ��������!��� �# � � "����( ����� �� � � ��!�� (����� ����� � ���%����!���� ��!������� �!����� �# ���(���" "����( ( �"���' �� (�(��� �� �%��������# ��� +�#� !�# ���%� �� � ����������:������� ��� � � �����%���� � �� ���� �� ����� �� ����"�#����(��� � ��!� !����!�� ��� �� ������ � �� �� (����� ���� ���%���(� ��� � � �:����(� �� �%��������# ��� +�#� �� ������%���� �# � ����# ��!�������" � ��� � ���!��# !����!���!������� �� � � ����� �� �.9 ��!�� ���������� "��� �� ���((�� (�(�!�����# +�� !�(����������� ���������# �� %�(� %������� � �� !�# �������� �������� �%��������# ��� +�#�-�����!��� �� ��� .//?2� F�� ���� ������� � �� ����!���� �� �(����� �:��� �� +� (���� � �+ � �� � � (��� ����"� �: �����"������ !�(����������� ���������# ��""����%� �� !��!��( ��������5(��(# -�,����� �� ��� .//C2 ��� �� ����� !������ �� �!��#"��� ���� �� ������ ��%��� ������ +� (��� ���� ��� � ������� �:������� � � �� ��!�� (��� ��������� !�" � �%� �����(��%���� �# �� �� !�( ���!� ��( �� ���!���� !�� #������F � � �� �� ��� �+� �����*�"���%� ��!�� (��� ���������� �� � ���#��� !����!� -�=� �02 ������� !�(����������� ���������#��� �� � ��"�5(���# ��+�� ���,��(# (�!����� �� �1� @� �� ��(���� + �� �� � �� �����%�� !�(����������� ���������# �� � � ��!�"����( ����� �� � � ���,��� �����(���� ������ ����(��� � � � (������������ �� !��������� �1 ��� �� ���(���� � �� �����(���� ������� ����� ��(��%���� !�# �� �%������# �:(���� ��( �� ������������ �������� �� �� ���%�" ���(� �� �%������ � �� ��

(������(��� �# ����(��%� ��������� D����!����"�( ������� �� ��������# ����#����� (��� (�(�� (���� � �+ � �� � �� ��!���#�� �� � "��� ���"���� ������� � � ������ !������ ���� (����� �#!��!��( ��(�"���� ��5(��(#� ' �� ���(���� � �� � � !���"���������� �� � ��!�� �� �� ����(��# (��������� �� � � ��"��� ��"����( ���������# -'�!���� �� ���!��� .///2� ' � ���� �� � �"����(���# ������� ��!�� (��� ��������� �� !��������� �1 ���!��� ������� � �� %��+ ��� !����!� �� +���� ��� ��" � � (�������"� �����" �� �1 �(,����� !��� ����(����� !������� � � � ������*�"���%� ���������� �� +�� � � 5��� �� ���! � %�������#!� ��� !���������� �� ���� �� ������ �� �� (���(���# !���!���"�� �� � � ��(����� �:�����# !��������� �� � � "�����(!��������� ���"����� ���! � � �����*�"���%� ��!�� (��� ������*���� + �( ��!�������� ���� "����( ���������#� � ��(�������%���� ��""���� � ����(��%� �������� �"���� � ������ !���������� � � � ���#��� !���"�� !����!�A � � "�����"�( ���� � �+

� �� %��# ���(�5( "����( ���������� �%� �((����� ���������# �����������# � � � �����*�"���%� ��!�� (��� ����������� ��!�������� � "������ !����# �((�� �� ����!� �� +���� �:��(� ���"�5(�� ��"��� �� ����! "����( ���������� � � ��!�� (������������ + �( �� ���������# �(,����� ���(�5( "����( ( �"���' � ��(� �� ��������� "����( ���������� � � � �����*�"���%���!�� ���������� �!����� � �� !��� ����(����� �������� �%� ������!����� �# ����(����@ ��!!��#� � � �%��������# ������( ��+���� ��!���"�����

�� ��!�� ���"������ ���� � � �� ����# (�5�!� � � ���� �� �����

��(��%���� ��� !����!� ���"������ ��� �� ��� !����!��������� � � � (��� ���#���� @� ���� ��""���� � � �:����(� ����������� ������%� ��!�� ���������� "��� ��(���� � /� �� +��� ��� � � ��" ��! �� ( ��!���!� .C �� � �+� � �� !�(��������������������# !�# �������� � ��������%� ��� +�# �� ��!�� (����%������ � !���"�� !����!�� ' � ���#��� !����!� ��( ���(������� �# � �" ��"��� �� "����( �����"����# +�� � � ����!��# ��!��� + �( �������� �� �������� ��!�� (��� ����"�� �� � !���������� ���� �� ������� +��� �� �(�����# �� ��(��� + �� ��!��������"� ���"������ �� � ���,��� ������� �� !���"��!����!�� ' � �:����(� �� !��������"� ���"������ � !���"��!����!� +���� �%� ������� �!���(����� ��� ���(�5( �!!��*� ����# �� "�� � ����# ������"��� �� !���(���� ���#��� �� ��!��������� !�" � �� �� �����������%� �� ��� ��!�� (��� (���������� � � �������

��� ��� ��� ��������� �� ���� !���" �������� �� ��� �#�$ �� ��� #�

��� ��%� &�� �� '���� �� ��%� $�(� !�� %�� ����� ���� � ����������� �

������� ������� � �� ������ � ����� �� !��� )� *���� %�� �� �� �� ������� ��

�D�D�D�4D�

�,����� )� ���� �� ���( �� ��()��( 4� 4��(��� @� ;���� �� ��"�!� �A �!��!��( ��(�"���� ����(� � (��� (��(��!� (����� �� !�(��������������������# �� � !������ � ���#��� �� +��� � �� ) � ,)� /.A?/79K?/7/�.//C

������ 4�� '��� �� � �� �� ��� � ;� �� ��A ������ !����" �� �+� ��������( ��!���!� .C ��!�� ���������� "�� ��(� � �%���� (��(��!�� -� �� ���90A9.>K9.9� .//0

������%� �� 3���� �� )������" �� ����� �� ;���� ��� P��� � �� ������ �A ' � ���*(#(�� H4��C*��� ��� +�# �� � ��(����� ��� ���,����# ������� �!����!� ��� �"������ -� �� ��� 91A9C09K9C?>� .//1

����� 4�� ���� �� �����!� � � ��������� ��� ������" ��A ��(���������#��"��5�� � � ��,��(� �� ��!�� �� ������( ������ �� ��!��� ���������� "�� ��(�����" (�����(��� (�(�� ���"������� +�� !�� .A/7=K/7/� .//9

��� �� ���� � 6���!�#�� �� ���" )� P ��" PA 4 ��!���!�� ������ ���� ����!��# (������� !����!� �� �����"����� �� (��������� +�� ������������� . *���� &��/���� ..7A=.9K=.0� .//?

��(����� �4� �� ����� �� ���" �� ��� F�� 3�A 3��� �� ������#"����# ��������!�� �� G*����� ��(� ����" ��!�� ���"������ � � ������ +�� !����!�� -� �� ��� C0A>//9KC777� ./?0

����� D�� 6�"������ �A � "����( !���� ��� (�����(��� ��!���"������ -��� 1.A09/K010� .//7

����� �� ���� 4� 4���� �� �������# � )�������� DA )����( ��%��"�(� � � �(���� �%������ �� ������ (�(��� -� �� ��� 91A.C/>K.C/0� .//1

)�����" ��� ������ ��� &����� )�� ���� �� ����� ��� ������ �&A��!��#"��� ���� �� � � �.9��� ��� 0�� �� ��� ����� "��2 ����" ��!�����"������ � � �������( !����!� ������� -� �� ��� 99A99>.K99>9�.//9

)������� ��� '�(��� ��A �(����" ��� 4 ;�=� !������� � ��������#!����!�� . +��� -� �� *�� ?/A101K10?� .//0

����# D� ������ �� ���� �3A @���,��� �������� �� ����� � �������( !����!�� .*���� &��/���� .70A>.?K>=.� .//1

������ D�� ����� �4� D�+���� �)� ;������ ��� �� )�A 3��� �� ������#"����#�� �!��#"��� �������� � /�=.K== � !����!�� ' ���� /A.>1.K.>91�.//C

;�!� �� )���� ��� &��%��*���� ��� �� �� ��A � (��� (#(�� ��"������ ���������#�%��%�� � "����� �� !�# ��!�� �#���� ) �� � =1CAC>1KCC7� .//C

3�� �O� �" ��� � � ��� �� ��A )����( ���������� �� ���*+1�� �� �9>"��� � �������( �#�������( �%��� 2�� ��/ 2������ ��� -�//� =>0A110K10=�.//0

3��� 3�� 4 ������� �4A �������� !������� � �!� (�(���� !���� ��� >97A=0/K=?1� .//1

�����!��� O� ��� �"��� 4� O�"� '� @!�!��� �� '����� �A �������� �� ��� ���.9 ��!�� ���������� "��� �� �����(���� ������ (�������� ���������# ��� � ��� �"����� �� �������( !���"�� !����!�� �� � &��/���� ��� =/7A.09K.?7� .//?

6F3� ..C� �F� . ���$��O =777 '$�F� 4D33 D6F3$'@F� @� �D3��F�� *(

���( ���� � P �" �� ������ )�� )�� �;� � ����� ;� 4��� ��� ��#*���!��A ������"����# � ������!�� ����������� �� �9> !������� � �!��������� (�(��� �/ . ����� .C0A/=K.7.� .//9

������ �� ����!��� �� ����� �� '��� ��� ;� '����� �A 4�!������ �� "����(���5��� ���+�� ���!��# !����!�� �� � ��� !��������� ��%���� "����(���������� �� (���� �%������ ����" ���"������� . *���� &��/���� ...A/./K/=C� .//?

��+��� �4A ' � (���� �%������ �� ��!�� (��� ����������� ) �� � ./CA=>K=?� ./01F �� �� ���� � � �!��� �� �� ��A ������ !����" �� ( ��!���!� ��"�� /�=.*

�== ��������" � � 4 ;�= ��(�� � !����!�� *� . -� �� 19A01=K010�.//1

���" �� ���� �� 3�Q���� 4� �� ��A 4 ��!���!� /� �������� � (������� !���"��!����!� ��!���A � � !��!�� ������� ��"�� �%��%�� !������ ������� � ���� -4 ;�=2 "��� �/ . $�/ 3��� 90A>/9KC7=� .//9

���� ��� 3�"��� �� ��� � �� 4�� �� ��A 3��� �� �:������� �� � � ���H(#(��*������������ � ������ = ��!�� ���������� "�� � !����(#��( ������ (��������� +�� �%���%� ���"� �� ��!�� ���"������� -� �� ��� 99A=0.>K=0.?� .//9

����� �� '����� 4� ���� ��� )��B�����*4�� D@A D%������� �� �*������(��%� ��!�������� "������ ��"��*����� (����!���� ���#!��� ��!���#��� �� �� ��!�������� "������ "�� ���(���� ������ ��� � � ����(��� ����6 1*%������ � (��#��!��� �(�!���� �� ���( ��K3��+�������!����� ��� . �����/��� ..A97.K971� .//9

� ����� ���+�� �3�P������������ ����(�4����( ��� �&A ���(�5( "����(���#��� �� !�(���(���( ������ ����� ����(��%� �����%����� �������� ���(������� ��� � ���#!����� ( �� ���(���� �/ . ����� .C.A9>/K9C>� .//=

� ����� � �( ������ �� 3� P�� 4������ )� ����( � �A )����( �����"����# �� � �

(*;*��� ��(�� � (�����(��� ����!�� ��� �� � ����(��(��!��� . +��� -� ��*�� ?9A.79?K.71>� .//>

'��%� 3� ������� @� 4���� O� ���� ;� D����� 'A 3��� �� �:������� �� � ����*+1�H4 ;�= "�� � (������� !���"�� !����!� (��������� +�� ��!�� (��� ������������ �� �%���%� ���"�� *� . -� �� 0CA=99K=9/� .//0

'������� ��� ����" ��� ;������* ���� ��� ��� ���!�� �� %� �� 6���� 4��4�������� 4�� ������ )�A D%���(� �� (���� ��%��"�(� � (�����(���(��(��!�� -� �� 0/A.>7CK.>.C� .//0

'�!���� @� ���!�� &A ����(���� � � !������ ���� �� (�(��A D����" � �� � ����� ���� �� +�" � � ��"� +�� !�� 9A..K.=� .///

'��� �3� '�%��� �� ����%���� �� ���� ��� ������ 3�� � ����� A 4�����(��� ����!��� (�(�� ��%��"�(�� D%���(� �� !��������"� ���"������� �/ . �����.9CA.?.9K.?=C� .///

'������ )�� ������ '4� ���� D;� ������ 3�A ��"��*���� �����(�� ��� � ��:���(��� �� �� �� ��� ���! �����5*�!������ ������ ���" � ����( *����� �� ���%�� 2���� ��4��� =7A?C1K?97� .//1

&�"�� ��� &�"�� 4� ������"���� 3� )��� �A ��!��#"��� ������� �� � � ������

�� � � �.9��� ��!��� ���������� "��� � � ������ �� �!� �������((������� !���"�� !����!�� 2� . &��/���� .>?A.>K=.� .//?

&����� )�� ���!�� ��� &������ �;� ��#+��� �;A � "����( !���� �� !����!���!���"����� ����� � ������( ������� 3��� -���/���/ -� �� .=A.>CK.C.�.//9

&���� ��� ��� ���# �� ������ �3� �� ��A ���(� %����������� �� � � (�������"������ �� ���!��# (������� !����!�A �����(���� �� ������!�(�������(��� �� (�!������%� "��!�( #����������� -� �� ��� 99A>/9CK>/90� .//9

#7 �$ ��D� �� �� '�D �F$���3 F� @�6D�'@)�'@6D D���'F3F)O