ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
Transcript of ALTERAÇÕES CITOGENÉTICAS NA DOENÇA PERIODONTAL
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
PROacute-REITORIA DE PESQUISA E POacuteS-GRADUACcedilAtildeO
PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO EM SAUacuteDE COLETIVA
MESTRADO ACADEcircMICO
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
FEIRA DE SANTANA
2012
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PAULO DE TARSO JAMBEIRO BRANDAtildeO
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de
Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva da
Universidade Estadual de Feira de
Santana como requisito para obtenccedilatildeo do
tiacutetulo de mestre em Sauacutede Coletiva
Aacuterea de concentraccedilatildeo Epidemiologia
das Doenccedilas Bucais
Orientadora Profordf Drordf Eneida de
Moraes Marciacutelio Cerqueira
Co-Orientador Prof Dr Isaac Suzart
Gomes Filho
FEIRA DE SANTANA
2012
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Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado
Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro
B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso
Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012
61 f il
Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho
Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012
1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira
Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III
Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo
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Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Data de defesa 28 de marccedilo de 2012
Banca Examinadora
_______________________________________________
Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)
_______________________________________________________
Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)
_______________________________________________
Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)
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Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse
sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza
que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente
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AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
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sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
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ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
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APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
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RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
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ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
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SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
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1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
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PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
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2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
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Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
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Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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41
Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
2
PAULO DE TARSO JAMBEIRO BRANDAtildeO
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de
Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva da
Universidade Estadual de Feira de
Santana como requisito para obtenccedilatildeo do
tiacutetulo de mestre em Sauacutede Coletiva
Aacuterea de concentraccedilatildeo Epidemiologia
das Doenccedilas Bucais
Orientadora Profordf Drordf Eneida de
Moraes Marciacutelio Cerqueira
Co-Orientador Prof Dr Isaac Suzart
Gomes Filho
FEIRA DE SANTANA
2012
3
Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado
Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro
B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso
Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012
61 f il
Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho
Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012
1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira
Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III
Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo
4
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Data de defesa 28 de marccedilo de 2012
Banca Examinadora
_______________________________________________
Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)
_______________________________________________________
Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)
_______________________________________________
Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)
5
Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse
sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza
que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente
6
AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
3
Ficha Catalograacutefica ndash Biblioteca Central Julieta Carteado
Brandatildeo Paulo de Tarso Jambeiro
B819a Alteraccedilotildees citogeneacuteticas na doenccedila periodontal Paulo de Tarso
Jambeiro Brandatildeo ndash Feira de Santana 2012
61 f il
Orientadora Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Co-orientador Isaac Suzart Gomes Filho
Dissertaccedilatildeo (mestrado) ndash Universidade Estadual de Feira de Santana
Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Sauacutede Coletiva 2012
1 Doenccedila periodontal 2 Citogeneacutetica 3 Apoptose I Cerqueira
Eneida de Moraes Marciacutelio orient II Gomes Filho Isaac Suzart III
Universidade Estadual de Feira de Santana IV Tiacutetulo
4
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Data de defesa 28 de marccedilo de 2012
Banca Examinadora
_______________________________________________
Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)
_______________________________________________________
Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)
_______________________________________________
Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)
5
Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse
sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza
que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente
6
AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
4
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo
ALTERACcedilOtildeES CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Data de defesa 28 de marccedilo de 2012
Banca Examinadora
_______________________________________________
Profa Dra Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira (UEFS)
_______________________________________________________
Profa Dra Simone Seixas da Cruz (UFRB)
_______________________________________________
Profa Dra Susie Vieira de Oliveira (UEFS)
5
Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse
sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza
que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente
6
AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
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Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
5
Dedico este trabalho a todos de minha famiacutelia entusiastas desse
sonho Especialmente aos pequenos Jorge Gabriel e Maria Luiza
que apenas com o brilho dos olhos me fizeram seguir em frente
6
AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
6
AGRADECIMENTOS
Deus por ser em minha vida Durante todo esse periacuteodo eu pude notar incriacuteveis milagres
diaacuterios e incontestaacuteveis provas de seu amor
Minha famiacutelia por ter acreditado e me apoiado O amor e a presenccedila de cada um de vocecircs
foram essenciais natildeo soacute nessa conquista mas em toda a minha vida
Meus primeiros orientadores meus pais me ensinaram o valor do estudo a importacircncia do
caraacuteter a validade da determinaccedilatildeo e o conforto do amor
Meus primeiros colegas meus irmatildeos sempre me mostraram o quatildeo importante eacute o
companheirismo a amizade e o apoio que somente o amor fraternal conhece
Minha querida Lulu onde encontro o mai desprendido e irrestrito senso de carinho e
Jorginho que nos uacuteltimos momentos dessa jornada me abrilhantou sendo essa pequenina
promessa de um grande futuro me deram o frescor da jovialidade e foram refuacutegios seguros de
meus pensamentos
Minha orientadora Eneida uma das mais determinadas e fortes mulheres que jaacute conheci
Muito obrigado pela disponibilidade pelo carinho pelas liccedilotildees de geneacutetica e de vida pelas
agradaacuteveis horas e pelos sorrisos
Meu co-orientador Isaac em quem jaacute reconheccedilo um amigo Sou muito grato pela orientaccedilatildeo
pela atenccedilatildeo por me incentivado a fazer esse curso de mestrado por ter tido o carinho de
fazer esse sonho se tornar realidade
Minha querida Professora Simone Presente em minha formaccedilatildeo desde os primoacuterdios da
graduaccedilatildeo sempre foi o mais seguro ombro nas laacutegrimas a mais cara orientaccedilatildeo e a mais
terna companhia nos momentos em que pensei fracamente
Meus grandes companheiros diaacuterios do NUFAPOM (Nuacutecleo Familiar Poacutes-moderno) Danilo
Eli Simone Ana Ricardo Leila Aline (Dinha) Maacuterlon e Luise Foram dois anos de
conquistas reconstruccedilotildees conhecimentos aproximaccedilotildees ressignificaccedilotildees dores risos
piadas brincadeiras brigas viagens pizzas (e comidas em geral) regimes enfim amores
novos e antigos que se mostram cada vez mais especiais e indispensaacuteveis Aturar minhas
variaccedilotildees de humor sempre reafirmando o seu amor por mim eacute uma coisa que vou levar
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
7
sempre comigo dentro do peito Te quero os quero cada vez mais perto de mim afinal o
amor tem dessas coisas
Todos do NUPPIIM notadamente Johelle pela ajuda inestimaacutevel Joyce pela colaboraccedilatildeo
Dona Conceiccedilatildeo pelo carinho e a Sarah e Jonleno que dia a dia foram meus companheiros e
pude ver o quatildeo valorosos colegas terei na minha classe exemplos de verdadeiros dentistas
Todos do LABGENOTOX Leonardo Rodrigo e Joseacute Roberto foram pessoas fundamentais
nesse projeto muito obrigado pela colaboraccedilatildeo
Meus amigos Si Dinha Seu Pedro Madson Silvio Tia Zoacute e Evair Minha luta diaacuteria foi um
trabalho prazeroso pelas suas companhias
Os colegas professores e funcionaacuterios do mestrado Todos de certa forma me ensinaram
algo e ajudaram a me formar mestre
Os participantes da minha pesquisa O tiacutetulo de mestre vem em complemento agrave confianccedila e
bom humor me foi dado pelos meus pacientes
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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41
Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
8
ldquoDe ferramentas tecnoloacutegicas qualquer um pode dispor
mas a cereja do bolo chama-se conteuacutedo Eacute o que todos
buscam freneticamente vossa majestade o conteuacutedo
Mas onde ele se esconde
Dentro das pessoasrdquo
Martha Medeiros
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
9
APRESENTACcedilAtildeO
A interaccedilatildeo da doenccedila periodontal com outras enfermidades ou agravos agrave sauacutede e a
sua interaccedilatildeo com os mais variados oacutergatildeos e sistemas vem sendo alvo de estudos nos uacuteltimos
anos e tem despertado o interesse da comunidade cientiacutefica pelo tema Na Universidade
Estadual de Feira de Santana (UEFS) investigaccedilotildees nessa linha de pesquisa tecircm sido
desenvolvidas principalmente pelo Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica ndash LABGENOTOX
e pelo Nuacutecleo de Pesquisa Praacutetica Integrada e Investigaccedilatildeo Multidisciplinar ndash NUPPIIM
Mais especificamente os achados que versam sobre a relaccedilatildeo entre as
periodontopatias e as alteraccedilotildees citogeneacuteticas ainda se mostram iniciais sinalizando para um
aperfeiccediloamento do meacutetodo de pesquisa que aos poucos se mostra crescente em
complexibilidade e em eficiecircncia A presente dissertaccedilatildeo intitulada ldquoALTERACcedilOtildeES
CITOGENEacuteTICAS NA DOENCcedilA PERIODONTALrdquo de autoria do mestrando Paulo de
Tarso Jambeiro Brandatildeo eacute o produto inicial de um projeto de pesquisa cliacutenica quase
experimental desenvolvido em parceria entre o LABGENOTOX e o NUPPIIM que em sua
totalidade procura avaliar epidemiologicamente atraveacutes de um estudo de intervenccedilatildeo as
frequumlecircncias de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e apoptose em
indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal e o efeito da terapia periodontal natildeo ciruacutergica nestes
endpoints
O formato de apresentaccedilatildeo deste exemplar de dissertaccedilatildeo contempla um artigo
cientiacutefico sob o tiacutetulo AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS
CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE NA DOENCcedilA PERIODONTAL apresentado no
capiacutetulo de Resultados de acordo com os criteacuterios do perioacutedico Journal of Clinical
Periodontology segundo a classificaccedilatildeo de perioacutedicos da Coordenaccedilatildeo de Aperfeiccediloamento
de Pessoal do Niacutevel Superior ndash CAPES como perioacutedico Qualis A2 em Sauacutede Coletiva
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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Oncol v 45 p 309-316 2009
WEINBERG RA RA Uma ceacutelula renegada como o cacircncer comeccedila Ciecircncia Atual
Rocco Rio de Janeiro 2000
YALDA B OFFENBACHER S COLLINS J G Diabetes as a modifier of periodontal
disease expression Periodontology 2000 V 6 n 1 p 37-49 October 1994
55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
10
RESUMO
As doenccedilas periodontais importantes problemas de sauacutede puacuteblica tecircm origem na
colonizaccedilatildeo bacteriana no epiteacutelio gengival que induz resposta tecidual ao processo
inflamatoacuterio o qual se faz acompanhar por aumento na atividade mitoacutetica propiciando
oportunidade para a ocorrecircncia de danos ao material geneacutetico que somados a outros danos
futuros podem favorecer o processo neoplaacutesico Objetivo Neste contexto objetivou-se com
o desenvolvimento do presente estudo avaliar a ocorrecircncia de danos citogeneacuteticos e apoptose
em indiviacuteduos com e sem doenccedila periodontal usando para tal o Teste de Micronuacutecleo em
ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada Meacutetodo Foram selecionados 72 indiviacuteduos que
compuseram trecircs grupos Grupo I constituiacutedo por 21 indiviacuteduos com gengivite Grupo II
formado por 24 indiviacuteduos com periodontite Grupo Controle composto por 27 indiviacuteduos
sem doenccedila periodontal Exame cliacutenico completo foi realizado para definir a condiccedilatildeo
periodontal bem como coleta de ceacutelulas esfoliadas da mucosa ceratinizada para realizaccedilatildeo do
Teste de micronuacutecleo Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi
observada diferenccedila estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre
os grupos gengivite periodontite e controle Jaacute a ocorrecircncia de apoptose foi significantemente
maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite
(plt005) e controles (plt0025) Conclusotildees Os achados demonstraram que houve diferenccedila
estatisticamente significante entre os grupos quanto agrave ocorrecircncia de apoptose apontando para
efeitos genotoacutexicos induzidos pela inflamaccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
11
ABSTRACT
Periodontal diseases an important public health problem have their origin in the bacterial
colonization in the gingival epithelium induces tissue response to inflammation which is
accompanied by increased mitotic activity providing an opportunity for the occurrence of
damage to genetic material that it added to further damage it may promote future neoplastic
process Objective In this context this study was carried out to evaluate the occurrence of
cytogenetic damage and apoptosis in patients with and without periodontal disease using the
micronucleus test in exfoliated cells of keratinized mucosa Method A sample with 72
individuals who comprised three groups Group I consisting of 21 individuals with
gingivitis Group II consisting of 24 subjects with periodontitis control group composed of
27 individuals without periodontal disease Full mouth clinical examination was performed to
define the periodontal status as well as collecting exfoliated cells from keratinized mucosa to
test frequency of micronuclei Results A total of 123301 cells were analyzed There was no
statistically significant difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups
gingivitis periodontitis and control The occurrence of apoptosis was significantly higher
among subjects with periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls
(p lt0025) Conclusions The findings demonstrated that there was a statistically significant
difference between groups regarding the occurrence of apoptosis indicative of genotoxic
effects induced by periodontal inflammation
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
REFEREcircNCIAS
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
12
SUMAacuteRIO
1 INTRODUCcedilAtildeO 13
2 REVISAtildeO DA LITERATURA 15
3 OBJETIVO 20
4 METODOLOGIA 21
41 Etapa Preparatoacuteria 21
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra 21
43 Caracterizaccedilatildeo da amostra 21
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal 22
441 Meacutetodos de diagnoacutestico 22
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal 22
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos 23
451 Obtenccedilatildeo do material para estudo Citogeneacutetico 23
452 Preparaccedilatildeo para o estudo de Micronuacutecleo 23
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo 23
454 Elaboraccedilatildeo do banco de dados 24
46 Anaacutelise estatiacutestica 24
47 Aspectos eacuteticos 24
5 RESULTADOS 26
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS 48
REFEREcircNCIAS 50
APEcircNDICE I 55
APEcircNDICE II 69
APEcircNDICE III 60
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
13
1 INTRODUCcedilAtildeO
As doenccedilas periodontais e a caacuterie dentaacuteria se constituem em importante problema de
sauacutede puacuteblica a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo A incidecircncia dessas doenccedilas estaacute
associada agraves condiccedilotildees sociais econocircmicas poliacuteticas e educacionais e natildeo exclusivamente a
um modelo unicausal envolvendo a associaccedilatildeo do biofilme bacteriano e o seu
desenvolvimento (MANUEL et al 2000 PETERSEN OGAWA 2005)
As doenccedilas periodontais satildeo altamente prevalentes e cosmopolitas Petersen e Ogawa
(2005) em estudo que objetivou fornecer uma visatildeo geral da doenccedila periodontal em adultos
com base no uacuteltimo levantamento realizado pela ONU afirmam que a presenccedila de
sangramento gengival eacute altamente prevalente em todas as regiotildees do mundo e que a doenccedila
periodontal avanccedilada afeta entre 10 a 15 da populaccedilatildeo adulta mundial Quanto agrave
gengivite isoladamente Albandar e Rams (2002) afirmam que esta enfermidade tem uma
medida de prevalecircncia da ordem de 50 a 90 na populaccedilatildeo adulta
Este problema se torna particularmente alarmante quando analisado agrave luz do contexto
soacutecio-econocircmico Segundo Petersen (2009) as doenccedilas periodontais satildeo mais prevalentes em
populaccedilotildees de paiacuteses em desenvolvimento o que aponta para a associaccedilatildeo da doenccedila com
condiccedilotildees sociais menos favorecidas
No Brasil paiacutes considerado em desenvolvimento dados do Ministeacuterio da Sauacutede do
Brasil (BRASIL 2010) relacionados agraves condiccedilotildees de sauacutede bucal dos brasileiros obtidos no
levantamento SB Brasil 2010 revelaram que a doenccedila periodontal estava presente em
proporccedilotildees que variaram de 32 a 982 na dependecircncia da faixa etaacuteria dos indiviacuteduos
afetados e que as formas mais graves de doenccedila periodontal aparecem mais significativamente
entre adutos de 35 a 44 anos com uma prevalecircncia observada de 19
Em estudo realizado por Santos e outros (2007) na cidade de Feira de Santana
incluindo 971 estudantes com idade de doze anos de escolas puacuteblicas e privadas no ano de
2002 foi mostrado que as doenccedilas periodontais incidiam em maior proporccedilatildeo entre aqueles
matriculados em escolas puacuteblicas sugerindo possiacutevel associaccedilatildeo destas doenccedilas com o niacutevel
soacutecio econocircmico
A periodontite eacute uma doenccedila inflamatoacuteria que afeta tanto o periodonto de proteccedilatildeo
tecidos gengivais como o periodonto de sustentaccedilatildeo ligamento periodontal cemento osso
alveolar vasos e tecido nervoso Tem como fatores de riscos relacionados ao seu
desenvolvimento o haacutebito de fumar niacuteveis de hormocircnios estrogecircnicos doenccedilas metaboacutelicas
como a diabetes e a osteoporose idade avanccedilada e fatores geneacuteticos (BERGSTROumlM
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
14
PREBER 1994 YALDA OFFENBACHER COLLINS 1994 GOMES-FILHO et al 2007
LIVINGSTON PARSELL POLLACK 2009)
Hart (1996) destaca que polimorfismos de genes relacionados ao surgimento da
inflamaccedilatildeo periodontal e da forma mais grave da periodontite atuam apenas na propensatildeo ao
desenvolvimento da doenccedila Estudos realizados por Kinane e Hart (2003) corroboram esses
dados apontando para a predisposiccedilatildeo hereditaacuteria da periodontite e sua associaccedilatildeo com
polimorfismos geneacuteticos Aleacutem disso maior susceptibilidade para desenvolvimento de
periodontite em indiviacuteduos com siacutendromes de origem geneacutetica foi observada por Hodge e
Michalowicl (2001)
A resposta inflamatoacuteria a danos teciduais induzidos por bacteacuterias estimula a morte
celular por apoptose como um mecanismo de proteccedilatildeo ao material geneacutetico No periodonto
todavia tais danos podem natildeo ser suficientes para desencadear a resposta apoptoacutetica e estes
virem a se somar a danos geneacuteticos futuros transformando ceacutelulas normais em neoplaacutesicas
(MUKHERJEE et al 2012 SLOAND el al 2010 SANCAR et al 2004 JARNBRING et al
2002)
Estudo desenvolvido por Michaud e outros (2008) que incluiu 48 375 homens
5720 dos quais apresentando algum tipo de cacircncer sugere associaccedilatildeo entre as doenccedilas
periodontais e cacircncer de pulmatildeo Tal associaccedilatildeo foi descrita tambeacutem por Hujoel e outros
(2003) que relataram ainda que a periodontite tambeacutem aumenta o risco de desenvolvimento de
cacircncer nos brocircnquios Tezal e outros (2007) em estudo semelhante sugerem associaccedilatildeo entre
periodontite crocircnica e cacircncer de liacutengua
O cacircncer eacute uma doenccedila geneacutetica que tem origem em alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas eou
aberraccedilotildees cromossocircmicas) afetando genes que estatildeo 1) relacionados com o controle da
proliferaccedilatildeo celular (proto-oncogenes e supressores de tumor) 2) comprometidos com o
reparo a danos no DNA (mutadores) e 3) envolvidos com a resposta apoptoacutetica
As alteraccedilotildees nos protooncogenes hras e myc e no supressor de tumor que informa a
proteiacutena p53 satildeo segundo Nogueira e outros (2004) e Souza (2006) as mais frequumlentemente
observadas em associaccedilatildeo com o cacircncer bucal
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o presente estudo se propocircs a avaliar a
ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida pela
ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem doenccedila
periodontal
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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41
Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
15
2 REVISAtildeO DA LITERATURA
A gengivite e a periodontite satildeo processos inflamatoacuterios que afetam
respectivamente o periodonto de proteccedilatildeo e o periodonto de sustentaccedilatildeo consequumlentes agrave
colonizaccedilatildeo desses tecidos por agentes bacterianos que induzem a formaccedilatildeo do biofilme
dental (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON 2005)
Classicamente a microbiota associada agrave patogecircnese da doenccedila periodontal progride
de uma populaccedilatildeo Gram-positiva para uma predominantemente Gram-negativa Dentre estas
incluem-se as bacteacuterias dos gecircneros Porphyromonas Bacteroides Fusobacterium Wolinella
Actinobacillus Capnocytophaga e Eikenella O surgimento e o desaparecimento dos tipos
bacterianos bem como a progressatildeo da doenccedila periodontal podem segundo Holt e Bramanti
(1991) depender da interaccedilatildeo fiacutesica dos colonizadores da bolsa periodontal
O evolver da doenccedila periodontal tem iniacutecio na inflamaccedilatildeo gengival e culmina na
perda dentaacuteria consequente ao comprometimento do periodonto de sustentaccedilatildeo
particularmente da reabsorccedilatildeo do tecido oacutesseo alveolar No decorrer desse processo ocorre
destruiccedilatildeo das fibras colaacutegenas gengivais que evolui para a destruiccedilatildeo do osso alveolar e das
fibras colaacutegenas do ligamento periodontal (PIHLSTROM MICHALOWICZ JOHSON
2005)
Cortelli e outros (2002) classificam a periodontite em duas formas 1) a crocircnica
caracterizada por inflamaccedilatildeo lenta e progressiva que se traduz clinicamente por inflamaccedilatildeo
gengival diminuiccedilatildeo da resistecircncia dos tecidos periodontais durante a qual haacute formaccedilatildeo de
bolsas periodontais perda de inserccedilatildeo gengival e do osso alveolar e 2) a agressiva que
progride rapidamente provocando severa perda oacutessea alveolar e consequumlente perda dos dentes
O desenvolvimento da doenccedila periodontal gengivite e periodontite estaacute intimamente
associado a haacutebitos de higiene oral de modo que a prevenccedilatildeo dessas doenccedilas tem como primo
passo a adoccedilatildeo de praacuteticas eficazes de higiene oral Tal associaccedilatildeo se deve ao fato de que a
maacute higiene oral propicia o desenvolvimento da placa bacteriana condiccedilatildeo que antecede o
desenvolvimento das doenccedilas periodontais (PAGE 1986 SHEIHAM 1988 TAKEUCHI
2003 ANAND NANDAKUMAR SHENOY 2006 NOIRI 2001 TATAKIS KUMAR
2005 OFFENBACHER et al 2007 REZENDE et al 2008)
Dentre outros fatores que tecircm sido associados agrave doenccedila periodontal destacam-se o
consumo de tabaco (FISCHER TAYLOR TILASHALSKI 2005 CURRY-CHIU 2010)
diabetes mellitus (MEALEY OATES AAP 2006) e idade avanccedilada (SCHAumlTZLE et al
2009)
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
16
Tem sido mostrado tambeacutem que a baixa renda e o baixo niacutevel de escolaridade satildeo
fatores que indiretamente contribuem para o desenvolvimento da doenccedila periodontal Estas
condiccedilotildees aleacutem de reduzirem o acesso a informaccedilotildees relacionadas agrave prevenccedilatildeo da doenccedila
reduzem o acesso a serviccedilos de sauacutede e favorecem a adoccedilatildeo de maus haacutebitos de estilo de vida
a exemplo do consumo de tabaco e limitam a adoccedilatildeo de haacutebitos saudaacuteveis de higiene
(NORDERYD HUGSON GRUSOVING 1999 GESSER PERES MARCENES 2001
MOREIRA VIANNA CANGUSSU 2007)
Permeando esse processo inclui-se ainda a resposta imune do hospedeiro que se
relaciona a fatores soacutecio-econocircmicos vez que depende do background nutricional do
indiviacuteduo e eacute influenciada tambeacutem pelo estresse e condiccedilotildees psicoloacutegicas (ALPAGOT et al
1996 NUNN 2003 DYKE DAVE 2005)
Nas uacuteltimas deacutecadas tem sido dada especial atenccedilatildeo para a associaccedilatildeo da doenccedila
periodontal com algumas doenccedilas sistecircmicas sendo alvo importante de questionamento a
relaccedilatildeo causa efeito entre elas Associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e diabetes mellitus
doenccedilas cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias foi descrita em vaacuterios
estudos Yalda Offenbacher e Collins (1994) Scannapieco (2003) Gomes-Filho e outros
(2007)
Tem sido sugerido tambeacutem que fatores geneacuteticos satildeo importantes no
desenvolvimento da infecccedilatildeo bacteriana (HODGE MICHALOWICZ 2001 BAKER
ROOPENIAN 2002 MENG et al 2007) e que alguns polimorfismos geneacuteticos envolvidos
com a resposta imune podem estar associados agrave susceptibilidade agrave periodontite agressiva
(SHIRODARIA et al 2000)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (MULTHAUPT et al 1993)
Eacute neste contexto que a possibilidade de associaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e
desenvolvimento de cacircncer tem sua plausibilidade bioloacutegica uma vez que o cacircncer resulta de
alteraccedilotildees (mutaccedilotildees gecircnicas e aberraccedilotildees cromossocircmicas) em genes que estatildeo
comprometidos com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo celular eou em genes
associados ao reparo do DNA e agrave resposta apoptoacutetica A relaccedilatildeo entre a perda da capacidade
celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo maligna se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (WEINBERG
2000)
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
17
Apreende-se portanto que a exemplo de outras doenccedilas analisadas agrave luz do
contexto multicausal veementemente defendido pela epidemiologia moderna a doenccedila
periodontal tambeacutem decorre de interaccedilotildees hospedeiroambiente Caracterizada por processo
inflamatoacuterio bacteriano cujo desenvolver estaacute na dependecircncia de variantes geneacuteticas e da
resposta imunoloacutegica do indiviacuteduo a doenccedila periodontal se mostra extremamente associada agrave
condiccedilatildeo social que por sua vez estaacute ligada a outros fatores de risco nos niacuteveis social
individual e bioloacutegico como os haacutebitos de higiene oral e de estilo de vida (Figura 1)
FIGURA 1 Modelo teoacuterico que trata da influecircncia da doenccedila periodontal no aumento das frequumlecircncias das
degeneraccedilotildees celulares
O cacircncer oral se inclui entre os dez tipos mais frequumlentes em todo o mundo e eacute
particularmente incidente nos paiacuteses em desenvolvimento (MARCHIONE 2007
WARNAKULASURIYA 2009) No Brasil o INCA apresentou uma previsatildeo de 14120
casos de cacircncer oral para o ano de 2010 (BRASIL 2009)
Esses dados ressaltam a importacircncia da adoccedilatildeo de medidas de prevenccedilatildeo dessa
doenccedila que tem seacuterias implicaccedilotildees pessoais e econocircmicas Dentre essas medidas a
identificaccedilatildeo de alteraccedilotildees geneacuteticas vem sendo considerada importante estrateacutegia permitindo
inferir risco aumentado de desenvolvimento antes que ocorram sintomas cliacutenicos
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
REFEREcircNCIAS
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
18
Dentre as ferramentas geneacuteticas utilizadas para a identificaccedilatildeo de danos
cromossocircmicos o computo de micronuacutecleos em ceacutelulas epiteliais esfoliadas eacute uma
metodologia reconhecidamente eficaz (HOLLAND et al 2008) e que tem sido amplamente
utilizada (FREITA et al 2005 HEEPCHANTREE PARATASILPIN KANGWANPONG
2005 SAILAJA et al 2006 PEREIRA et al 2008 BLOCHING et al 2008)
Micronuacutecleos satildeo estruturas que resultam de quebras cromossocircmicas ou de
cromossomos inteiros que durante a divisatildeo celular falham em sua ligaccedilatildeo ao fuso mitoacutetico e
assim natildeo satildeo incluiacutedos no nuacutecleo das ceacutelulas filhas permanecendo no citoplasma das ceacutelulas
interfaacutesicas onde satildeo observados como estruturas distintas medindo de 13 a 15 do tamanho
do nuacutecleo e apresentando estrutura e distribuiccedilatildeo cromatiacutenica similar a este (HOLLAND
2008)
A eficaacutecia do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas eacute incrementada quando
empregado segundo protocolo sugerido por Tolbert Shy e Allen (1991) e Tomas et al (2009)
o qual inclui aleacutem de micronuacutecleos o computo de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
(cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
O Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas epiteliais esfoliadas apresenta vantagens em
relaccedilatildeo a outras metodologias de avaliaccedilatildeo da ocorrecircncia de danos geneacuteticos porque
1 A teacutecnica de obtenccedilatildeo do material a ser utilizado eacute muito simples No caso do
epiteacutelio oral a obtenccedilatildeo de ceacutelulas eacute indolor e natildeo provoca risco ao indiviacuteduo
jaacute que o material utilizado eacute esteacuteril e descartaacutevel
2 O processamento do material para anaacutelise dispensa procedimentos de cultura
uma vez que a anaacutelise eacute feita em ceacutelulas interfaacutesicas o que torna a metodologia
de baixo custo passiacutevel portanto de ser utilizada em niacutevel populacional
3 A anaacutelise do material eacute simples Os micronuacutecleos satildeo vistos em preparaccedilotildees
citoloacutegicas realizadas rotineiramente e satildeo nestas facilmente observados o que
diminui o risco de erros de interpretaccedilatildeo
3 Em ceacutelulas esfoliadas os micronuacutecleos e alteraccedilotildees indicativas de apoptose
evidenciam a ocorrecircncia de danos genotoacutexicos diretamente no local em que
ocorrem informando onde um tumor poderaacute se desenvolver
Bloching e outros (2008) fizeram uso desta metodologia objetivando identificar
associaccedilatildeo entre frequumlecircncia de micronuacutecleos em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral e higiene
bucal e fatores dentais Os autores natildeo registraram diferenccedila estatiacutestica entre a ocorrecircncia
destes marcadores e a qualidade da higiene oral (pge0417) Maior frequumlecircncia de micronuacutecleos
entretanto foi observada em indiviacuteduos com periodontite grave (216permil plusmn 085) quando
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
REFEREcircNCIAS
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
50
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
19
comparados os indiviacuteduos com periodontite moderada (191permil plusmn 104) e com aqueles
apresentando discretas alteraccedilotildees do periodonto (150permil plusmn 106)
Em estudo similar DacuteAgostini e outros (2012) avaliando 43 probandos natildeo
observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com gengivite e
indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade
Avaliando a ocorrecircncia danos cromossocircmicos e alteraccedilotildees nucleares degenerativas
indicadoras de necrose e apoptose em ceacutelulas esfoliadas da mucosa oral de indiviacuteduos
portadores de periodontite crocircnica Silva (2010) descreveu frequumlecircncias significantemente
aumentadas de todos os endpoints avaliados (micronuacutecleo carioacutelise cariorreacutexis cromatina
condensada e picnose) nos portadores da doenccedila quando comparados a um grupo controle
Aleacutem desses estudos natildeo haacute outros registros na literatura abordando a ocorrecircncia de
micronuacutecleos associados agraves doenccedilas periodontais
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III
20
3 OBJETIVO
Avaliar atraveacutes do Teste de Micronuacutecleo em ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada a ocorrecircncia de alteraccedilotildees citoloacutegicas indicativas de danos cromossocircmicos e
apoptose em indiviacuteduos com doenccedila periodontal
21
4 METODOLOGIA
41 Etapa Preparatoacuteria
Foram inicialmente identificados os ambulatoacuterios de odontologia da UEFS que
prestam assistecircncia agrave comunidade Posteriormente foi realizada a divulgaccedilatildeo dos objetivos da
pesquisa para que as equipes de sauacutede bucal dos responsaacuteveis pelos ambulatoacuterios pudessem
contribuir com a investigaccedilatildeo A coleta foi feita por um uacutenico examinador previamente
treinado
42 Aacuterea do Estudo e Seleccedilatildeo da Amostra
A populaccedilatildeo do estudo foi constituiacuteda por indiviacuteduos adultos de ambos os sexos
atendidos nos ambulatoacuterios de odontologia da Universidade Estadual de Feira de Santana
onde satildeo prestados serviccedilos odontoloacutegicos a indiviacuteduos de baixo niacutevel soacutecio-econocircmico Os
indiviacuteduos foram informados sobre os objetivos da pesquisa e foram convidados a assinar o
termo de consentimento livre e esclarecido Apoacutes exame cliacutenico periodontal os indiviacuteduos
foram distribuiacutedos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada uma vez que
segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos em que
alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas
Grupo I 20 indiviacuteduos com gengivite
Grupo II 20 indiviacuteduos com periodontite
Grupo Controle 20 indiviacuteduos sem doenccedila periodontal
43 Caracterizaccedilatildeo da Amostra
Apoacutes obtenccedilatildeo do consentimento informado cada participante do estudo foi
convidado a responder mediante entrevista em horaacuterio agendado um questionaacuterio com as
seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria meacutedica haacutebitos de vida
aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a agentes genotoacutexicos
(Apecircndice I) Natildeo foram incluiacutedos no estudo os indiviacuteduos que referiram histoacuteria de
exposiccedilatildeo recente a agentes comprovadamente genotoacutexicos como radiaccedilatildeo ionizante e
consumo atual de tabaco
22
44 Diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal
441 Meacutetodos de diagnoacutestico
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal realizado por um
cirurgiatildeo-dentista treinado para tal
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas usando um periodontista experiente como referecircncia em cerca de
10 da amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade
de sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia
intraexaminador o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas
respectivamente
No exame periodontal foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem
profundidade de sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival e obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo para toda cavidade bucal Tais observaccedilotildees foram procedidas em seis diferentes
locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-vestibular disto-
lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel e registradas por
um anotador em ficha adequada (Apecircndice III) Todas as medidas foram realizadas com o
auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
442 Classificaccedilatildeo da condiccedilatildeo periodontal
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (GOMES-FILHO et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
De acordo com a presenccedila de gengivite os participantes foram identificados quando
apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem contudo
apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
23
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada de normalidade quando apoacutes o exame
periodontal natildeo foi detectado sangramento em pelo menos 25 dos siacutetios sondados ou natildeo foi
detectado um ou mais dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou
igual a 4 mm com perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3 mm no mesmo siacutetio e
presenccedila de sangramento ao estiacutemulo
45 Avaliaccedilatildeo dos Danos Citogeneacuteticos
451 Obtenccedilatildeo do Material para Estudo Citogeneacutetico
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citogeneacutetica foram
coletadas por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush
Nos indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) com o rigor de selecionar o siacutetio na pior condiccedilatildeo periodontal poreacutem com o
cuidado de observar que esta aacuterea estivesse afastada de restos radiculares eou proacuteteses
dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta de ceacutelulas foi feita nos
siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos cuidados referidos
anteriormente
452 Preparaccedilotildees para o Estudo do Micronuacutecleo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-coradas com
fast Green (1 em etanol)
453 Anaacutelise de Micronuacutecleo
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Um miacutenimo de 2000 ceacutelulas por indiviacuteduo
foi analisado Os criteacuterios de identificaccedilatildeo de micronuacutecleo adotados foram os descritos por
Sarto e outros (1987) e Tolbert Shy e Allen (1992) foram considerados micronuacutecleos
24
estruturas com distribuiccedilatildeo cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo
visualizadas no mesmo plano deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares
medindo de 15 a 13 do tamanho do nuacutecleo Somente ceacutelulas com citoplasma iacutentegro foram
computadas Ceacutelulas apresentando fenocircmenos nucleares degenerativos como carioacutelise
cariorreacutexis picnose e cromatina condensada tambeacutem foram incluiacutedas no computo assim
como aquelas que apresentaram broken-eggs
454 Elaboraccedilatildeo de Banco de Dados
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citogeneacutetica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
46 Anaacutelise Estatiacutestica
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-
variaacuteveis de interesse no estudo Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes
estatiacutesticos Qui-quadrado para avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequumlecircncias das
co-variaacuteveis supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao controle
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (BRAGANCcedilA-PEREIRA 1991) que eacute um teste de
significacircncia alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos
citogeneacuteticos quando uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia
de uma determinada aberraccedilatildeo cromossocircmica
Foi testada a hipoacutetese de trabalho em que o nuacutemero de micronuacutecleos aumentado nos
Grupos I e II eacute maior que aquele observado no grupo controle
47 Aspectos Eacuteticos
Os indiviacuteduos convidados a participarem do estudo foram selecionados entre aqueles
que espontaneamente procurarem serviccedilo especializado nas Cliacutenicas Odontoloacutegicas da UEFS
Todos os indiviacuteduos da amostra foram esclarecidos a respeito da pesquisa e tiveram total
liberdade para natildeo participar ou desistir no momento que lhes for conveniente Aqueles que
concordaram em participar do estudo assinaram Termo de Consentimento Livre e Esclarecido
25
(Apecircndice II)
A metodologia para obtenccedilatildeo das ceacutelulas da mucosa oral natildeo eacute invasiva (raspagem
superficial da mucosa) e foi realizada com material (escova endocervical) descartaacutevel que natildeo
oferece risco de lesatildeo ou contaminaccedilatildeo dos indiviacuteduos da amostra A identificaccedilatildeo das
pessoas foi mantida em sigilo e constaraacute em um banco de dados acessiacutevel apenas ao
pesquisador principal
A pesquisa jaacute foi aprovada pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da UEFS (Protocolo
1212009)
26
5 RESULTADOS
Apresentados sob a forma de artigo cientiacutefico redigido nas normas do Journal of
Clincal Periodontology
27
AVALIACcedilAtildeO DA OCORREcircNCIA DE DANOS CROMOSSOcircMICOS E APOPTOSE
NA DOENCcedilA PERIODONTAL
Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo1 Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira Isaac Suzart
Gomes-Filho 2
Autor para Correspondecircncia Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira ndash Avenida Getuacutelio
Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax 55 75
3623-0661 e-mail
eneidacerqueiragmailcom
Autor alternativo para Correspondecircncia Paulo de Tarso Jambeiro Brandatildeo ndash Avenida
Getuacutelio Vargas 379 Centro Feira de Santana Bahia Brasil CEP 44025-010 Telefonefax
55 75 3623-0661 e-mail paulojambeirogmailcom
Fonte de recursos Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientiacutefico e Tecnoloacutegico
(CNPq) e Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Cabeccedilalho Relaccedilatildeo entre doenccedila periodontal e alteraccedilotildees citoloacutegicas
1 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil 2 Departamento de Sauacutede Universidade Estadual de Feira de Santana Bahia Brasil
28
RESUMO
Introduccedilatildeo O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrecircncia de alteraccedilotildees cromossocircmicas
traduzidas por micronuacutecleos e de apoptose inferida pelo somatoacuterio de cariorreacutexis picnose e
cromatina condensada em indiviacuteduos com periodontite crocircnica gengivite e sem doenccedila
periodontal
Meacutetodo O estudo de corte transversal incluiu uma amostra de 72 indiviacuteduos de ambos os
sexos aparentemente saudaacuteveis distribuiacutedos em trecircs grupos Gengivite (n= 21) Periodontite
(n= 24) e Controle (sem doenccedila periodontal n= 27) Informaccedilotildees sobre caracteriacutesticas soacutecio
demograacuteficas sauacutede e estilo de vida foram obtidas atraveacutes de um questionaacuterio Exame cliacutenico
odontoloacutegico foi realizado para definir a condiccedilatildeo periodontal Ceacutelulas esfoliadas da mucosa
ceratinizada foram coletadas para computo de micronuacutecleos e das alteraccedilotildees nucleares
indicativas de apoptose Procedimentos de anaacutelise descritiva foram usados para comparar os
grupos As diferenccedilas na ocorrecircncia dos endpoints analisados (micronuacutecleo cariorreacutexis
picnose e cromatina condensada) foram avaliadas com o uso do teste condicional para
comparaccedilatildeo de proporccedilotildees em situaccedilatildeo de eventos raros
Resultados Um total de 123301 ceacutelulas foram analisadas Natildeo foi observada diferenccedila
estatisticamente significante na ocorrecircncia de micronuacutecleo (pgt01) entre os grupos gengivite
periodontite e controle A ocorrecircncia de apoptose foi significantemente maior entre os
indiviacuteduos com periodontite quando comparados aos indiviacuteduos com gengivite (plt005) e
controles (plt0025)
Conclusotildees Os resultados mostram que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e
periodontite natildeo estaacute relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos A maior
ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite aponta no entanto para efeitos
genotoacutexicos induzidos pela infecccedilatildeo periodontal
Palavras-chave Periodontite crocircnica gengivite micronuacutecleo apoptose
29
ABSTRACT
Introduction The aim of this study was to evaluate the occurrence of chromosomal
abnormalities through micronuclei and apoptosis demonstrated by the sum of karyorrhexis
pyknosis and chromatin condensation in individuals with chronic periodontitis gingivitis and
no periodontal disease
Method The cross-sectional study included a sample of 72 individuals of both sexes
apparently healthy divided into three groups Gingivitis (n = 21) periodontitis (n = 24) and
control (without periodontal disease n = 27) Information on sociodemographic
characteristics health and lifestyle was obtained through a questionnaire Full mouth clinical
examination was performed to define the periodontal condition Keratinized mucosa
exfoliated cells were collected for computation of micronuclei and nuclear changes indicative
of apoptosis Descriptive analysis procedures were used to compare the groups The
differences in the occurrence of endpoints analyzed (micronucleus cariorreacutexis pyknosis and
condensed chromatin) were evaluated using the conditional test to compare proportions in a
rare events situation
Results A total of 123301 cells were analyzed There was no statistically significant
difference in the occurrence of micronucleus (pgt 01) between groups gingivitis periodontitis
and control The occurrence of apoptosis was significantly higher among subjects with
periodontitis compared to subjects with gingivitis (p lt005) and controls (p lt0025)
Conclusions The results showed that the inflammatory process generated by gingivitis and
periodontitis is not related to a higher incidence of chromosomal damage The higher
incidence of apoptosis in individuals with periodontitis points however to genotoxic effects
induced by periodontal infection
Keywords Chronic periodontitis gingivitis micronuclei apoptosis
30
INTRODUCcedilAtildeO
A gengivite e a periodontite se constituem em importante problema de sauacutede puacuteblica
a despeito de serem passiacuteveis de prevenccedilatildeo Tais doenccedilas satildeo altamente prevalentes
cosmopolitas (Petersen amp Ogawa 2005 Albandar amp Rams 2002) e vem nos uacuteltimos anos
sendo associadas a vaacuterias condiccedilotildees sistecircmicas como diabetes mellitus doenccedilas
cardiovasculares artrite reumatoacuteide e infecccedilotildees respiratoacuterias (Yalda 1994 Scannapieco 2003
Gomes-Filho et al 2007)
As doenccedilas periodontais tecircm caraacuteter inflamatoacuterio induzido por bacteacuterias e afetam
tecidos da gengiva dos ligamentos periodontais do cemento osso alveolar vasos e tecido
nervoso
Processos inflamatoacuterios estatildeo associados a repetidas divisotildees celulares propiciando
assim a ocorrecircncia de erros no processo de mitose e consequentes alteraccedilotildees cromossocircmicas
que por sua vez estimulam a apoptose (Mukherjee et al 2012 Sloand el al 2010 Sancar et
al 2004)
Por eliminar ceacutelulas apresentando alteraccedilotildees em genes comprometidos com o reparo
do DNA eou com o controle da proliferaccedilatildeo e diferenciaccedilatildeo ceacutelular (proto-oncogenes e
supressores de tumor) a apoptose se constitui em um mecanismo de proteccedilatildeo contra o cacircncer
doenccedila que resulta de mutaccedilotildees gecircnicas eou cromossocircmicas envolvendo os referidos genes
Nos tecidos em constante renovaccedilatildeo a apoptose garante a homeostase tecidual sua
ocorrecircncia em frequecircncias aumentadas contudo eacute indicativa de efeitos genotoacutexicos que estatildeo
relacionados agrave iniciaccedilatildeo do processo de transformaccedilatildeo maligna (Matsumoto et al 2010
Martins et al 2009 Tolbert et al 1991 1992)
Considerando a elevada ocorrecircncia da doenccedila periodontal e das lesotildees no material
geneacutetico induzidas pela resposta inflamatoacuteria que uma vez natildeo eliminadas por apoptose
podem contribuir para o desenvolvimento do cacircncer o objetivo do presente estudo foi avaliar
a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (traduzidos como micronuacutecleos) e apoptose (inferida
pela ocorrecircncia de cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) em indiviacuteduos com e sem
doenccedila periodontal
MEacuteTODO
Protocolo de seleccedilatildeo da amostra
Os participantes desse estudo transversal foram selecionados em Feira de Santana
31
Bahia Brasil entre marccedilo e dezembro de 2011 Apoacutes o exame cliacutenico periodontal completo
os indiviacuteduos foram divididos em trecircs grupos sendo no miacutenimo vinte indiviacuteduos em cada
uma vez que segundo Au e outros (1998) este eacute o nuacutemero miacutenimo de indiviacuteduos em estudos
em que alteraccedilotildees cromossocircmicas satildeo utilizadas como biomarcas a serem analisadas O
grupo I foi composto por indiviacuteduos com gengivite O grupo II foi formado por indiviacuteduos
com periodontite E o terceiro grupo controle foi composto por indiviacuteduos sem doenccedila
periodontal
Os criteacuterios de exclusatildeo consistiram de indiviacuteduos que referiram exposiccedilatildeo recente a
fatores comprovadamente genotoacutexicos como consumo atual de tabaco e histoacuteria de exposiccedilatildeo
recente radiaccedilatildeo X
O projeto dessa pesquisa foi aprovado pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa da
Universidade Estadual de Feira de Santana (No 1212009) e todos os participantes assinaram
termo de consentimento livre e esclarecido
Entrevista e exame cliacutenico periodontal
Cada participante do estudo foi convidado a responder mediante entrevista um
questionaacuterio com as seguintes seccedilotildees identificaccedilatildeo dados soacutecio-demograacuteficos histoacuteria
meacutedica haacutebitos de vida aspectos relacionados com a sauacutede bucal e histoacuteria de exposiccedilatildeo a
agentes genotoacutexicos
Todos os participantes foram submetidos a exame cliacutenico periodontal completo
realizado por um cirurgiatildeo-dentista devidamente treinado
Neste exame foram medidos o iacutendice de sangramento agrave sondagem profundidade de
sondagem de sulcobolsa e a recessatildeo gengival Aleacutem disso foram obtidos os valores de perda
de inserccedilatildeo cliacutenica para todas as unidades dentaacuterias Tais observaccedilotildees foram procedidas em
seis diferentes locais para cada unidade dentaacuteria (disto-vestibular meacutedio-vestibular mesio-
vestibular disto-lingual meacutedio-lingual mesio-lingual) exceto para o iacutendice de placa visiacutevel
Todas as medidas foram realizadas com o auxiacutelio de uma sonda milimetrada do tipo Williams
A avaliaccedilatildeo da reprodutibilidade das medidas cliacutenicas foi feita atraveacutes de medidas
periodontais replicadas por periodontista experiente como referecircncia em cerca de 10 da
amostra O iacutendice Kappa interexaminador (plusmn1 mm) para as medidas de profundidade de
sondagem e recessatildeo foram respectivamente 080 e 089 Na concordacircncia intraexaminador
o iacutendice Kappa (plusmn1 mm) foi de 081 e 088 para estas medidas respectivamente
32
Os descritores cliacutenicos obtidos possibilitaram a classificaccedilatildeo da doenccedila periodontal em
periodontite e gengivite (Gomes-Filho et al 2005)
Foram considerados com periodontite os indiviacuteduos que apresentaram quatro ou mais
dentes com um ou mais siacutetios com profundidade de sondagem maior ou igual a 4 mm com
perda de inserccedilatildeo cliacutenica maior ou igual a 3mm no mesmo siacutetio e presenccedila de sangramento
ao estiacutemulo
No que diz respeito agrave presenccedila de gengivite os participantes foram diagnosticados
quando apresentaram pelo menos 25 dos siacutetios sangrantes apoacutes sondagem periodontal sem
contudo apresentarem os criteacuterios acima descritos para periodontite
A condiccedilatildeo periodontal foi considerada dentro da normalidade quando apoacutes o exame
periodontal o indiviacuteduo natildeo se enquadrou em nenhum dos criteacuterios acima descritos
Avaliaccedilatildeo das alteraccedilotildees citoloacutegicas
Obtenccedilatildeo do Material
Para todos os participantes as ceacutelulas destinadas agrave anaacutelise citoloacutegica foram coletadas
por raspagem gentil da mucosa ceratinizada utilizando escova do tipo cytobrush Nos
indiviacuteduos dos Grupos I e II foram coletadas ceacutelulas das aacutereas com lesatildeo (gengivite e
periodontite) nos siacutetios que apresentavam a pior condiccedilatildeo periodontal mas distantes de restos
radiculares eou proacuteteses dentaacuterias removiacuteveis Para os indiviacuteduos do grupo controle a coleta
de ceacutelulas foi feita nos siacutetios de menor profundidade de sondagem seguindo os mesmos
cuidados referidos anteriormente
Preparo e Coloraccedilatildeo
O material coletado foi transferido por esfregaccedilo para lacircmina de microscopia esteacuteril
contendo duas gotas de soro fisioloacutegico (NaCl 09) Apoacutes secagem agrave temperatura ambiente
as preparaccedilotildees foram submersas em soluccedilatildeo de metanolaacutecido aceacutetico (31) para fixaccedilatildeo
Vinte e quatro horas depois o material foi corado com o reativo de Shift e contra-corado com
fast Green (1 em etanol)
Anaacutelise Citoloacutegica
Toda anaacutelise foi realizada em teste cego em relaccedilatildeo aos dados do questionaacuterio e ao
diagnoacutestico por um uacutenico examinador experiente Para cada indiviacuteduo um miacutenimo de 2000
ceacutelulas apresentando citoplasma iacutentegro foi analisado Os criteacuterios adotados para identificaccedilatildeo
33
de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose ( de
cariorreacutexis cromatina condensada e picnose) foram os descritos por Sarto et al (1987) e
Thomas et al (2009) foram considerados micronuacutecleos estruturas com distribuiccedilatildeo
cromatiacutenica e coloraccedilatildeo igual (ou mais clara) que a do nuacutecleo visualizadas no mesmo plano
deste com limites definidos e semelhantes aos nucleares medindo de 15 a 13 do tamanho
do nuacutecleo (Figura 1a) Cariorreacutexis cromatina condensada e picnose tal como consideradas
satildeo apresentadas respectivamente na Figura 1b c e d
Figura 1 Micronuacutecleo (a) Cariorreacutexis (b) Cromatina condensada (c) picnose (d)
Anaacutelise estatiacutestica
Os dados obtidos com a aplicaccedilatildeo dos questionaacuterios e anaacutelise citoloacutegica foram
utilizados para criaccedilatildeo de um banco de dados em Excel e em SPSS versatildeo 10011
Inicialmente foi procedida a anaacutelise de distribuiccedilatildeo percentual de todas as co-variaacuteveis de
interesse ao estudo As seguintes co-variaacuteveis foram consideradas nas anaacutelises idade (le 41
anos ou gt 41 anos) sexo (masculino ou feminino) situaccedilatildeo conjugal (casadouniatildeo estaacutevel ou
solteirodivorciadoviuacutevo) niacutevel de escolaridade (le 8 anos ou gt 8 anos) renda familiar em
salaacuterio miacutenimo (le 1 salaacuterio miacutenimo ou gt 1 salaacuterio miacutenimo) densidade domiciliar (le 4 pessoas
ou gt 4 pessoas) fumante passivo (sim ou natildeo) consumo de aacutelcool (sim ou natildeo) uso de
medicamentos (sim ou natildeo) histoacuteria de cacircncer na famiacutelia (sim ou natildeo) classe social (A B C
D ou E) hipertensatildeo arterial (sim ou natildeo) diabetes (sim ou natildeo) alergia (sim ou natildeo) doenccedila
renal (sim ou natildeo) doenccedilas oacutesseas (sim ou natildeo) e praacutetica de atividade fiacutesica (sim ou natildeo)
Foram aplicados com niacutevel de significacircncia de 5 os testes estatiacutesticos Qui-quadrado para
avaliaccedilatildeo de diferenccedilas estatiacutesticas entre as frequecircncias das co-variaacuteveis categoacutericas e teste T-
Student para co-variaacuteveis contiacutenuas supracitadas para os Grupos I e II em referecircncia ao
controle A categorizaccedilatildeo das co-variaacuteveis contiacutenuas quando requerida foi feita com base na
distribuiccedilatildeo ou conforme pontos de corte identificados na literatura
A anaacutelise relativa agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos e de alteraccedilotildees indicativas de apoptose
34
entre os grupos foi realizada com o uso do teste condicional para comparaccedilatildeo de proporccedilotildees
em situaccedilotildees de eventos raros (Braganccedila-Pereira 1991) que eacute um teste de significacircncia
alternativo ao de Qui-quadrado (2) adequado agrave avaliaccedilatildeo de eventos citogeneacuteticos quando
uma grande amostra de ceacutelulas eacute necessaacuteria para detecccedilatildeo da ocorrecircncia de uma determinada
aberraccedilatildeo cromossocircmica
RESULTADOS
Foram analisadas 123301 ceacutelulas na amostra formada por 72 indiviacuteduos (19 homens
e 53 mulheres) com meacutedia de idade plusmn erro padratildeo de 41plusmn848 De acordo com o criteacuterio de
diagnoacutestico periodontal empregado 24 indiviacuteduos foram classificados com apresentando
periodontite 21 foram identificados como tendo gengivite e 27 natildeo apresentaram alteraccedilotildees
no periodonto
Na Tabela 1 satildeo apresentadas as caracteriacutesticas gerais dos indiviacuteduos de acordo com o
diagnoacutestico da condiccedilatildeo periodontal grupos periodontite gengivite e controle A comparaccedilatildeo
realizada entre os grupos controle e gengivite e os grupos controle e periodontite demonstrou
que estes satildeo homogecircneos para a grande maioria das caracteriacutesticas exceto para renda
familiar (p = 002) e densidade familiar (p = 002)
Os participantes do grupo controle apresentaram maior frequecircncia de renda familiar
menor ou igual a um salaacuterio miacutenimo (5556 x 2381) do que aqueles do grupo gengivite
Por outro lado quanto a densidade domiciliar os participantes do grupo gengivite
apresentaram maior frequumlecircncia de mais de quatro pessoas por domiciacutelio do que aqueles do
grupo controle (3810 x 1111)
Quanto agraves caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal (Tabela 2) os
grupos controle gengivite e periodontite foram homogecircneos para a maioria dos aspectos
analisados exceto para uso de fio dental (p = 003) A frequumlecircncia de natildeo uso de fio dental nos
participantes dos grupos gengivite (4762) e periodontite (4583) foi mais que o dobro
daquela observada no grupo controle (1852)
Em relaccedilatildeo aos paracircmetros cliacutenicos periodontais apenas o nuacutemero de dentes presentes
natildeo diferiu estatisticamente entre os grupos (Tabela 3)
Por apresentarem as preparaccedilotildees citoloacutegicas nuacutemero insuficiente de ceacutelulas foram
excluiacutedos da anaacutelise citoloacutegica treze indiviacuteduos trecircs do Grupo controle trecircs do Grupo I e sete
do Grupo II A anaacutelise citoloacutegica incluiu portanto vinte e um indiviacuteduos do Grupo controle
dezoito indiviacuteduos com gengivite e dezessete com periodontite
A Tabela 4 apresenta a distribuiccedilatildeo da ocorrecircncia de micronuacutecleos entre os grupos
35
controle gengivite e periodontite Natildeo foi observada diferenccedila estatisticamente significante
entre os grupos (pgt 010)
A avaliaccedilatildeo estatiacutestica da ocorrecircncia de apoptose (Tabela 5) inferida pelo somatoacuterio
de carioacuterrexis cromatina condensada e picnose revelou diferenccedila significante entre os
grupos 2= 648 GL=2 plt005 As particcedilotildees de Qui-quadrado mostram que sua ocorrecircncia
eacute significativamente maior entre os indiviacuteduos com periodontite quando comparados tanto aos
indiviacuteduos controle quanto aos indiviacuteduos apresentando gengivite (Grupo I) 2= 594
plt0025 e 2= 436 plt005 respectivamente (GL= 1) Diferenccedila estatisticamente
significante contudo natildeo foi detectada quando comparados indiviacuteduos controle e indiviacuteduos
com gengivite 2= 004 GL= 1 pgt 09
DISCUSSAtildeO
Caracteriacutesticas da amostra e aspectos metodoloacutegicos relevantes
Foram adotadas medidas objetivando diminuir o maacuteximo possiacutevel as diferenccedilas entre
os grupos de comparaccedilatildeo Desde o processo de seleccedilatildeo da amostra agrave anaacutelise dos trecircs
diferentes grupos se buscou minimizar possiacuteveis distorccedilotildees A comparabilidade intergrupos
pode ser observada na anaacutelise das caracteriacutesticas gerais da amostra na qual os grupos se
mostraram bastante homogecircneos
Os participantes foram indiviacuteduos que procuraram tratamento nas cliacutenicas de uma
universidade nas quais predomina o atendimento de pessoas de baixa renda Sabe-se que este
perfil tem influecircncia no adoecer da populaccedilatildeo por diversos aspectos jaacute debatidos (Norderyd
et al 1999 Nunn 2003 Dyke amp Dave 2005) Dentre os criteacuterios de exclusatildeo indiviacuteduos que
informaram haacutebito de fumar foram excluiacutedos da pesquisa dado o reconhecido efeito
mutagecircnico deste fator (Haveric et al 2010 Gabriel et al 2006)
Quando a avaliaccedilatildeo foi realizada em relaccedilatildeo aos aspectos periodontais para se ter a
certeza de que a distribuiccedilatildeo dos participantes do estudo estava de acordo com o diagnoacutestico
da condiccedilatildeo periodontal se pode observar claramente a diferenccedila intergrupos Os indiviacuteduos
do grupo controle tiveram a melhor condiccedilatildeo cliacutenica ao passo que aqueles dos grupos
periodontite e gengivite apresentaram sempre os piores valores dos descritores periodontais
com significacircncia estatiacutestica O uacutenico paracircmetro cliacutenico no qual os trecircs grupos se mostraram
semelhantes foi quanto ao nuacutemero de dentes presentes Este criteacuterio foi mais um adotado no
sentido de garantir a condiccedilatildeo periodontal independentemente da maior ou menor quantidade
de unidades dentaacuterias presentes
Embora todo esse cuidado tenha sido levado em consideraccedilatildeo eacute sabido da dificuldade
36
em se estabelecer um criteacuterio claro de definiccedilatildeo de gengivite e periodontite Aquele
empregado nesse estudo jaacute foi usado em outras investigaccedilotildees que relacionam a periodontite e
outros agravos agrave sauacutede (Cruz et al 2010 Passos et al 2010 Gomes-Filho et al 2010) A
literatura tem debatido muito sobre este tema mas ainda natildeo existe um consenso
Outro limite do presente estudo diz respeito ao tamanho da amostra Embora o caacutelculo
amostral tenha sido previamente realizado seguindo os criteacuterios de Au et al (1998) ao final
do processamento das lacircminas algumas preparaccedilotildees citoloacutegicas apresentaram nuacutemero
insuficiente de ceacutelulas e foram excluiacutedas da anaacutelise Desse modo a avaliaccedilatildeo final contou
com um nuacutemero menor do que aquele planejado e os achados finais podem ter sido
influenciados
Por outro lado a anaacutelise citoloacutegica feita em teste cego garantiu maior confiabilidade
aos resultados apresentados
Quanto agrave anaacutelise estatiacutestica dos dados o teste empregado para avaliaccedilatildeo das diferenccedilas
entre os grupos dos endpoints analisados eacute o mais apropriado em situaccedilotildees de eventos raros
(Braganccedila-Pereira 1991) Para evitar maior complexidade nos testes bem como a necessidade
de ajustes na anaacutelise estatiacutestica por co-variaacuteveis confundidoras a seleccedilatildeo da amostra foi feita
de modo a evitar a inclusatildeo de indiviacuteduos cujas caracteriacutesticas pudessem mascarar os dados
obtidos
Ocorrecircncia de danos cromossocircmicos (micronuacutecleos) e apoptose (sum cariorreacutexis
cromatina condensada e apoptose)
O processo inflamatoacuterio no periodonto a exemplo do que ocorre em outros tecidos
dispara uma resposta proliferativa que por sua vez propicia a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
pelo aumento da probabilidade de erros na duplicaccedilatildeo do DNA (Sloand el al 2010
Mukherjee et al 2012 Sancar et al 2004 Multhaupt et al 1993) A relaccedilatildeo entre a perda da
capacidade celular em evoluir para a morte por apoptose e o desenvolvimento do processo de
transformaccedilatildeo neoplaacutesica se deve agrave sobrevivecircncia de ceacutelulas geneticamente modificadas que
apresentam vantagem adaptativa em relaccedilatildeo agraves suas contrapartes normais (Weinberg 2000)
Eacute escasso o registro na literatura de estudos em que a ocorrecircncia de danos geneacuteticos
associados agrave doenccedila periodontal foi avaliada A frequecircncia de trocas entre cromaacutetides irmatildes
em indiviacuteduos com diferentes formas de doenccedila periodontal foi analisada por Emingil et al
(2002) Os autores natildeo detectaram diferenccedilas significantes na frequecircncia destas trocas entre
indiviacuteduos com periodontitie agressiva quando comparado agravequeles com periodontite crocircnica e
sem doenccedila periodontal
37
Efeitos genotoacutexicos do processo inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal foram
avaliados neste estudo com o uso do Teste de Micronuacutecleo empregado seguindo protocolo
diferenciado sugerido por Tolbert et al (1991 1992) e Tomas et al (2009) Com esta
metodologia aleacutem do computo de micronuacutecleos estruturas que revelam danos
cromossocircmicos aneugecircnicos e clastogecircnicos eacute realizado tambeacutem o computo de fenocircmenos
nucleares degenerativos indicadores da ocorrecircncia de apoptose (cromatina condensada
cariorreacutexis e picnose) aumentando assim a sensibilidade do teste
Os resultados obtidos neste estudo natildeo apontam para uma maior ocorrecircncia de danos
cromossocircmicos avaliados pela ocorrecircncia de micronuacutecleos consequentes ao processo
inflamatoacuterio associado agrave doenccedila periodontal Em estudo similar DacuteAgostini et al (2012)
tambeacutem natildeo observaram frequecircncias aumentadas de micronuacutecleos em indiviacuteduos com
gengivite e indiviacuteduos com periodontite em graus variados de severidade Bloching et al
(2008) no entanto descreveram maior ocorrecircncia destas estruturas em indiviacuteduos com
periodontite severa (216 plusmn 085) quando comparados os indiviacuteduos com periodontite
moderada (191 plusmn 104) e sem doenccedila periodontal (150 plusmn 106)
No presente estudo a maior ocorrecircncia de apoptose nos indiviacuteduos com periodontite
aponta para efeitos genotoacutexicos associados ao processo inflamatoacuterio e permite sugerir que
este processo possa ter mascarado a ocorrecircncia de danos cromossocircmicos por eliminaccedilatildeo das
ceacutelulas geneticamente alteradas
Por fim vale salientar que embora os achados mostrem os efeitos genotoacutexicos da
periodontite o presente estudo sinaliza para uma linha de investigaccedilatildeo importante na aacuterea de
sauacutede por avaliar concomitantemente danos cromossocircmicos e apoptose e aponta para a
necessidade de estudos adicionais sobre o tema E ainda sugere que estudos de intervenccedilatildeo
sejam conduzidos para testar o efeito do tratamento periodontal sobre a ocorrecircncia de
alteraccedilotildees nucleares degenerativas indicadoras de apoptose
CONCLUSAtildeO
De acordo com o meacutetodo empregado e diante das limitaccedilotildees do estudo os achados
obtidos sinalizam que o processo inflamatoacuterio gerado pela gengivite e periodontite natildeo estaacute
relacionado a uma maior ocorrecircncia de danos cromossocircmicos no entanto nos indiviacuteduos com
periodontite a maior ocorrecircncia de apoptose eacute indicativa dos efeitos genotoacutexicos da infecccedilatildeo
periodontal
38
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Tabela 1 ndash Caracteriacutesticas gerais dos grupos controle gengivite e periodontite (n=72)
Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Idade (anos)
le 41 Anos 12(4444) 12(5714) 038 13(5417) 048
gt 41 Anos 15(5556) 9(4286) 11(4583)
MeacutediaplusmnEP 4059plusmn520 3914plusmn458 4308plusmn490
Mediana 43 40 405
Minima-maacutexima 20-61 17-60 23-77
Sexo
Feminino 22(8148) 15(7143) 041 16(6667) 023
Masculino 5(1852) 6(2857) 8(3333)
Situaccedilatildeo conjugal
Casadouniatildeo estaacutevel 10(3846) 12(6000) 015 8(3478) 079
Solteirodivorciadoviuacutevo 16(6154) 8(4000) 15(6522)
Niacutevel de escolaridade (em
anos de estudo)
le 8 Anos 8(3077) 10(4762) 023 11(4783) 022
gt 8 Anos 18(6923) 11(5238) 12(5217)
Renda familiar (em
salaacuterio miacutenimo)
le 1 Salaacuterio miacutenimo 15(5556) 5(2381) 002 9(3750) 019
gt 1 Salaacuterio miacutenimo 12(4444) 16(7619) 15(6250)
Densidade domiciliar
le 4 Pessoas 24(8889) 13(6190) 002 17(7083) 010
gt 4 Pessoas 3(1111) 8(3810) 7(2917)
42
Ex-fumante
Natildeo 19(7037) 16(7619) 065 16(6667) 077
Sim 8(2963) 5(2381) 8(3333)
Fumante Passivo
Natildeo 21(7778) 14(6667) 039 23(9583) 006
Sim 6(2222) 7(3333) 1(417)
Consumo de aacutelcool
Natildeo 15(5516) 14(6667) 043 14(5833) 084
Sim 12(4444) 7(3333) 10(4167)
Usuaacuterio de medicamentos
Sim 16(5926) 14(6667) 060 13(5417) 071
Natildeo 11(4074) 7(3333) 11(4583)
Histoacuteria de cacircncer na
famiacutelia
Natildeo 14(5185) 13(6190) 048 18(7500) 008
Sim 13(4815) 8(3810) 6(2400)
Classe social
A 0(000) 0(000) 061 0(000) 078
B 1(370) 0(000) 2(833)
C 19(7037) 17(8095) 15(6250)
D 6(2222) 4(1905) 5(2083)
E 1(37) 0(0) 2(83)
Hipertensatildeo arterial
Natildeo 22(8148) 17(8095) 096 20(8333) 086
Sim 5(1852) 4(1905) 4(1667)
43
Diabetes
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 22(8750) 024
Sim 1(370) 1(476) 3(1250)
Alergia
Natildeo 19(7037) 14(6667) 078 21(8750) 013
Sim 8(2963) 7(3333) 3(1250)
Doenccedilas renais
Natildeo 26(9630) 20(9524) 085 23(9583) 093
Sim 1(370) 1(476) 1(417)
Doenccedilas oacutesseas
Natildeo 23(8519) 20(9524) 025 22(9167) 047
Sim 4(1481) 1(476) 2(833)
Praacutetica de atividade fiacutesica
Natildeo 19(7037) 12(5714) 045 17(7083) 097
Sim 8(2963) 9(4286) 7(2917)
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle gengivite e periodontite
Uma informaccedilatildeo perdida para os grupos controle e periodontite
Salaacuterio miacutenimo da eacutepoca de coleta de dados R$54500 (equivalente a US$30278)
44
Tabela 2 Caracteriacutesticas comportamentais relacionadas agrave sauacutede bucal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Caracteriacutesticas Controle
(27)
n()
Gengivite
(21)
n()
P Periodontite
(24)
n()
P
Frequecircncia de
escovaccedilatildeo dental ao dia
le Uma vez 0 (000) 1 (476) 1 (417)
Duas ou mais 27 (10000) 20 (9524) 025 23 (9583) 028
Uso de fio dental
Natildeo 5 (1852) 10 (4762) 11 (4583)
Sim 22 (8148) 11 (5238) 003 13 (5417) 003
Frequecircncia do uso de
fio dental (n=46)
Eventualmente 8(3636) 4(3636) 5 (3846)
Diariamente 14(6364) 7(6364) 100 8(6154) 090
Faz uso de
enxaguatoacuterio bucal
Natildeo 21 (7778) 15 (7143) 20 (8333)
Sim 6 (2222) 6 (2857) 061 4 (1667) 061
Visita perioacutedica ao
dentista
Natildeo 18 (6667) 13 (6190) 13 (5417)
Sim 9 (3333) 8 (3810) 073 11 (4583) 036
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica ple005
45
Tabela 3 Distribuiccedilatildeo das variaacuteveis relacionadas agrave condiccedilatildeo periodontal dos grupos controle
gengivite e periodontite (n=72) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Paracircmetros cliacutenicos Controle Gengivite P Periodontite P
n () n () n ()
Sangramento agrave
sondagem ()
Meacutedia plusmnEP 771plusmn144 5036plusmn276 000 4793plusmn506 000
Mediana 57 50 529
Variaccedilatildeo 0-222 2500-7500 75-100
Iacutendice de Placa
visiacutevel ()
Meacutedia plusmn EP 1098plusmn269 5814plusmn553 000 6876plusmn677 000
Mediana 568 6300 807
Variaccedilatildeo 0-5937 1018-100 384-100
Profundidade de
sondagem (mm)
Meacutedia plusmn EP 183plusmn005 221plusmn006 000 300plusmn018 000
Mediana 184 226 286
Variaccedilatildeo 127-277 153-279 187-548
Perda de inserccedilatildeo
cliacutenica (mm)
Media plusmn EP 201plusmn009 252plusmn018 001 352plusmn031 000
Mediana 192 241 295
Variaccedilatildeo 139-269 156-569 183-751
Nuacutemero de dentes
presentes (n)
Meacutedia plusmn EP 1933plusmn132 1876plusmn156 078 2020plusmn116 062
Mediana 22 19 205
Variaccedilatildeo
600-2800 6-28 6-27
46
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 1-2
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 925plusmn138 323plusmn083 000 208plusmn065 000
Mediana 8 2 0
Variaccedilatildeo 0-35 0-14 0-12
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica 3-4
mm (n)
Meacutedia plusmn EP 933plusmn105 1342plusmn144 002
945plusmn127 093
Mediana 8 14 11
Variaccedilatildeo 1-20 0-25 0-19
Nuacutemero de siacutetios
com perda de
inserccedilatildeo cliacutenica
ge5mm (n)
Meacutedia plusmn EP 111plusmn025 209plusmn044 004 87plusmn131 000
Mediana 1 2 65
Variaccedilatildeo 0-4 0-6 1-21
Nuacutemero de siacutetios
com profundidade
de sondagem igual
ou superior a 4mm
(n)
Meacutedia plusmn EP 088plusmn021 157plusmn024 004
125plusmn139 000
Mediana 0 1 900
Variaccedilatildeo 0-3 0-4 4-25
P = p valor Significacircncia estatiacutestica le 005
47
Tabela 4 Dados referentes agrave ocorrecircncia de micronuacutecleos (MN) entre os Controles Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59) Feira de Santana Bahia Brasil 2012
Grupo MN
Observados
MN
Esperados
Ceacutelulas 2
Controle (n=24) 10 1141 50112
243
GL=2
Plt010
Grupo I (n=18) 14 1006 37600
Grupo II (n=17) 9 952 35589
Trecircs informaccedilotildees perdidas
Sete informaccedilotildees perdidas
P = valor de p Significacircncia estatiacutestica le 005
Tabela 5 Dados referentes agrave apoptose (AP) entre os entre os Controles Grupo III) Grupo I
(gengivite) e Grupo II (periodontite) (n=59)
Grupo AP Ceacutel 2 Particcedilotildees do2 p GL=1
Controle (n=24) 1798 50112
684
GL=2
plt005
Grupo I x Controle = 004 pgt09
Grupo I (n=18) 1359 37600 Grupo I x Grupo II = 436 plt005
Grupo II (n=17) 1393 35589 Grupo II x Controle=594plt0025
AP= Apoptose
Ceacutel= Total de Ceacutelulas
48
6 CONSIDERACcedilOtildeES FINAIS
A ocorrecircncia de efeitos genotoacutexicos associados agrave doenccedila periodontal eacute um tema
bastante incipiente e por extensatildeo ainda controverso Foram encontrados apenas os estudos
desenvolvidos por DacuteAgostini e outros (2012) Silva (2010) e Bloching e outros (2008) os
quais mostram resultados ainda exploratoacuterios e sugerem a produccedilatildeo de novos trabalhos sobre
a temaacutetica
Nesse sentido a tentativa de desenvolver uma pesquisa de intervenccedilatildeo com seres
humanos foi idealizada e encontra-se em desenvolvimento em uma parceria do NUPPIIM
com o LABGENOTOX Nesta investigaccedilatildeo procura-se natildeo somente avaliar a distribuiccedilatildeo de
biomarcadores indicativos de danos cromossocircmicos e apoptose entre os grupos populacionais
que tem gengivite periodontite e periodonto saudaacutevel mas tambeacutem avaliar os efeitos da
terapia periodontal natildeo ciruacutergica sobre os endpoints analisados
Todavia um estudo dessa magnitude esbarra em diversos e intrigantes problemas
metodoloacutegicos Inicialmente a todos aos participantes foi assegurado aleacutem do tratamento
periodontal natildeo ciruacutergico o tratamento odontoloacutegico indicado agrave queixa principal que os levou
a procurar o serviccedilo para tal foi necessaacuterio uma grande mobilizaccedilatildeo de recursos financeiros e
humanos no sentido de sanar as mais diversas queixas odontoloacutegicas que incluiacuteam dentre
outras halitose odontalgias gengivite presenccedila de caacuterie e necessidade de exodontias
Soma-se a este fato a dificuldade de tratar uma populaccedilatildeo caracterizada com baixo
niacutevel escolar e soacutecio-econocircmico Dentre estes gargalos pode ser citado mais claramente a
dificuldade de adesatildeo agraves praacuteticas de auto-cuidado a dificuldade de locomoccedilatildeo ateacute o
ambulatoacuterio em que o tratamento era realizado o natildeo entendimento da importacircncia do
tratamento odontoloacutegico a indisponibilidade de horaacuterio para comparecer ao ambulatoacuterio e
outros que se somam corroborando agrave natildeo adesatildeo ao tratamento cliacutenico e agraves prescriccedilotildees
domeacutesticas
Aleacutem disso o curto espaccedilo de tempo e a emergecircncia da necessidade da produccedilatildeo dessa
dissertaccedilatildeo precipitaram a anaacutelise de um nuacutemero ainda pequeno de indiviacuteduos Mesmo assim
por se tratar de um estudo que procura avaliar eventos celulares raros os achados de forma
preliminar do presente trabalho transversal mostraram que a ocorrecircncia de apoptose gerada
pelo processo inflamatoacuterio nos indiviacuteduos com periodontite foi maior do que nos indiviacuteduos
com gengivite e sem doenccedila periodontal traduzindo efeitos genotoacutexicos Aleacutem disso natildeo foi
observada maior frequecircncia de danos cromossocircmicos traduzido por micronuacutecleos naqueles
indiviacuteduos com gengivite e periodontite
49
Eacute no sentido de somar agrave literatura cientiacutefica que a continuidade da pesquisa cliacutenica
quase experimental em andamento encontra seu valor maior Concernente aos avanccedilos da
epidemiologia geneacutetica que avalia os efeitos carcinogecircnicos mutagecircnicos e teratogecircnicos nas
populaccedilotildees a pesquisa de intervenccedilatildeo com seres humanos que procura avaliar os efeitos da
terapia periodontal nas alteraccedilotildees celulares degenerativas mostrar-se-aacute como uma importante
referecircncia no campo alicerccedilada nos achados preliminares do presente estudo
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55
APEcircNDICE I
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Departamento de Ciecircncias Bioloacutegicas
Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica
QUESTIONAacuteRIO DE ENTREVISTA
Data
Identificaccedilatildeo 01 Nuacutemero 02RG
03 Nome 04 Data de Nascimento
05 Idade 06 Sexo 07 Estado Civil
08 Grau de Instruccedilatildeo
( ) Analfabeto ( ) 1ordm grau ( ) 2ordm grau ( ) 3ordm grau 09 Grau de escolaridade em anos de estudo
10 Endereccedilo (Rua Av) 11 Nordm 12 Aptordm
13 Bairro 14 Cidade 15 Estado 16 CEP
17 Telefone
18 Zona
19 Cor da pele (auto referida)
( ) Preta ( )parda ( )Branca ( )Amarela ( ) Indiacutegena
20 Renda familiar ( em salaacuterios miacutenimos)
21 Nuacutemero de pessoas que residem no domiciacutelio
22 Peso _____________
24 IMC _____________
23 Altura ___________
25 Ocupaccedilatildeo Atual 26 Tempo de atividade
27 Ocupaccedilatildeo Anterior 28 Tempo de atividade
Haacutebitos de Fumar 01 Haacutebitos Tabagistas
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de Cigarro
( ) Cigarro de Palha ( ) Cigarro Industrial ( ) Cachimbo ( ) Charuto
( ( )Outros __________________________ ( )Natildeo se aplica
03 Quantidade de cigarrodia
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( ) 11 a 15 ( ) 16 a 20
( ) 21 a 30 ( )mais de 30 ( )Natildeo de aplica
04 Traga o Cigarro
( )Sim ( ) Natildeo
05 Haacute quanto tempo
fuma _______
06 Jaacute fumou
( )Natildeo ( )Sim
07 Haacute quanto tempo deixou de fumar
08 Quantos cigarros fumava
( ) 01 a 05 ( ) 06 a 10 ( )11 a 15
( )16 a 20 ( )21 a 30 ( ) mais de 30
( ) Natildeo de aplica
09 Por quanto tempo fumou
( ) menos de 6 meses ( ) 06 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) Natildeo se aplica
10 Convive com pessoa que fuma
( ) Sim ( ) Natildeo
11 Em que local convive com fumante
( ) Residecircncia ( ) Trabalho
( ) Outro local ______________________
( ) Natildeo se aplica
56
Haacutebitos de Ingerir bebidas alcooacutelicas 01 Uso de bebida alcooacutelica
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana ( ) 1 vezsemana ( ) 1
vezmecircs ( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) Natildeo se aplica
03 Tipo de bebida
( ) cachaccedila ( ) cerveja ( )vinho
( ) conhaque ( ) whisky ( )outras
___________________ ( ) natildeo se aplica
04 Haacute quanto tempo bebe
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo sabe ( ) natildeo de aplica
05 Quanto bebe
_______copos
Uso de medicamentos 01 Uso frequumlente de algum medicamento
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Frequumlecircncia do uso de medicamento
( ) diariamente ( ) 2 a 3 vezessemana
( ) 1 vezsemana ( ) 1 vezmecircs
( ) ocasionalmente ( ) raramente
( ) natildeo se aplica
03 Tempo de uso
( ) menos de 6 meses ( ) 6 meses a 1 ano
( ) 01 a 05 anos ( ) 05 a 10 anos
( ) natildeo de aplica
04 Quais
( ) antibioacutetico ( ) analgeacutesico ( ) antiinflamatoacuterio ( ) antihistamiacutenico ( ) vitamina
( ) antimicoacutetico ( ) anticonvulcionante ( ) imunodepressores ( ) antidepressivos
( ) outros
Exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo 01 Exposiccedilatildeo frequumlente agrave radiaccedilatildeo
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Tipo de radiaccedilatildeo
( ) Ionizante ( ) Natildeo se aplica 03 Frequumlecircncia de exposiccedilatildeo agrave radiaccedilatildeo
04 Tempo de exposiccedilatildeo
Exposiccedilatildeo agrave produtos genotoacutexicos 01 Exposiccedilatildeo agrave produtos toacutexicos (exceto agrotoacutexicos)
( ) Sim ( ) Natildeo
02 Quais
Antecedentes familiares 01 Cacircncer na famiacutelia
( )Sim ( ) Natildeo
02 Localizaccedilatildeo topograacutefica
( ) boca ( ) colo de uacutetero ( ) mama ( )proacutestata ( ) pele ( ) outros
57
Variaacuteveis Bioloacutegicas
Doenccedilas sistecircmicas diagnosticadas
Hipertensatildeo 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Diabetes 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Alergia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Fibrose ciacutestica 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Siacutefilis 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Asma 1( )sim 2 ( ) Natildeo
Cardiopatia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas renais 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas hepaacuteticas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas oacutesseas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Doenccedilas metaboacutelicas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Discrasias sanguiacuteneas 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Neoplasia 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Outras 1( )sim 2 ( ) Natildeo Qual
Variaacuteveis comportamentais e de estilo de vida
Faz alguma atividade fiacutesica
1 ( ) sim 2 ( ) Natildeo Qual
Qual a frequecircncia
1 ( ) Uma Vez por semana 2 ( ) 2 a 3 vezes por semana 3 ( ) Mais de 3x por semana
Quantas vezes escova os dentes por dia
1 ( ) Nenhuma 1 ( ) 1 vez 2 ( ) mais de duas vezes
Usa Fio dental
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Com que frequumlecircncia usa o fio dental
1 ( ) Eventualmente 2 ( ) Diariamente 3 ( ) Natildeo se aplica
Faz uso de algum enxaguatoacuterio bucal
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo Qual
Consulta periodicamente o dentista
1 ( ) Sim 2 ( ) Natildeo
Se sim com que frequumlecircncia vai ao dentista
1 ( ) de 6 em 6 meses 2 ( ) Uma vez por ano 3 ( )Dias ou mais vezes por ano
58
Variaacuteveis ambientais
Mora em ambiente ( )urbano ( ) rural
No ambiente em que vive ou trabalha vocecirc estaacute exposto ao uso de alguma pesticidapraguicida (domeacutestico ou
agriacutecola) ( ) Sim ( ) Natildeo Qual_________
Seu trabalho envolve contato direto ou indireto com
Metais ( )sim ( )natildeo
Fibras ( )sim ( )natildeo
Solventes ( )sim ( )natildeo
Vocecirc mora proacuteximo a induacutestrias plantaccedilotildees aacutereas ou rios poluiacutedos ( )Sim ( )Natildeo Qual____________
Qual a fonte de aacutegua ( ) encanada ( ) poccedilo ( )outra _______________
Existem medidas de saneamento e recolhimento de lixo onde vocecirc moratrabalha ( ) Sim ( ) Natildeo
Qual o tipo de combustiacutevel utilizado para cozinhar e para o aquecimento geral da casa e da aacutegua ( ) gaacutes
( ) querosene ( )madeira ( )carvatildeo
Quais os tipos de produtos de limpeza e aromatizantes de ambiente utilizados onde vocecirc mora
59
APEcircNDICE II
TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO
Eu Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira meacutedica professora aposentada da Universidade
Estadual de Feira de Santana estou fazendo juntamente com o Dr Isaac Suzart Gomes Filho professor
da Universidade Estadual de Feira de Santana um estudo para investigar possiacuteveis alteraccedilotildees que
podem ocorrer no DNA (material geneacutetico) em consequumlecircncia da inflamaccedilatildeo da gengiva (gengivite e
periodontite) Neste estudo procuramos identificar tambeacutem se o tratamento que vai ser oferecido agraves
pessoas com inflamaccedilatildeo gengival eacute eficaz natildeo apenas na cura desta inflamaccedilatildeo mas tambeacutem na
reduccedilatildeo das alteraccedilotildees do DNA algumas delas relacionadas com o desenvolvimento do cacircncer Eacute
importante que vocecirc compreenda que a presenccedila dessas alteraccedilotildees natildeo significa que a pessoa teraacute
cacircncer mas eacute importante sua identificaccedilatildeo porque pode reforccedilar a necessidade do tratamento da
gengiva inflamada e estimular sua prevenccedilatildeo atraveacutes da boa higiene oral e do abandono do haacutebito de
fumar O exame que vai ser realizado eacute muito simples e natildeo causa dor O material utilizado eacute
descartaacutevel e vocecirc apenas poderaacute sentir um desconforto em ficar aproximadamente 5 minutos com a
boca aberta O exame e o tratamento que o dentista indicar eacute o mesmo que vocecirc receberia
independentemente de participar ou natildeo deste estudo
Se vocecirc concorda em participar da pesquisa deveraacute responder agraves perguntas feitas em
entrevista que seraacute agendada de acordo com sua conveniecircncia e realizada em local reservado e
permitir que se passe em sua bochecha com uma escovinha descartaacutevel e usada somente em vocecirc
Vocecirc tem total liberdade de recusar a participaccedilatildeo na pesquisa ou mesmo de desistir de continuar
participando em qualquer tempo sem que isto interfira de qualquer maneira no tratamento que lhe for
indicado Todos os resultados ficaratildeo comigo e eu me comprometo a manter sigilo dos mesmos
Esclareccedilo que estarei sempre agrave sua disposiccedilatildeo pessoalmente na UEFS (Laboratoacuterio de Geneacutetica
Toxicoloacutegica) ou nesta cliacutenica em que vocecirc estaacute tendo atendimento pelos telefones (32210213
32218285) para responder qualquer pergunta ou esclarecer duacutevidas em relaccedilatildeo agrave pesquisa Estando de
acordo peccedilo que vocecirc assine o presente documento em duas vias que tambeacutem seraacute assinado por mim
__________________ ____ de _____________ de ______
_________________________ ______________________________
Participante Eneida de Moraes Marciacutelio Cerqueira
Endereccedilo para contato
Universidade do Estadual de Feira de Santana ndash Laboratoacuterio de Geneacutetica Toxicoloacutegica Moacutedulo I MT
Sala 15
APEcircNDICE III