Acin Patricia 5
-
Upload
lina-rocio-davila-giraldo -
Category
Documents
-
view
19 -
download
0
Transcript of Acin Patricia 5
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
1/59
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA
FACULTAD DE BIOLOGA
UNIVERSIDAD DE BARCELONA
IDENTIFICACIN DE FEROMONAS Y PROTENAS
IMPLICADAS EN LA PERCEPCIN FEROMONAL DELEPIDPTEROS PLAGA
Directoras Tutora
Doctoranda
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
2/59
4. ESTUDIO DE LA COMPOSICIN FEROMONAL DE LAVARIEDAD DE Spodoptera exiguaENCONTRADA EN
ESPAA
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
3/59
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
4/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 47
4.1. INTRODUCCIN
Spodoptera exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
5/59
48 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figuras 4.1-3. S. exigua
Z E
Z E
Z E Z Z
Z Z Z Z
Z Z
Z E Z Z Z
Z Z Z Z
Z E Z Z E Z
Z E
ZZ E Z
1 2 3
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
6/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 49
Z E Z
E Z Z
Z
Z E Z
S. exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
7/59
50 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.2. MATERIAL Y MTODOS
4.2.1. Material biolgico
S. exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
8/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 51
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
9/59
52 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.2.2. Compuestos qumicos
Tabla 4.1.
Z E Z E 1
Z Z 2
Z Z 3
Z E Z E 4
Z Z 5
Z Z 6
7
Z Z 8
Z E Z E 9
1 7 8 9
2 3 4 5 6
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
10/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 53
Figura 4.4.
4.2.3. Anlisis de la composicin feromonal
4.2.3.1. Observacin del comportamiento de llamada
1
2
3
4
5
6
7
8
9
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
11/59
54 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.2.3.2. Extractos glandulares
1 2 3 4 5 7
6 8 9
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
12/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 55
4.2.3.3. Recogida de voltiles
Solid Phase Microextraction
1 6
4.2.4. Estudios electrofisiolgicos
4.2.4.1. EAG
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
13/59
56 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
1
5 1 4 2 6 3
2 1 5 3
1 2 3 4 5 6
4.2.4.1.1. Efecto de las mezclas binarias en la respuesta antenal
1
1 5
1 2 1 3
1
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
14/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 57
Tabla 4.2.
Cantidad total
de compuesto 1
MEZCLA A
1 (ng) 5 (ng)
MEZCLA B
1 (ng) 2 (ng)
MEZCLA C
1 (ng) 3 (ng)
1 g
100 ng
10 ng
4.2.4.1.2. Efecto de las mezclas ternarias en la respuesta antenal
1 5 2 3
1 5 2
1 5 3
1 53
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
15/59
58 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Tabla 4.3.
Cantidad total
de compuesto 1
MEZCLA D
1 (ng) 5 (ng) 2 (ng)
MEZCLA E
1 (ng) 5 (ng) 3 (ng)
MEZCLA F
1 (ng) 5 (ng) 3 (ng)
1 g
100 ng
10 ng
4.2.4.2. GC-EAD
Pheromone Biosynthesis Activating
Neuropeptide
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
16/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 59
1 6
4.2.4.3. SSR
4.2.5. Tnel de viento
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
17/59
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
18/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 61
1 5
Tabla 4.5. 1 5
1
Porcentaje 1 (ng) 5 (ng)
(80:20)
(60:40)
(40:60)
(20:80)
(0:100)
1 5
2 3
1 5 3
1
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
19/59
62 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Tabla 4.6.1
Mezcla 1 (ng) 5 (ng) 3 (ng) 2 (ng) Porcentaje
A
D
E
F
4.2.5.3. Efecto de otros compuestos
4 6
1 5
1
1
4.2.6. Pruebas de campo
1 5 3
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
20/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 63
Figura 4.5.
4.2.6.1. Campaa 2006
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
21/59
64 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Tabla 4.7.
Formulacin 1 (g) 5 (g) 3 (g) 2 (g) 4 (g) Porcentajes(100% total)
F1
F2
F3
4.2.6.2. Campaa 2008
1
2 3 5
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
22/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 65
Tabla 4.8:1
Formulacin 1 (g) 5 (g) 3 (g) 2 (g)Porcentajes(100% total)
F2
F4
F5
F6
F7
4.2.7. Immunohistoqumica
S.
exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
23/59
66 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.2.7.1. Procedimiento seguido (protocolo Whole-mount)
Figura 4.6. S.exigua
Ratn Anti -sinapsina de Drosophila
sinapsina
Cabra Anti-ratn
Fluorforo (AlexaFluor 488)
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
24/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 67
4.2.7.2. Microscopa confocal
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
25/59
68 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.3. RESULTADOS
4.3.1. Comportamiento de llamada
Hora de la escotofase
Po
rcentajedehembrasen
llamada(%)
Figura 4.7. S. exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
26/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 69
4.3.2. Anlisis de la composicin feromona
4.3.2.1. Extractos glandulares
1 2 3 4 5
Z 6
Figura 4.8.Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5
7 S.exigua
Z 6
1 5 7 6 8 9
A
B
4
7
5
231
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
27/59
70 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
6 8
Z 8
Figura 4.9. 1 9 Z E1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5 Z 6 7 Z
8 Z E 9S. exigua
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
28/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 71
Figura 4.10. Z E ZZ
2
1
67.12
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
29/59
72 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.11. Z E ZZ
5
4
6
5
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
30/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 73
1 4
2 6 3
5 1 4 2 6 3
Figura 4.12.
S. exigua
4.3.2.2. Recogida de voltiles
1 2 5
3 4
6
6
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
31/59
74 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.13. S. exigua
Z E 1 Z 2 Z 5 Z3
1
2
5
125
3
3
Estndares
Estndares
Voltiles
Voltiles
4
6
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
32/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 75
4.3.3. Estudio de la respuesta antenal de machos mediantetcnicas electrofisiolgicas
4.3.3.1. EAG
Edad
Respuesta(mV)
N=11
N=10
Figura 4.14. S.exigua Z E
N=16
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
33/59
76 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Hora del fotoperiodo
Respuesta(mV
)
Figura 4.15. S. exigua
4.3.3.1.1. Actividad de las mezclas encontrada en glndulas y en voltiles
N=10N=10
N=8
N=16
N=10
N=11
N=12
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
34/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 77
Figura 4.16. S. exigua
4.3.3.1.2. Actividad de los compuestos feromonales por separado
1
1
S. exigua1
2 4 3 6
Mezcla sinttica
Respuesta(m
V)
d
c c
b
a
ab
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
35/59
78 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.17. S. exiguaZ
E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5 Z 6
Dosis
Respuesta(mV)
Figura 4.18. S. exigua Z E
Compuesto feromonal
Respuesta(m
V)
aa
bb
d
gfg
de
b
fg
e
c
f ffg
cdede
g
N=10
N=10 N=16
N=10
N=10
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
36/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 79
4.3.3.1.3. Actividad de las mezclas binarias
1
1
2 3 5
1
1
1
5
Figura 4.19. S. exiguaZ E 1) Z5) Z 3) Z 2) 1 5 1 2 1 3
4.3.3.1.4. Actividad de las mezclas ternarias
1 5 2 3
Agente estimulante
Respuesta(mV)
bcab
bc
bcab
bc
ab
bc
c
ab
bc
a
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
37/59
80 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.20. S. exigua1 5 1 5 2 1 5 3 1 5 3
Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5
4.3.3.2. GC-EAD
4 6 1
4 5
6
3
Agente estimulante
Res
puesta(m
V)
b
a
aba
b
a
b
aba
b
aa
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
38/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 81
Figura 4.21. S. exigua
Z E 1 Z 2 Z 3) Z E4 Z 5) Z 6
4.3.3.3. SSR
Z
Z
A
2
EAD
1
5 12
4
3
6
45 63
FID
B
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
39/59
82 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Z E
Z E
Z
Z E
Z E Z
1 2 Z
Z
Z E
Figura 4.22.Z E 1
Z 2 Z5 Z E
4
A
B
C
D
1 seg
1 seg
1 seg
1 seg
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
40/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 83
Figura 4.23.Z E 1
Z 5
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
41/59
84 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.24.Z E 1
Z 2Z 3
Tabla 4.9. S. exigua.
Tipo %Tamao
despolarizacin1 2 3 4 5
I
II
III
IV
V
VI
A
B
C
1 seg
1 seg
1 seg
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
42/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 85
4.3.4. Estudios de comportamiento en tnel de viento
S. exigua
4.3.4.1. Mezclas halladas en glndulas y voltiles
Figura 4.25. S. exigua
Fuente de atraccin
Respuesta(%
a
bb
c
a
c
bab
bab
a
c
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
43/59
86 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.3.4.2. Combinaciones binarias
1
Z E
Z
1
2 3
5
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
44/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 87
Figura 4.26. S. exiguaZ E 1
1 5 1 2 1 3 Z 2 Z 3 Z 5
4.3.4.3. Combinaciones ternarias
1 5
Z 1 5 2 Z 1 5 3
1 5 3
Fuente de atraccin
Respuesta(%
)
a
b
b
b
a a
b
b bc bcc
b
c
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
45/59
88 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.27. S. exigua
1 5 1 5 2 1 5 3 1 5 3 Z E1 Z 2 Z 3 Z 5
4.3.4.4. Efecto de los compuestos no encontrados en voltiles
4
6
Fuente de atraccin
Respuesta(%)
a a aba a a
cd
ab bc
c
ab
b
d
d
e
f
de
c
e
e
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
46/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 89
Figura 4.28. S. exigua1 5
Z E 1 Z E4 Z 5 Z 6
4.3.4.5. Estudio de la proporcin ms atractiva
5
1
1 5
Fuente de atraccin
Respuesta(%
a a a a a aab
aab ab
cde
bc
de debcdcd
ef
cdde
f
)
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
47/59
90 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.29. S. exiguaZ E 1 Z 5 1
5
4.3.5. Pruebas de campo
4.3.5.1. Campaa 2006
Fuente de atraccin
Respuesta(%)
aabbc
d
a abbc
d
a abbc
de
cd
efef
g
d
ef
fg
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
48/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 91
Figura 4.30. S. exigua
1 5 1 5 31 5 2 4 Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z
5
Figura 4.31. S. exigua
1 5 1 5 3 1 5 2 4Z E 1 Z 2 Z 3 Z E 4 Z 5
Formulacin
Mediademachoscapturados/trampa
*
Formulacin
Mediademachoscaptura
dos/trampa
*
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
49/59
92 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
4.3.5.2. Campaa 2008
Figura 4.32. S. exigua
1 5 3 1 51 5 1 5 2 1 5 3 Z E 1 Z 2 Z
3 Z 5
Formulacin
Mediademachoscapturados/trampa
ab
a
abc
bcc
abc
c
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
50/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 93
Figura 4.33. S. exigua
1 5 31 5 1 5 1 5 2 1 5 3
Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5
2
1 5
Formulacin
Mediademachoscapturados/trampa a
aab
ab b b
b
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
51/59
94 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figura 4.34. S. exigua
1 5 31 5 1 5 1 5 2 1 5 3
Z E 1 Z 2 Z 3 Z 5
4.3.6. Estudio de los lbulos antenales-Immunohistoqumica
Formulacin
Mediademachoscapturados/trampa
ab
abcbc bc
c
a
bc
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
52/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 95
Figura 4.35. S. exigua
Ca
SOG
OLAMMC
ALLa Me
Lo
A B
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
53/59
96 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Figuras 4.36. S. exigua
B
D
F
A
C
E
A
C
E
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
54/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 97
4.4. DISCUSIN
S. exigua Z Z E Z E
Z Z Z
S. exigua
Z
Z Z
Z Z
Z E Z
Z Z
Z Z
Z E Z E
Spodoptera eridania Z
Heliothis subflexa
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
55/59
98 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Heliothis micaceae
H.
subflexa
Z E
Z
Z E Z E
Z E Z
Z E
Z E Z
Z
Z
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
56/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 99
Argyrotaenia velutinana Grapholita
molesta Trichoplusia ni
S. exigua Z E
Z E
Z
Z E
Z
Z
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
57/59
100 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Z E Z
Z E
Z Z Z
Z
Z Z
Z Z E Z Z Z
Z
Z E Z Z
Z E Z Z
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
58/59
Composicin feromonal de la variedad de S. exiguaencontrada en Espaa 101
Z E Z
Z E Z
Z
Z E
Z Z Z
Z E
Z
Z E Z
Z E
Z
Z Z E
Z E Z Z
-
5/26/2018 Acin Patricia 5
59/59
102 Composicin feromonal de la variedad deS. exiguaencontrada en Espaa
Z
S. exigua
Z E
Z
Z Z
S. littoralis