AccuProbe qPCR Master Mix--说明书
3
精品服务科研 【产品概述】 货号：A601 保存：-20℃避光保存两年 本产品是采用探针法进行Real Time PCR（qPCR）检测的试剂。核心组分是基于化学法修饰的热启 动DNA聚合酶，配合针对qPCR优化的反应缓冲液，实现了对PCR抑制物耐受性高、扩增特异性高、 扩增效率高、检测灵敏度高等特点。本产品是2×浓度的Premix型试剂，配制qPCR反应体系十分简 便。同时，本产品使用UDG酶和dUTP有效防止PCR产物的交叉污染，数据更准确。使用时只需加入 模板、引物、探针、ROX Reference Dye（根据qPCR仪选择）和水，使其工作浓度为1×，即可进行 反应。此外，本产品适用于快速PCR，可以在宽广的动态范围内对靶基因进行准确定量，检测重复 性好，可进行可信度高的Real Time PCR分析。 使用化学法修饰的热启动酶，提高灵敏度，增强特异性 使用dUTP和UDG酶，可有效排除先前扩增产物的交叉污染，数据更准确 针对qPCR优化的反应缓冲液，增强特异性，提高扩增效率，重复性好，可信度高 配有适用于不同机型的ROX Reference Dye（调整PCR加样误差引起的管间差异），数据准确 AccuProbe qPCR Master Mix 货号 A601-01 规格 5 ml A601-02 【产品组成】 Component a 2×AccuProbe qPCR Master Mix b 50×ROX Reference Dye I b 50×ROX Reference Dye II A601-01 4×1.25 ml 200 μl 200 μl 5×A601-01 A601-02 b. 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。不同机型ROX Reference Dye使用情况参见下表： 2+ a. 包含热启动酶、UDG酶、dNTPs、dUTP、Mg 等
Transcript of AccuProbe qPCR Master Mix--说明书
精 品 服 务 科 研
【产品概述】
货号：A601
保存：-20℃避光保存两年
本产品是采用探针法进行Real Time PCR（qPCR）检测的试剂。核心组分是基于化学法修饰的热启
动DNA聚合酶，配合针对qPCR优化的反应缓冲液，实现了对PCR抑制物耐受性高、扩增特异性高、
扩增效率高、检测灵敏度高等特点。本产品是2×浓度的Premix型试剂，配制qPCR反应体系十分简
便。同时，本产品使用UDG酶和dUTP有效防止PCR产物的交叉污染，数据更准确。使用时只需加入
模板、引物、探针、ROX Reference Dye（根据qPCR仪选择）和水，使其工作浓度为1×，即可进行
反应。此外，本产品适用于快速PCR，可以在宽广的动态范围内对靶基因进行准确定量，检测重复
性好，可进行可信度高的Real Time PCR分析。
使用化学法修饰的热启动酶，提高灵敏度，增强特异性
使用dUTP和UDG酶，可有效排除先前扩增产物的交叉污染，数据更准确
针对qPCR优化的反应缓冲液，增强特异性，提高扩增效率，重复性好，可信度高
配有适用于不同机型的ROX Reference Dye（调整PCR加样误差引起的管间差异），数据准确
AccuProbe qPCR Master Mix
货号
A601-01
规格
5 ml
A601-02
【产品组成】
Component
a2×AccuProbe qPCR Master Mix
b50×ROX Reference Dye I
b50×ROX Reference Dye I I
A601-01
4×1.25 ml
200 μl
200 μl
5×A601-01
A601-02
b. 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。不同机型ROX Reference Dye使用情况参见下表：
2+a. 包含热启动酶、UDG酶、dNTPs、dUTP、Mg 等
无需添加
ROX Reference Dye
Bio-Rad iCycler CFX96, CFX384, iQ, iQ5,MyiQ, Opticon,
Opticon 2,MiniOpticon, Chromo4;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-
Gene 6000;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Roche Applied Science LightCycler 480;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler;
Illumina Eco qPCR;
Takara TP-800.
Applied Biosystems 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT,
7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.
Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene
MX3000P, MX3005P, MX4000.
添加ROX Reference Dye I
（终浓度为1×）
添加ROX Reference Dye II
（终浓度为1×）
【PCR条件】
Step
UDG pre-treatment
Enzyme activation
Denaturation
aAnnealing/Extension
Temperature
50℃
94℃
95℃
60℃
Cycles
1
1
40 - 45
Duration
2 min
3 min
5 sec
30 sec
a. 退化/延伸温度根据不同的引物和探针需要进行优化，推荐优化的温度范围为58℃ - 65℃。退火/延
伸时间请根据您使用的Real-time PCR仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整: 使用ABI 7700和
7900时至少30秒；使用ABI 7000和7300时至少31秒；使用ABI 7500时至少34秒。
本品尽量避免反复冻融，以免酶活下降。如每次使用量较少，推荐分装后使用
使用前请上下颠倒混匀预混液，请勿涡旋以免产生过多气泡引起反应体系体积变化，进而影响定
量结果。预混液经混匀瞬时离心后即可使用
2×AccuProbe qPCR Master Mix于-20℃保存时，有时会形成沉淀。在室温短时间放置后，颠倒混
匀即可完全溶解。确保试剂混合均匀后再使用
由于本品检测灵敏度极高，在配制过程中请使用干净灭菌枪头、反应管，条件容许的实验室推荐
使用专用的移液器，避免污染
【注意事项】
【推荐qPCR体系（以20 μl反应体系为例）】
反应体系中各成分的量可根据以下原则进行调整：
反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果。当反应性能较差时，可以在终浓度
0.1 - 0.5 μM范围内进行调整
使用的探针浓度，根据使用的Real Time PCR扩增仪及探针的荧光标记物不同而不同，请参照仪器
说明书及探针附带的说明书调整探针使用量。通常探针终浓度在0.1 - 0.5 μM范围内进行调整
qPCR灵敏度极高，建立反应体系时加入模板量的准确度对最终结果会有很大的影响。推荐将模板
稀释后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性
如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10
Component
2×AccuProbe qPCR Master Mix
10 μM Forward Primer
10 μM Reverse Primer
10 μM Probe
50×ROX Reference Dye (optional)
PCR-grade Water
Template
Total Volume
Volume
10 μl
0.4 μl
0.4 μl
0.5 μl
0.4 μl
Variable
Variable
20 μl
Final Concentration
1×
0.2 μM
0.2 μM
0.25 μM
1×
-
As Required
-
【备注】
本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的合格产品。
在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。
无需添加
ROX Reference Dye
Bio-Rad iCycler CFX96, CFX384, iQ, iQ5,MyiQ, Opticon,
Opticon 2,MiniOpticon, Chromo4;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-
Gene 6000;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Roche Applied Science LightCycler 480;
Thermo Scientific PikoReal Cycler;
Cepheid SmartCycler;
Illumina Eco qPCR;
Takara TP-800.
Applied Biosystems 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT,
7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.
Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene
MX3000P, MX3005P, MX4000.
添加ROX Reference Dye I
（终浓度为1×）
添加ROX Reference Dye II
（终浓度为1×）
【PCR条件】
Step
UDG pre-treatment
Enzyme activation
Denaturation
aAnnealing/Extension
Temperature
50℃
94℃
95℃
60℃
Cycles
1
1
40 - 45
Duration
2 min
3 min
5 sec
30 sec
a. 退化/延伸温度根据不同的引物和探针需要进行优化，推荐优化的温度范围为58℃ - 65℃。退火/延
伸时间请根据您使用的Real-time PCR仪所需要的数据采集最短时间限制自行调整: 使用ABI 7700和
7900时至少30秒；使用ABI 7000和7300时至少31秒；使用ABI 7500时至少34秒。
本品尽量避免反复冻融，以免酶活下降。如每次使用量较少，推荐分装后使用
使用前请上下颠倒混匀预混液，请勿涡旋以免产生过多气泡引起反应体系体积变化，进而影响定
量结果。预混液经混匀瞬时离心后即可使用
2×AccuProbe qPCR Master Mix于-20℃保存时，有时会形成沉淀。在室温短时间放置后，颠倒混
匀即可完全溶解。确保试剂混合均匀后再使用
由于本品检测灵敏度极高，在配制过程中请使用干净灭菌枪头、反应管，条件容许的实验室推荐
使用专用的移液器，避免污染
【注意事项】
【推荐qPCR体系（以20 μl反应体系为例）】
反应体系中各成分的量可根据以下原则进行调整：
反应体系中引物终浓度为0.2 μM即可得到较好的扩增效果。当反应性能较差时，可以在终浓度
0.1 - 0.5 μM范围内进行调整
使用的探针浓度，根据使用的Real Time PCR扩增仪及探针的荧光标记物不同而不同，请参照仪器
说明书及探针附带的说明书调整探针使用量。通常探针终浓度在0.1 - 0.5 μM范围内进行调整
qPCR灵敏度极高，建立反应体系时加入模板量的准确度对最终结果会有很大的影响。推荐将模板
稀释后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性
如模板为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10
Component
2×AccuProbe qPCR Master Mix
10 μM Forward Primer
10 μM Reverse Primer
10 μM Probe
50×ROX Reference Dye (optional)
PCR-grade Water
Template
Total Volume
Volume
10 μl
0.4 μl
0.4 μl
0.5 μl
0.4 μl
Variable
Variable
20 μl
Final Concentration
1×
0.2 μM
0.2 μM
0.25 μM
1×
-
As Required
-
【备注】
本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的合格产品。
在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任，仅限于此产品的价值本身。
