การจ...

การจ าแนกพนธและการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรม ของมะมวงในประเทศไทยโดยใชล าดบดเอนเอ

โดย

นางสาวปยดา บสด

วทยานพนธนเปนสวนหนงของการศกษาตามหลกสตร

วทยาศาสตรมหาบณฑต (เทคโนโลยชวภาพ)

ภาควชาเทคโนโลยชวภาพ

คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร

ปการศกษา 2558

ลขสทธของมหาวทยาลยธรรมศาสตร

Identification and Genetic Relationship Analysis of Mango (Mangifera indica L.) in Thailand

Using DNA Sequences

BY

Miss PIYADA BUSSADEE

A THESIS SUBMITTED IN PARTIAL FULFILLMENT OF THE REQUIREMENTS

FOR THE DEGREE OF MASTER OF SCIENCE (BIOTECHNOLOGY) DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY

FACULTY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY THAMMASAT UNIVERSITY

ACADEMIC YEAR 2015 COPYRIGHT OF THAMMASAT UNIVERSITY

i

หวขอวทยานพนธ การจ าแนกพนธและการวเคราะหความสมพนธทาง พนธกรรมของมะมวงในประเทศไทยโดยใชล าดบดเอนเอ

ชอผเขยน นางสาวปยดา บสด ชอปรญญา วทยาศาสตรมหาบณฑต (เทคโนโลยชวภาพ) สาขาวชา/คณะ/มหาวทยาลย สาขาวชาเทคโนโลยชวภาพ

คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย มหาวทยาลยธรรมศาสตร

อาจารยทปรกษาวทยานพนธ อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม

รองศาสตราจารย ดร. ธระชย ธนานนต ผชวยศาสตราจารย ดร. นฤมล ธนานนต

ปการศกษา 2558

บทคดยอ

มะมวง (Mangifera indica L.) เปนไมผลเมองรอนทมความส าคญและนยมปลกกน

มากชนดหนงของไทย ซงมะมวงมมากมายหลายพนธ แตมะมวงทสามารถสงเปนสนคาออกไปยงตางประเทศนนมเพยงไมกพนธ ดงนนงานวจยนจงตรวจสอบพนธมะมวงในประเทศไทยเพอการอนรกษและการปรบปรงพนธมะมวงในอนาคต โดยรวบรวมตวอยางมะมวงทพบในประเทศไทยจ านวน 18 พนธ มาตรวจสอบล าดบดเอนเอของยน rbcL, rpoB, rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ pabA พบวาล าดบนวคลโอไทดของทง 4 บรเวณ ไมสามารถแยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน อยางไรกตาม เมอพจารณาจากแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากการวเคราะหล าดบนวคลโอไทดรวมกนทง 4 บรเวณ พบวาสามารถจ าแนกมะมวงพนธโชคอนนต เขยวเสวย อกรอง และมะปรงปาออกจากพนธอน ๆ ได ดงนนจงควรใชล าดบดเอนเอบรเวณอนรวมดวย เพอใหไดล าดบนวคลโอไทดทมความผนแปรและเหมาะสมส าหรบจ าแนกพนธมะมวงทงหมด ค าส าคญ: มะมวง; ยน rbcL; ยน rpoC1; ยน rpoB; ชนดเอนเอทอยระหวายน trnH กบ psbA;

ล าดบดเอนเอ

ii

Thesis Title Identification and Genetic Relationship Analysis of Mango (Mangifera indica L.) in Thailand Using DNA Sequences

Author Miss Piyada Bussadee Degree Master of science in biotechnology Department/Faculty/University Department of Biotechnology

Faculty of Science and Technology Thammasat University

Thesis Advisor Thesis Co-Advisor

Associate Professor Dr. Theerachai Thanananta Assistant Professor Dr. Narumol Thanananta

Academic Years 2015

ABSTRACT

Mango (Mangifera indica L.) is one of the important tropical fruits which is

popularly grown in Thailand. There are a lot of mango cultivars, but only a few of them can be exported. This research was focused on identification of mangoes cultivars in Thailand for conservation and improvement of mango cultivars in the future. Eighteen mangoes cultivars were collected and DNA sequences of rbcL, rpoB, rpoC1 genes and and trnH-psbA intergenic spacer region were determined. The results show that the nucleotide sequences of the 4 regions could not be used to identify all of them. However, all regions could be indentify M. indica var. Chok Anan, Khiaosawoey, Okrong and Mapring Pa. Therefore, it is suggested that some regions more than others may be included in DNA sequence-based identification to increase variable and informative sites for distinguish all mangoes. Keywords: mango; rbcL; rpoC1; rpoB; trnH-psbA intergenic spacer; DNA sequence

iii

กตตกรรมประกาศ

ขอขอบพระคณ รองศาสตราจารย ดร. ธระชย ธนานนต อาจารยทปรกษาวทยานพนธ และผชวยศาสตราจารย ดร. นฤมล ธนานนต อาจารยทปรกษาวทยานพนธรวม ทกรณาใหความรและค าแนะน า ตลอดจนชวยแกไขปญหาตางๆ ทเกดขนตลอดระยะเวลาระหวางการท าวทยานพนธ ทงใหความร ความเขาใจ ในการศกษาการวจยวทยานพนธนด าเนนไปไปไดดวยด

ขอขอบพระคณ ผชวยศาสตราจารย ดร. ศภชย วฒพงศชยกจ ประธานกรรมการสอบวทยานพนธ และ อาจารย ดร. ภทรพร คมภย กรรมการสอบวทยานพนธ ทคอยใหการดแล ใหความรและค าแนะน า ทเกยวของกบงานวจย และชวยแนะแนวทางส าหรบการแกไขปญหาตางๆ ทเกดขนตลอดระยะเวลาระหวางการท าวทยานพนธ จนงานวจยสามารถส าเรจลลวงไดดวยด

ขอขอบคณ คณาจารย พๆ นกวทยาศาสตรและเจาหนาทภาควชาเทคโนโลยชวภาพทก

ทาน ส าหรบความชวยเหลอ ความเออเฟอ ความรก ความเมตตา ความหวงด ทใหค าแนะน าแกตวขาพเจา

ขอขอบคณเพอนๆ ในหองปฏบตการเดยวกน ส าหรบก าลงใจและความชวยเหลอใน

ทกๆ ดาน ตลอดระยะเวลาในระหวางการท าวทยานพนธครงน สดทายขอขอบคณครอบครวของขาพเจาทใหก าลงใจ เขาใจ และสนบสนนในดาน

การศกษาของขาพเจามาโดยตลอด

นางสาวปยดา บสด

iv

สารบญ

หนา บทคดยอภาษาไทย (i) บทคดยอภาษาองกฤษ (ii) กตตกรรมประกาศ (iii) สารบญตาราง (ถาม) (ix) สารบญภาพ (ถาม) (x) บทท 1 บทน า 1

1.1 ทมาและความส าคญ 1 1.2 วตถประสงคของงานวจย 1 1.3 ขอบเขตของงานวจย 1 1.4 สมมตฐาน 2 1.5 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ 2 1.6 สถานทท าการวจย 2

บทท 2 วรรณกรรมและงานวจยทเกยวของ 3

2.1 มะมวง 3

v

สารบญ (ตอ)

หนา 2.1.1 ลกษณะทางพฤกษศาสตร 3

2.1.1.1 ราก 3 2.1.1.2 ล าตน 3 2.1.1.3 ใบ 3 2.1.1.4 ดอก 4 2.1.1.5 ผล 4 2.1.1.6 เมลด 5

2.2 การแบงกลมมะมวง 5 2.2.1 มะมวงกลมอนเดย 5 2.2.2 มะมวงกลมอนโดจน 5

2.3 การจดจ าแนกกลมพนธมะมวง 6 2.3.1 กลมแกว 6 2.3.2 กลมเขยวเสวย 8 2.3.3 กลมน าดอกไม 9 2.3.4 กลมหนงกลางวน 10 2.3.5 กลมอกรอง 11 2.3.6 กลมพราหมณ 12 2.3.7 กลมผลกลม 13 2.3.8 กลมเบดเตลด 14 2.4 พนธมะมวงทนยมปลก 14 2.4.1 พนธเขยวเสวย 14 2.4.2 พนธน าดอกไม 14 2.4.3 พนธแรด 15 2.4.4 พนธแกว 15 2.4.5 พนธโชคอนนต 15 2.4.6 พนธหนงกลางวน 15 2.4.7 พนธอกรอง 15 2.4.8 พนธฟาลน 16

vi


หนา

2.4.9 พนธหนองแซง 16 2.5 เครองหมายทางพนธกรรม 16 2.5.1 เครองหมายทางสณฐาน 16 2.5.2 เครองหมายทางโมเลกล 17 2.6 เครองหมายดเอนเอ 17 2.6.1 เครองหมายจากการไฮบรดไดซ 18 2.6.2 เครองหมายจากปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 18 2.7 การวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชล าดบนวคลโอไทด 18 2.8 การจ าแนกมะมวงโดยใชเครองหมายดเอนเอ 22 2.9 การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม 24 2.9.1 Character-based 24 2.9.2 Distance-based 24

บทท 3 วธการวจย 25

3.1 ตวอยางพนธมะมวง 25 3.2 เครองมอและอปกรณ 25

3.2.1 การสกดดเอนเอและการตรวจสอบคณภาพของดเอนเอ 25 3.2.2 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 25

3.3 สารเคม 26 3.3.1 การสกดดเอนเอ 26 3.3.2 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 26 3.3.3 การวเคราะหเจลอะกาโรสอเลกโทรโฟรซส 26 3.4 วธการด าเนนการ 27 3.4.1 การสกดดเอนเอ 27 3.4.2 การตรวจสอบปรมาณและคณภาพของดเอนเอ 28 3.4.3 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 28

โดยเทคนครหสแทงดเอนเอ

vii


หนา

3.4.4 การวเคราะหผล 30

บทท 4 ผลการวจยและอภปรายผล 32

4.1 ผลการวจย 32 4.1.1 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL 32 4.1.1.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 32 4.1.1.2 การหาล าดบนวคลโอไทด 33 4.1.1.3 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทด 35 4.1.1.4 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 40 4.1.2 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB 42 4.1.2.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 42 4.1.2.2 การหาล าดบนวคลโอไทด 42 4.1.2.3 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทด 43 4.1.2.4 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 46 4.1.3 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 48 4.1.3.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 48 4.1.3.2 การหาล าดบนวคลโอไทด 48 4.1.3.3 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทด 49 4.1.3.4 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 53 4.1.4 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน 56

trnH กบ psbA 4.1.4.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 56 4.1.4.2 การหาล าดบนวคลโอไทด 56 4.1.4.3 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทด 57 4.1.4.4 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 62 4.1.5 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของทง 4 ต าแหนง รวมกน 65 4.2 อภปราย 71

viii


หนา

บทท 5 สรปผลการวจยและขอเสนอแนะ 74

5.1 สรปผลการวจย 74 5.2 ขอเสนอแนะ 75

รายการอางอง 76 ภาคผนวก

ภาคผนวก ก การเตรยมสาร 84 ภาคผนวก ข ดเอนเอมาตรฐาน 86 ภาคผนวก ค ล าดบนวคลโอไทดทจดเกบในฐานขออมล Genbank 87

ประวตผเขยน 159

ix

สารบญตาราง ตารางท หนา 3.1 ไพรเมอรทใชส าหรบรหสแทงดเอนเอ 29 3.2 องคประกอบทใชในปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 29 3.3 สภาวะทใชในปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส 30 4.1 หมายเลขเฉพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL, rpoB, rpoC1 34 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA 4.2 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในมะมวงพนธตาง ๆ 39 4.3 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 41 ของยน rbcL 4.4 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB ในมะมวงพนธตาง ๆ 46 4.5 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 47

ของยน rpoB

4.6 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในมะมวงพนธตาง ๆ 53

4.7 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหดวยล าดบนวคลโอไทด 55

ของยน rpoC1

4.8 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวาง 62

ยน trnH กบ psbA ในมะมวงพนธตาง ๆ

4.9 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด 64

ของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA

x

สารบญภาพ ภาพท หนา 2.1 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมแกว 7 2.2 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมเขยวเสวย 8 2.3 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมน าดอกไม 9 2.4 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมหนงกลางวน 10 2.5 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมอกรอง 11 2.6 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมพราหมณ 12 2.7 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมผลกลม 13 4.1 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rbcL 32 4.2 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL 35 4.3 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rbcL 40 4.4 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rpoB 42 4.5 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB 43 4.6 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rpoB 46

4.7 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rpoC1 48 4.8 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 49 4.9 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rpoC1 54

4.10 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA 57

4.11 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA 58

4.12 แผนภมความทางพนธกรรมทไดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA 63 4.13 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoB 65 รวมกน 4.14 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoC1 66 รวมกน 4.15 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และชนดเอนเอ 66 ทอยระหวางยน trnH-psbA 4.16 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB และยน rpoC1 67 รวมกน

xi

สารบญภาพ (ตอ) ภาพท หนา 4.17 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB และชนดเอนเอ 67 ทอยระหวางยน trnH-psbA 4.18 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอ 68 ทอยระหวางยน trnH-psbA 4.19 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoB 68 และยน rpoC1 รวมกน 4.20 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoB 69 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกน 4.21 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoC1 69 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกน 4.22 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB ยน rpoC1 70 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกน 4.23 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยนทง 4 ต าแหนง รวมกน 70

1

บทท 1 บทน า

1.1 ทมาและความส าคญ มะมวง (Mangifera indica L.) เปนไมผลเมองรอน ไมผลดใบ ทเกษตรกรนยมปลกกนมาก และยงเปนไมผลทมความส าคญของไทยอกชนดหนง เนองจากสามารถรบประทานไดทงผลดบและผลสก นอกจากนยงสามารถแปรรปเกบไวส าหรบจ าหนายหรอรบประทานนอกฤดได ไมผลสวนใหญเปนไมยนตนทมอายการใหผลผลตทคอนขางยาวนาน ดงนนการปรบปรงพนธพชจ าพวกไมผลจงนยมใชการคดเลอกพนธเดมทเหนวาดอยแลวมาขยายพนธ ซงการคดเลอกโดยวธการนบางครงสามารถเกดการผดพลาดได เนองจากเกดการเปลยนแปลงลกษณะหรอมการผสมพนธขามชนด ท าใหไดตนลกไมตรงตามความตองการ และหากตรวจสอบโดยการใชลกษณะทางสณฐาน ไดแก รปรางของใบ ดอก ผล เปนตน ลกษณะเหลานจ าเปนตองอาศยระยะเวลาในการเจรญเตบโตและการสบพนธ ดงนนหากเกษตรกรน าสายพนธทไดไปปลกกวาจะทราบวาเปนสายพนธทเปลยนไปหรอดอยคณภาพกวาพนธเดมกอาจตองใชเวลานานหลายป อยางไรกตาม มะมวงนอกจากการจ าหนายภายในประเทศแลวยงมการสงออกไปขายยงตางประเทศอกดวย ซงการน ามะมวงสงออกยงนอกประเทศจ าเปนตองไดรบการตรวจสอบคณภาพของมะมวง เนองจากผลมะมวงบางพนธนนมลกษณะภายนอกทคลายคลงกน หากท าการจ าแนกดวยตาเปลา อาจไมสามารถจ าแนกหรอเกดความผดพลาดในการจ าแนกได

ดวยความส าคญดงกลาวการน าเทคนคทางพนธศาสตรโมเลกลมาใชนาจะเปนทางเลอกทดในการตรวจสอบตนทสงสยวาเปนพนธอะไร และใชจ าแนกพนธมะมวงแตละชนดออกจากกน เพอใชในการอนรกษ การตรวจสอบ และการปรบปรงพนธมะมวงในอนาคต 1.2 วตถประสงคของการวจย

เพอจ าแนกพนธและวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวงทพบในประเทศไทย ดวยล าดบดเอนเอบางต าแหนง 1.3 ขอบเขตงานวจย ศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวงในประเทศไทย 18 พนธ ไดแก โชคอนนต

มะปรงปา ทองด า เจาคณทพย กะลอน แรด ศรสยาม ฟาลน เพชรบานลาด หนองแซง หนงกลางวน

2

มนขนศร แหว เขยวเสวย แกว น าดอกไม ทลถวายทะวาย และอกรอง โดยใชล าดบนวคลโอไทด

4 ต าแหนง ไดแก rbcL, rpoB , rpoC1 และ ชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA

1.4 สมมตฐาน ล าดบนวคลโอไทดทเหมาะสมสามารถตรวจสอบ จ าแนกความหลากหลายทางพนธกรรมและวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวงได โดยขอมลล าดบนวคลโอไทดทใหความแตกตางระหวางพนธสามารถใชจ าแนกพนธมะมวงในระดบโมเลกลได

1.5 ประโยชนทคาดวาจะไดรบ สามารถตรวจสอบและจ าแนกพนธมะมวงดวยล าดบดเอนเอบางต าแหนง ซงสามารถประยกตใชในการวางแผนปรบปรงพนธและตรวจสอบคณภาพของมะมวงได 1.6 สถานทท าการวจย หองปฏบตการ B403 และ B407 อาคารเรยนและปฏบตการคณะวทยาศาสตรและ

เทคโนโลย (บรรยายรวม5, บร.5) ภาควชาเทคโนโลยชวภาพ คณะวทยาศาสตรและเทคโนโลย

มหาวทยาลยธรรมศาสตร ศนยรงสต อ าเภอคลองหลวง ต าบลคลองหนง จงหวดปทมธาน

3

บทท 2 วรรณกรรมและงานวจยทเกยวของ

2.1 มะมวง มะมวง ( Mangifera indica L. ) มชอสามญวา Mango จดอยในวงศ Anacardiceae เปนไมผลเมองรอน ไมผลดใบ มถนก าเนดแถบภาคตะวนออกของอนเดย พมา และเกาะอนดามน ตอมาไดกระจายพนธไปยงประเทศตาง ๆ ทวโลก (ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว, 2556)

มะมวงเปนไมผลทนยมปลกกนแพรหลายเพราะเปนพชทปลกงาย สามารถเจรญเตบโตไดในดนเกอบทกชนด ทนตออากาศรอนไดด จงเปนผลไมทมความส าคญทางเศรษฐกจชนดหนงของไทย เนองจากสามารถบรโภคไดทงดบและสก รสชาตอรอย มกลนหอม และสามารถแปรรปเกบไวส าหรบจ าหนายหรอรบประทานนอกฤด (มนตร, 2556)

2.1.1 ลกษณะทางพฤกษศาสตร

ลกษณะทางพฤกษศาสตรของมะมวง มดงน 2.1.1.1 ราก มะมวงมระบบรากเปนรากแกว ความยาวของรากมตงแต 6-8 เมตร หรอ

มากกวา (ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว, 2556) ส าหรบรากดดอาหารนนอยหนาแนนในบรเวณผวดน โดยลกประมาณ 30-60 เซนตเมตร และแผกวางออกเปนรศมประมาณ 750 เซนตเมตรในบางครงอาจเหนรากมะมวงเจรญโผลขนมาบนดนใหเหน หากขาดการพรวนดนพนโคนเปนเวลานาน (วนสสา, 2552)

2.1.1.2 ล าตน

ขนาดของล าตนขนอยกบพนธและอาย โดยล าตนมลกษณะตรง ความสงประมาณ 10-14 เมตร มสผวจากเทาหรอเกอบด า เปลอกออนมสเขยว เปลอกแกจะเปลยนเปนสน าตาล มลกษณะแขง ผวขรขระและมเกลดมาก เนอไมเมออายนอยจะมสเขยว เมอแกมอายมากขนจะเปลยนเปนสน าตาลแกมแดง มกงกานสาขาขนาดใหญ แขงแรง ลกษณะทรงพมเปนรปครงวงกลมหรอรปไข (ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว, 2556)

2.1.1.3 ใบ

ใบเปนใบเดยวเรยงตวแบบสลบท าใหมลกษณะใบเรยงตวเปนเกลยวดงนน

บรเวณปลายกงจงมกจะมใบเกดถ ใบไมมขน ไมมหใบ และผลใบออกมาเปนระยะ ๆ ใบออนมกมส

4

ออกแดง เมอใบแกจะเปลยนเปนสเขยวเขม ผวใบเปนมน กานใบยาว 1-10 เซนตเมตร แผนใบยาว 8-

40 เซนตเมตร กวาง 2-10 เซนตเมตร ใบมรปรางแบนรปโล รปหอก รปไข และเรยวยาว ฐานใบ

คอย ๆ กวางออกคลายรปลมแหลม ปลายใบแหลม ขอบใบมกจะเปนคลน (วนสสา, 2552)

2.1.1.4 ดอก

ดอกเปนแบบดอกชอแยกแขนง (panicle) ออกตามปลายกงหรอตาดอกทอยปลายกง ตามกานชอดอกมสเขยวออกแดงและมขน ในแตละชอดอกประกอบดวยดอก 2 ประเภท คอ ดอกเพศผ และดอกสมบรณเพศอยรวมชอดอกเดยวกน ดอกสมบรณเพศ คอ ดอกทมทงเกสรเพศผและเกสรเพศเมยอยในดอกเดยวกน และสามารถเจรญกลายเปนผลไดเมอไดรบการผสมเกสร สวนดอกเพศผนนไมสามารถเจรญเปนผลได ดอกมหลายสแตกตางกน ไดแก แดง ชมพ หรอขาว กลบเลยงม 4-5 กลบ แยกกน ลกษณะโคงนนมสเขยวอมเหลอง และมขนแขงขนาดยาวปกคลม กลบดอกโดยทวไปม 5 กลบแยกกน มความยาวเปน 2 เทา ของกลบเลยง กลบดอกมสเหลองครมและมรองสเหลองเขมบรเวณโคนกลบดอก เมอกลบดอกแกจะเปลยนเปนสชมพ ระหวางวงกลบดอก และวงเกสรเพศผมแผนจานกลมคนอย เกสรเพศผแทรกอยทขอบนอกของแผนจานกลม ดอกเพศผมเกสรเพศผ 5 อน แตอนทท าหนาทจะมเพยง 1 หรอ 2 อน นอกนนจะฝอ ซงเกสรเพศผจะมความยาว 2 มลลเมตร เมอแกอบเรณเปลยนจากสชมพเปนสมวง ส าหรบดอกเพศผเกสรเพศเมยจะฝอ สวนดอกสมบรณเพศมเกสรเพศผ 2-5 อน แตท าหนาท เพยงอนเดยว มต าแหนงอย เหนอฐานดอก เกสรเพศเมยประกอบดวยรงไขอนเดยวและมชองเดยว รงไขเบยว ไมมกาน กานเกสรเพศเมยเอยงไปขางหนง ยอดเกสรเพศเมยมขนาดเลกความยาวเทากบเกสรเพศผทท าหนาท ออวลมจ านวน 1 ฟอง และคว า (วนสสา, 2552; ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว, 2556)

2.1.1.5 ผล

ผลเปนแบบผลเดยว (fleshy drupe) โดยในแตละพนธจะมความแตกตาง

กนในเรองของขนาด รปราง ส ปรมาณเสยน รสชาต และกลน ผวเรยบ ขนาดความยาวของผลม

ตงแต 5-20 เซนตเมตร ความกวาง 4-8 เซนตเมตร (ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว ,

2556) รปรางของผลมตงแตกลมไปจนถงรปไขคอนขางยาว อาจแตกตางกนในสวนของแกม ( sinus)

ไหล (shoulder) หลง (back) ปลาย (apex) คาง (nak) และจะงอยปาก (beak) สเปลอกดานนอก

ของผลประกอบดวยสวนผสมของสตาง ๆ เชน เขยว เหลอง และแดง มะมวงมผนงผล 3 ชน คอ ผนง

ผลชนนอก (exocarp) หนาและมตอมเกดเปนจด ๆ ผนงผลชนกลาง (mesocarp) เปนเนอท

รบประทานได ความหวานของเนอมากนอยขนอยกบชนด และผนงผลชนใน (endocarp) มลกษณะ

5

เปนเสยน แขง คลายไม เปลอกชนในอาจลอนหรอมเสยนยดตดกบผนงผลชนกลางกได (วนสสา ,

2552)

2.1.1.6 เมลด

เมลดอยถดจากผนงผลชนใน มขนาดใหญไปจนถงเกอบไมมเมลด (หรอ

เมลดลบ) แตกตางกนไปตามพนธ เปลอกหมเมลดมเยอหม 2 ชน คอ ชนนอก (testa) และชนใน

(tegmen) เมลดบางชนดเปน monoembryony ประกอบดวย zygotic embryo เพยงอยางเดยว

สวนเมลดบางชนดเปน polyembryony ประกอบดวยเอมบรโอ (embryo) จ านวน 2–12 อน ซง

เมลดแบบหลงนม apomictic embryo เกดจากผวของเนอเยอ nucellus และลกษณะเดนอกอยาง

ของมะมวงกคอ มน ายาง (resinous sap) อยทกสวนของพช (วนสสา, 2552)

2.2 การแบงกลมมะมวง

มะมวงทปลกกนอยในปจจบนถกแบงออกเปน 2 ประเภท ตามลกษณะถนก าเนดและการ

กระจายพนธ ซงแตกตางกนอยางเดนชดทงทางกายภาพและทางสรรวทยา ดงน

2.2.1 มะมวงกลมอนเดย

มะมวงในกลมนมถนก าเนดทางตอนเหนอของประเทศอนเดยและปากสถาน เปนท

ตองการของตลาด มลกษณะเดน คอ เมลดทเพาะใหตนกลา 1 ตนตอเมลด ตนกลานนจะกลายพนธ

ไมตรงกบตนแม เพราะเปนตนกลาทเกดจากการปฏสนธ (zygotic หรอ gametic seedling) เทานน

(ทารกา, 2550) ผลของมะมวงในกลมน คอนขางกลมร เปลอกหนามสออกมวงหรอแดงเมอสก ม

กลนขไตแรง เนอหนาอาจจะมหรอไมมเสยนกได

2.2.2 มะมวงกลมอนโดจน

มะมวงในกลมนมถนก าเนดในประเทศแถบอนโดจนและเอเชยตะวนออกเฉยงใตเมอ

น าเมลดมาเพาะจะใหตนกลามากกวา 1 ตนตอเมลด คอ ตนกลาทเกดจากการปฏสนธ และตนกลาท

เกดจากนวเซลลส (nucellar seedling) ตนกลาทไดสวนมากจะตรงกบพนธเดม แตอาจมการ

เปลยนแปลงของลกษณะพนธบางในบางตน (ทารกา, 2550) ผลของมะมวงในกลมน คอนขางยาวร

เปลอกบางและเปลยนเปนสเหลองเมอสก รสชาตหวานจด มกไมมเสยน แตเนองจากผวเปลอกทบาง

และรสชาตทหวานจด ไมมกลนแรง ท าใหไมเปนทตองการของตลาดในแถบยโรปและอเมรกา

6

ความเปนมาของมะมวงในประเทศไทยคลายกบแหลงอนของโลก คอ มการขยายพนธดวยวธ

เพาะเมลด โดยเฉพาะตนทมลกษณะด เชน รสหวาน มน เมอระยะเวลาผานไปจงมการผสมพนธ

เพอใหไดลกษณะทดเพมมากขนจงเกดพนธมะมวงเพมเตมจ านวนมาก ปจจบนนยมขยายพนธดวย

วธการตอกง เพอท าใหไดตนพนธทเหมอนกบตนแม

2.3 การจดจ าแนกกลมพนธมะมวง

มะมวงทพบในประเทศไทยมหลายพนธ ซงมลกษณะทเหมอนและแตกตางกนไป โดยบาง

พนธนนอาจมชอเรยกหลายชอแตกตางกนตามสภาพแวดลอมของแหลงเพาะปลก ดงนนจงไดมการ

จดแบงกลมมะมวงพนธตาง ๆ โดยศกษาจากลกษณะของใบและผลเปนหลก ซงสามารถจดแบงกลม

ของมะมวง ไดดงน

2.3.1 กลมแกว

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปไขกลบ (obovate) ทรงใบมลกษณะปอมโคนใบ

(lanecolate) บรเวณปลายใบมลกษณะสอบเรยว (attenuate) ฐานใบแหลม (acute) ขอบใบม

ลกษณะเปนขอบเรยบ (entire) (ภาพท 2.1)

7

ภาพท 2.1 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมแกว

ทมา : ฐานขอมลเชอพนธมะมวง, 2547; ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว, 2556

8

2.3.2 กลมเขยวเสวย

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปขอบขนาน (oblong) ทรงใบมลกษณะขอบ

ขนาน (oblong) บรเวณปลายใบมลกษณะสอบเรยว (attenuate) ฐานใบสอบเรยว (attenuate)

ขอบใบมลกษณะเปนขอบเรยบ (entire) (ภาพท 2.2)

ภาพท 2.2 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมเขยวเสวย


9

2.3.3 กลมน าดอกไม

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปทรงร (elliptical) ทรงใบมลกษณะปอมกลางใบ

(elliptical) บรเวณปลายใบมลกษณะเรยวแหลม (acuminate) ฐานใบแหลม (acute) ขอบใบม

ลกษณะเปนคลน (undulate) (ภาพท 2.3)

ภาพท 2.3 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมน าดอกไม


10

2.3.4 กลมหนงกลางวน

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปทรงกระบอก (cylindrical) ทรงใบมลกษณะ

ขอบขนาน (oblong) บรเวณปลายใบมลกษณะสอบเรยว (attenuate) ขอบใบมลกษณะเปนขอบ

เรยบ (entire) (ภาพท 2.4)

ภาพท 2.4 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมหนงกลางวน


11

2.3.5 กลมอกรอง

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปทรงร (elliptical) ทรงใบมลกษณะปอมโคนใบ

(lanecolate) บรเวณปลายใบมลกษณะเรยวแหลม (acuminate) ฐานใบแหลม (acute) ขอบใบม


ภาพท 2.5 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมอกรอง


12

2.3.6 กลมพราหมณ

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปไข (ovate) ทรงใบมลกษณะปอมกลางใบ

(elliptical) บรเวณปลายใบมลกษณะเรยวแหลม (acuminate) ฐานใบแหลม (acute) ขอบใบม


ภาพท 2.6 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมพราหมณ


13

2.3.7 กลมผลกลม

มะมวงในกลมนมลกษณะผลเปนรปทรงกลม (roundish) ทรงใบมลกษณะปอม

กลางใบ (elliptical) บรเวณปลายใบมลกษณะสอบเรยว (attenuate) ฐานใบแหลม (acute) ขอบใบ

มลกษณะเปนขอบเรยบ (entire) (ภาพท 2.7)

ภาพท 2.7 ลกษณะผลและใบของมะมวงในกลมผลกลม


14

2.3.8 กลมเบดเตลด

มะมวงในกลมนมลกษณะผลหลายแบบ ไมสามารถจดเขารวมกลมใดกลมหนงได ใน

สวนของลกษณะทรงใบ ปลายใบ ฐานใบ และขอบใบนน กไมสามารถระบเขากลมใดกลมหนงได

เชนกนหรออาจมลกษณะของกลมหนงปนกบลกษณะอกกลมหนง เปนตน

2.4 พนธมะมวงทนยมปลก

มะมวงแตละพนธจะมลกษณะเดนทแตกตางกนไปซงมะมวงทนยมปลกและบรโภคนนมเพยง

ไมกชนด ดงนนการจะเลอกปลกมะมวงพนธใดจงขนอยกบความตองการของตลาด ซงมะมวงทได

ความนยมเปนสวนมาก ไดแก

2.4.1 พนธเขยวเสวย

มะมวงพนธเขยวเสวย เปนพนธทนยมปลกกนมากเพราะเปนทตองการของตลาด ม

รสชาตมน เหมาะส าหรบรบประทานผลดบในระยะผลแกจด เปนพนธทใหผลดก ชอบทแจง แตการ

เจรญเตบโตและการแตกกงคอนขางชา มความตานทานตอโรคและแมลงไดด แตไมทนตอโรคยางไหล

ลกษณะผลคอนขางกลมเรยวยาว ปลายงอนเลกนอย ผลดบเปลอกมสเขยวเขมและออกนวลเมอแก

รสชาตมน เนอมสขาว ละเอยด กรอบ มเสยนคอนขางนอย เมลดลบ ผลออนมรสเปรยว เมอผลสก

เปลอกมสเขยวปนเหลอง เนอสเหลอง รสหวาน (มนตร, 2556)

2.4.2 พนธน าดอกไม

มะมวงพนธน าดอกไมเปนมะมวงประเภทรบประทานผลแบบสก เจรญเตบโตด ออก

ดอกงายและดก สามารถบงคบใหออกดอกนอกฤดไดด ผลมขนาดปานกลางถงใหญ คอนขางกลมยาว

ปลายผลแหลม มผวเรยบ เปลอกบางเปราะ มตอมกระจายอยหางๆ ทวผล ผลดบเปลอกมสเขยวนวล

เนอมสขาว แนน เมลดแบนยาว มรสเปรยวจด เมอผลสกเปลอกมสเขยวอมเหลองถงเหลอง ช างาย

รสหวาน มเสยนคอนขางนอย (มนตร, 2556)

15

2.4.3 พนธแรด

มะมวงพนธแรดเปนมะมวงพนธเบา ทนตอโรคแมลงและสภาพแวดลอมไดด ตดผลดก

ผลแกเรว ผลมขนาดปานกลาง ลกษณะกลม ปลายผลเรยวแหลมเลกนอยและมน ผวเปนคลนไมเรยบ

จะมลกษณะเดนทเหนไดชด คอ มนออยบรเวณสวนบนของผล เปลอกคอนขางหนาและเหนยว ผล

ดบเปลอกมสเขยวนวล เนอมสขาวปนเหลอง เนอหยาบ กรอบ และหนา ผลออนมรสเปรยวจด ผลแก

มรสอมเปรยวเลกนอย มเสยนคอนขางมาก เมอผลสกเปลอกมสเหลองเขม เมลดมรปรางคอนขางสน

และมเสยนตดเมลดมาก (มนตร, 2556)

2.4.4 พนธแกว

มะมวงพนธแกวเปนพนธพนบานของไทย เจรญเตบโตเรว ทนทานตอโรคแมลงและ

สภาพแวดลอมไดด เหมาะตอสภาพไรทมการดแลรกษานอย ตดผลดก ผลแกชา ลกษณะผลคอนขาง

กลมปอม ผลดบเปลอกมสเขยวเขมและหนาปานกลาง เนอสขาว หยาบ มแปงมาก ผลสกเปลอกมส

เหลอง เนอสเหลองเขม แนน มรสหวาน เมลดคอนขางโต (มนตร, 2556)

2.4.5 พนธโชคอนนต

มะมวงพนธโชคอนนตเปนพนธทมการตดผลลกษณะเปนพวง ลกษณะเดนของมะมวง

พนธน คอ การออกดอกทะวาย สามารถออกดอกไดตลอดป ตดผลงาย เปลอกหนา เนอแนน เปน

พนธทสามารถท าใหตดผลนอกฤดไดงายกวาพนธอน ผลดบเปลอกมสเขยวออน ผวเรยบ รสชาตจด

ผลสกเปลอกสเหลองสม เนอแนนออกแขงๆ รสหวาน มเสยนนอย (มนตร, 2556)

2.4.6 พนธหนงกลางวน

มะมวงพนธหนงกลางวนเปนมะมวงพนธหนกทใหผลดก โดยเฉพาะตนทมอายมาก ๆ

จะยงใหผลดกมาก ทนทานตอโรคและแมลงไดด ผลมขนาดปานกลางถงใหญ รปรางยาวเรยว เปลอก

คอนขางหนาและเหนยว ผวเรยบ ผลดบมเปลอกสเขยวเขม เนอสขาวนวล ละเอยด กรอบ มเสยน

นอย รสเปรยว เมอแกจดรสมนอมเปรยว ผลสกเปลอกและเนอมสทอง เนอละเอยด แนน มเสยนนอย

รสหวาน เมลดยาวแบนมเสยนตดกบเมลดเลกนอย (มนตร, 2556)

2.4.7 พนธอกรอง

มะมวงพนธอกรองเปนพนธทนยมรบประทานผลสก ใหผลดก ผลมขนาดคอนขางเลก

ทรงยาวแบนเลกนอย มรองเปนแนวยาวทดานทองอยางเหนไดชด เปลอกบาง ผลดบเปลอกมสเขยว

16

เนอสขาวนวลละเอยด มเสยนนอย รสเปรยวจด ผลสกเปลอกมสเหลองทองและเหยวยน เนอสเหลอง

ทองละเอยด แนน ฉ าน า มเสยนมากปานกลาง รสหวาน เมลดแบนยาว (เจนวทย, 2553)

2.4.8 พนธฟาลน

มะมวงพนธฟาลนมลกษณะเดน คอ ตดผลคอนขางดและเกบขายไดตงแตผลยงออน

แตมขอเสยคอ ผลแตกงายถามฝนตก ผลมลกษณะยาวปลายเรยวแหลม เปลอกหนาไมเหนยว ผลดบ

เปลอกมสเขยว เนอสขาวนวล หยาบ กรอบ มเสยนคอนขางนอย รสมนตงแตผลเลก ๆ กระทงผลแก

จด ผลสกเปลอกมสเขยวปนเหลอง เนอมสเหลอง ละเอยด มเสยนนอย รสหวานไมจดเมลดมรปราง

ยาวแบน (เจนวทย, 2553)

2.4.9 พนธหนองแซง

มะมวงพนธหนองแซงเปนมะมวงไทยทมถนก าเนดบรเวณอ าเภอหนองแซง จงหวด

สระบร ตนเจรญเตบโตเรว ทรงพมคอนขางทบ การแตกใบมลกษณะเปนหลายฉตร ออกดอกตดผลด

เปลอกคอนขางหนา ผลดบเปลอกมสเขยวนวล เนอสขาว มเสยนนอย ผลออนมรสมนจด เมอแกมรส

มนกรอบ ผลสกเปลอกมเหลอง เนอสเหลอง ละเอยด รสหวานชด (เจนวทย, 2553)

2.5 เครองหมายทางพนธกรรม

เครองหมายทางพนธกรรม หมายถง ลกษณะหรอตวบงชความแตกตางหลากหลายทาง

พนธกรรมของสงมชวตทงทางปรมาณและคณภาพ สามารถน ามาใชแยกความแตกตางทางพนธกรรม

ได เพอชวยใหการจ าแนกความแตกตางของสายพนธมความถกตอง เครองหมายใชบงชความแตกตาง

นม 2 ประเภท คอ เครองหมายทางสณฐาน (morphological marker) และเครองหมายทางโมเลกล

(molecular marker) (สรนทร, 2552)

2.5.1 เครองหมายทางสณฐาน

เครองหมายทางสณฐานบงบอกความแตกตางของสงมชวต โดยใชวธการปรยบเทยบ

ลกษณะภายนอกทางสณฐานหรอทางสรระ ใชตรวจสอบลกษณะทมกขนอยกบสภาพแวดลอม ท า

ใหผลของการตรวจสอบผดพลาดไดงาย อยางไรกตาม การตรวจสอบลกษณะทางสณฐานยงมความ

จ าเปนตองท าเปนอนดบแรก แลวจงใชวธอนประกอบเพอใหไดขอมลทสมบรณมากขน (สรนทร ,

2552)

17

2.5.2 เครองหมายทางโมเลกล

เครองหมายทางโมเลกลม 2 ระดบ คอ ระดบโปรตน เปนการตรวจสอบทโมเลกลของ

โปรตนชนดตาง ๆ และระดบดเอนเอ เปนการตรวจสอบความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดใน

โมเลกลของดเอนเอ โดยการตรวจสอบในระดบดเอนเอมขอดกวาการตรวจสอบโปรตน เนองจากการ

ตรวจสอบดวยเครองหมายโปรตนนนจ านวนยนทตรวจสอบยงมไมมากนก ไมกระจายครอบคลมทง

จโนม และยนทศกษาตองมการแสดงออก จงจ าเปนตองเลอกเนอเยอพชและระยะการเจรญท

เหมาะสมในการวเคราะห นอกจากนโปรตนยงสญเสยสภาพธรรมชาตไดงายจงตองวเคราะหผลใน

ระยะเวลาทจ ากด ท าใหโอกาสการตรวจพบความแตกตางในระดบโปรตนมคาต ากวาความเปนจรง ไม

เหมาะในการน ามาใชในการปรบปรงพนธ (สรนทร, 2552)

2.6 เครองหมายดเอนเอ

เครองหมายดเอนเอ เปนการใชดเอนเอเปนเครองหมายในการบงชความจ าเพาะของสงมชวต

โดยดเอนเอนนอาจเปนดเอนเอทอยทต าแหนงหนง ๆ บนโครโมโซม (nuclear DNA) หรอดเอนเอใน

ออรแกเนลล (mitochondrial DNA หรอ chloroplast DNA) การทสามารถใชเครองหมายดเอนเอ

เปนเครองหมายไดเนองจากเกดความผนแปร (variation) ของนวคลโอไทดในโมเลกลดเอนเอ หรอ

เกดความหลากรป (polymorphism) ของล าดบนวคลโอไทดในโมเลกลดเอนเอ การตรวจสอบใน

ระดบโมเลกลของดเอนเอมความเสถยรกวาการตรวจสอบในระดบโมเลกลของโปรตนเนองจาก

สามารถเกบไวไดในระยะเวลาทยาวนานกวา และดเอนเอเปนองคประกอบทมอยเกอบทกเซลลใน

ปรมาณทเทากนจงสามารถตรวจสอบจากเนอเยอใด ๆ กได ไมขนกบสภาพแวดลอม สามารถ

ตรวจสอบไดทงสวนทเปนยนหรอสวนทไมใชยนกได จะมการแสดงออกของยนหรอไมมการแสดงออก

ของยนกได ครอบคลมทงจโนม และมเครองหมายหลายแบบใหเลอกใช ท าใหการใชดเอนเอเปน

เครองหมายทสามารถประยกตใชไดอยางกวางขวาง และสามารถใชในดานตาง ๆ ไดอยางไมจ ากด

(สรนทร, 2552)

เครองหมายดเอนเอสามารถแบงออกเปน 2 ประเภท คอ hybridization-based marker

และ PCR-based marker

18

2.6.1 เครองหมายจากการไฮบรดไดซ (hybridization-based marker)

เปนเครองหมายดเอนเอ ซงพฒนาขนโดยอาศยหลกการเขาคของล าดบนวคล-

โอไทดดเอนเอทเปนคสมกนระหวางดเอนเอตดตาม (probe) กบดเอนเอทตองการตรวจสอบ โดยใช

เทคนคไฮบรไดเซชน (hybridization) ตวอยาง เชน อารเอฟแอลพ (restriction fragment length

polymorphism, RFLP) (Tanksley et al., 1989; McCouch and Tankslay, 1991; Kochert,

1994)

2.6.2 เครองหมายจากปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส (PCR-based marker)

เปนเครองหมายโมเลกลดเ อนเอท พฒนาขน โดยอาศยหลกการเพมปรมาณ

ดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส หรอ พซอาร (polymerase chain reaction, PCR) ตวอยาง

เครองหมายดเอนเอทนยมใชในงานปรบปรงพนธพช ไดแก อารเอพด ( random amplified

polymorphic DNA, RAPD) (William et al., 1990) เอเอฟแอลพ (amplified fragment length

polymorphism, AFLP) (Vos et al., 1995) และไมโครแซทเทลไลท (microsatellite) หรอ

เอสเอสอาร (simple sequence repeat, SSR) (Brown et al., 1996; Powell et al., 1996)

2.7 การวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชล าดบนวคลโอไทด

ล าดบนวคลโอไทดทเรยงตวเปนองคประกอบของสายดเอนเอหรอยนบางชนดของสงมชวตท

มขนาดสน ๆ สามารถใชในการจ าแนกชนดของสงมชวตโดยใชเปนรหสแทงดเอนเอ (DNA barcode)

ซงเทคนครหสแทงดเอนเอนมแนวคดมาจากแถบของรหสแทงสขาว-ด าสลบกนทใชในการตรวจสอบ

สนคา หนงสอ หรอใบอนญาตตาง ๆ เพอระบตวสนคาหรอเอกลกษณของสงนน ๆ โดยผทไดเสนอ

แนวความคดรหสแทงดเอนเอ คอ Hebert และคณะ (2003) ไดศกษาล าดบนวคลโอไทดของยน

Cytochrome c oxidase subunit I (COI) ทอยในไมโตคอนเดรย (mitochondria DNA, mtDNA)

เพอใชจ าแนกและระบชนดของผเสอ Lepidoptera จ านวนกวา 200 ชนด พบวาสามารถจ าแนกชนด

ของผเสอในกลมนไดถกตอง ซงแสดงใหเหนวาในสงมชวตแตละชนดมบรเวณอนรกษ (conserved

sequences region) ทสามารถใชไพรเมอรสากล (universal primer) ส าหรบเพมปรมาณดเอนเอ

บรเวณนนดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสเพอน ามาใชเปนรหสแทงดเอนเอได

ในป ค.ศ. 2004 โครงการ Consortium for the Barcode of Life (CBOL) ไดกอตงขน

และโครงการนไดจดท าฐานขอมล The Barcode of Life Data System (BOLD) ดวยความรวมมอ

19

ของ 150 สถาบน จาก 45 ประเทศทวโลก เพอจดประสงคในการพฒนาวธการทเปนมาตรฐานสากล

ในการศกษารหสแทงดเอนเอและสรางฐานขอมลรหสแทงดเอนเอของสงมชวตขน

ปจจบนการศกษารหสแทงดเอนเอในพชนนยงมนอย เนองจากล าดบนวคลโอไทดบนบรเวณ

ยน COI ไมสามารถน ามาประยกตใชไดในพช เนองจากไมโทคอนเดรยในพชมอตราการววฒนาการต า

ท าใหความผนแปรของล าดบนวคลโอไทดบนยน COI ระหวางชนดมนอยมากไมเพยงพอส าหรบการ

น ามาใชสนบสนนการจ าแนกชนดในกลมของพชได (Cho et al., 2004) นกวจยจงไดพยายามหา

ต าแหนงตาง ๆ ทอยบนสายดเอนเอ ทงสวนของยนและไมใชยน กระท งพบต าแหนงทเหมาะสม

ส าหรบการท ารหสแทงดเอนเออยบนยนทอยบนคลอโรพลาสตดเอนเอ (chloroplast DNA, cpDNA)

ซง CBOL Plant Working Group ไดเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดในพลาสตด (plastid) 7

ต าแหนง เพอประเมนความเหมาะสมส าหรบใชเปนรหสแทงดเอนเอ ไดแก atpF-atpH spacer,

matK, rbcL, rpoB, rpoC1, psbK-psbL spacer และ trnH-psbA spacer โดยมเกณฑในการ

พจารณา คอ วธการไดมาซงล าดบดเอนเอ คณภาพของขอมล และความสามารถในการจ าแนกชนด

(species) และไดสรปวาต าแหนงทเหมาะสมส าหรบใชเปนรหสแทงดเอนเอในพชคอ rbcL และ

matK ซงตองใชขอมลจากทงสองยนรวมกนในการระบชนดของพช

ยน ribulose-bisphosphate carboxylase (rbcL) เปนยนทอยในคลอโรพลาสตดเอนเอ

และสามารถแปลรหส (translation) เปน large subunit ของเอนไซม ribulose-1,5

bisphosphate carboxylase/oxygenase (RUBISCO) (Gielly and Taberlet, 1994) โดย

เกยวของกบกลไกการตรงคารบอนไดออกไซด (carbon dioxide fixation) ของพช ในกระบวนการ

การสงเคราะหดวยแสง (photosynthesis) เพอเปลยนคารบอนไดออกไซดในอากาศใหเปนโมเลกลท

ใหพลงงานสง ซงเอนไซมชนดนสามารถเรงปฏกรยาทง carboxylation และ oxygenation ได

ยน MaturaseK (matK) อยในคลอโรพลาสตดเอนเอ เปนยนทมบรเวณอนรกษสง มขนาด

ประมาณ 1,500 คเบส อยภายในอนทรอน (intron) ของยน trnK สามารถแปลรหสเปนเอนไซม

maturase ซงเกยวของกบการ splicing ของอนทรอนกลมท 2 นอกจากนยน matK ยงมอตราการ

แทนทของล าดบนวคลโอไทดในแตละชนดสงซงไดรบความนยมในการน ามาใชเปนตวเลอกใน

การศกษาววฒนาการของพช (Selvaraj et al., 2008)

ยน rpoB และ rpoC1 คอ ยนทแปลรหสไดเปนพอลเพปไทด (polypeptide) ทประกอบใน

เอนไซมอารเอนเอพอลเมอเรส (RNA polymerase) ในพลาสตด โดยยน rpoB และ rpoC1 เปน

20

ต าแหนงทเหมาะสมส าหรบใชเปนรหสแทงดเอนเอในพชเชนกน ณฐกร และคณะ (2554) ประเมน

ล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และ rpoB ส าหรบการใชเปนรหสแทงดเอนเอโดยศกษาในพชสกล

Alpinia spp. Roxb. (Zingiberaceae) พบวาล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB สามารถจ าแนกพช

ออกจากกนได 10 ชนด จากทงหมด 16 ชนด คดเปน 62.5 % สวนล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1

สามารถจ าแนกพชออกจากกนได 8 ชนด จากทงหมด 15 ชนด คดเปน 53.3 % ซงพบวาการจ าแนก

ชนดโดยใช rpoB หรอ rpoC1 ตามล าพงสามารถจ าแนกพชไดไมด

ชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA (trnH-psbA) อยในคลอโรพลาสตดเอนเอ นยม

น ามาศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของพชทมระดบอนกรมวธานต าและเหมาะสมส าหรบการใช

เปนรหสแทงดเอนเอ เนองจากบรเวณดงกลาวมบทบาทส าคญในกระบวนการการควบคมการ

แสดงออกของทง 2 ยน ซงยน trnH (tRNA-His) จะลอกรหส ไดเปน tRNAhis (GUG) และจบกบ

กรดอะมโนฮสทดน (histidine, H) เพอน าไปสการแปลรหส (transcription) เปนพอลเพปไทด และ

ยน psbA สามารถแปลรหสเปนโปรตน D1 โดยท าหนาทรวมกบโปรตน D2 ของระบบแสง II ใน

กระบวนการสงเคราะหดวยแสง (Degtjareva et al., 2012)

นฤมล และคณะ (2557) จ าแนกพนธและวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไม

สกลกหลาบดวยล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะ พบวาบรเวณ ITS ไมเหมาะสมทจะน ามาใช

เนองจากไมสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอของกลวยไมไดครบทง 13 พนธ นอกจากนยงพบวายน

matK และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA สามารถจ าแนกพนธกลวยไมออกจากกนได

11 พนธ โดยไมสามารถแยกเอองกหลาบชมพกระบกบเอองกหลาบนานออกจากกน ในขณะทล าดบน

วคลโอไทดของยน rpoC1 และ rpoB สามารถจ าแนกเอองกหลาบชมพกระบกบเอองกหลาบนาน

ออกจากกนได

มทนา และคณะ (2552) ศกษาล าดบนวคลโฮไทดของยน matK เพอใชเปนรหสแทงดเอนเอ

ส าหรบการระบพชสกล Alpinia spp. Roxb. พบวาขอมลล าดบดเอนเอบรเวณยน matK สามารถ

จ าแนกพชได 85.97 % แตไมสามารถจ าแนกพชชนดทมล าดบดเอนเหมอนกนออกจากกนได ดงนน

ล าดบนวคลโอไทดของณยน matK มความเหมาะสมในการใชเปนรหสแทงดเอนเอ เนองจากสามารถ

ใชไพรเมอรสากลในการเพมปรมาณจากปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสได อยางไรกตาม ควรใชล าดบด

เอนเอบรเวณอนรวมดวย

21

พรรษา และคณะ (2556) ศกษารหสแทงดเอนเอส าหรบใชระบชนดสมนไพรแปรรปสกล

Senna พบวาชนดเอนทอยระหวางยน trnH-psbA สามารถระบชนดของพชสกล Senna ไดดทสด

โดยมคาความผนแปรของล าดบนวคลโอไทด 0.04-0.60 สวนล าดบนวคลโอไทดของยน matK และ

rbcL มคาความผนแปร 0.02-0.33 และ 0.04-0.25 ตามล าดบ

นฤมล และคณะ (2557) วเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของขาวมส (colored rice

cultivars) โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1 พบวาขาวมสมความสมพนธทาง

พนธกรรมสง แตล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1 ในขาวมสทง 10 พนธ มความแตกตาง

กน 50 และ 6 ต าแหนง ตามล าดบ ซงสามารถประยกตใชในการจ าแนกพนธขาวมสได

ณฐกร และคณะ (2554) ประเมนล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และ rpoB ในการใช

เปนรหสแทงดเอนเอในพชสกล Alpinia spp. พบวายน rpoB สามารถจ าแนกพชออกจากกนได 10

ชนด จากทงหมด 16 ชนด คดเปน 62.5 % สวนยน rpoC1 สามารถจ าแนกพชออกจากกนได 8 ชนด

จากทงหมด 15 ชนด คดเปน 53.3 % การจ าแนกชนดโดยใช rpoB หรอ rpoC1 ตามล าพงสามารถ

จ าแนกพชไดไมด แตเมอใชขอมลจากยนหลายต าแหนงมาวเคราะหรวมกนเพอจ าแนกชนดพช พบวา

สามารถจ าแนกพชไดดขน โดยยนคทมประสทธภาพสงทสดในการจ าแนกพชแตละชนดออกจากกน

คอ ยน rpoB และ matK ซงสามารถจ าแนกพชออกจากกนไดทกชนด

นฤมล และคณะ (2557) จ าแนกพนธและวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไม

สกลหวายกลมเอองสาย (Dendrobium) โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน matK และ rpoC1 พบวา

แผนภมความสมพนธทางพนธกรรม (phylogenetic tree) ของยน matK สามารถจ าแนกกลวยไม

สกลหวายกลมเอองสายได 7 ชนด สวนแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของยน rpoC1 สามารถ

จ าแนกกลวยไมสกลหวายกลมเอองสายไดทง 13 ชนด ซงใหคาสมประสทธความตาง (distance

coefficient) เปน 0.000-0.027 และ 0.002-0.014 ตามล าดบ

Liu และคณะ (2012) ประยกตใชรหสแทงดเอนเอส าหรบระบชนดของพชสกล Araliaceae

พบวาจากการตรวจสอบโดยอาศยดเอนเอ 5 ต าแหนง (matK, rbcL, ITS2, psbA-trnH และ ycf5)

พบวาล าดบนวคลโอไทดบรเวณ ITS2 สามารถระบชนดของพชไดถกตองในระดบสกลและสปชย

85.23 % และ 97.29 % ตามล าดบ

Ma และคณะ (2014) ระบชนดของพช Liliaceae (Tulipa edulis) โดยใชรหสแทงดเอนเอ

พบวาดเอนเอทง 3 ต าแหนง (matK, psbA-trnH และ rbcL) สามารถใชในการระบชนดของพช

22

T. edulis โดย rbcL และ psbA-trnH สามารถระบและจ าแนกชนดไดอยางถกตอง สวนยน matK

สามารถบงบอกถงความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดระหวางชนดได ดงนนยน matK จงมความ

เหมาะสมมากกวายน rbcL และ psbA-trnH

นฤมล และคณะ (2557) วเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสงโตกลอกตาหม

สงโตสยาม (Bulbophyllum) โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยนจ าเพาะ พบวาล าดบนวคลโอไทดของ

ยน matK, rbcL, rpoB, rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA ไมมล าดบนวคลโอ

ไทดบรเวณใดทสามารถแยกกลวยไมสกลสงโตกลอกตาหมสงโตสยามทง 12 ชนด ออกจากกนได

ทงหมด แตการใชล าดบนวคลโอไทดของยน matK และ rbcL รวมกนสามารถแยกกลวยไมสงโตสกล

กลอกตาหมสงโตสยามออกจากกนได ยกเวนสงโตกามปใหญและสงโตกามปแดง ซงสามารถแยกดวย

การใชล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 หรอชนดเอนเอ trnH-psbA

ณฐกานต และคณะ (2557) จดจ าแนกพชวงศบวสาย (Nymphaeaceae) โดยใชคลอโร

พลาสตดเอนเอ โดยใชล าดบดเอนเอของยน trnK รวมกบยน matK และบรเวณระหวางยน trnL-F

ในคลอโรพลาสต พบวาชนดเอนเอทเพมปรมาณไดมขนาด 1,180-1,209 คเบส และ 991-1,095 ค

เบส ตามล าดบ ผลการศกษาพบวาสามารถจ าแนกพชในวงศบวสายออกไดเปน 3 กลม คอ กลมบว

ญปน (Nuphar) กลมไสปลาไหล (Barclaya) บวสาย บวกระดง ยรอาเร และออนดเนย

(Nymphaea, Victoria, Euryale and Ondinea)

2.8 การจ าแนกมะมวงโดยใชเครองหมายดเอนเอ

Xin-hua และคณะ (2007) ประเมนความสมพนธทางพนธกรรมและความหลากหลายของ

มะมวงโดยใชเครองหมาย chloroplast inter-simple sequence repeat (cplSSR) พบวาม

ไพรเมอร 8 ค ทสามารถท าใหเกดความหลากรปของแถบดเอนเอ (จากไพรเมอรทงหมด 50 ค )

คดเปน 77.2 % โดยเครองหมาย cplSSR สามารถระบชนดของพนธมะมวงได

Wichan และคณะ (1999) ระบชนดของมะมวงในประเทศไทย โดยศกษาความผนแปรทาง

พนธกรรมดวยเครองหมายไมโครแซทเทลไลท พบวาไพรเมอร 40 ค มเพยง 7 ค ทสามารถท าใหเกด

ความหลากรปของแถบดเอนเอ และสามารถใชสรางลายพมพดเอนเอ (DNA fingerprinting) เพอ

จ าแนกจโนไทปของมะมวง

23

Shamili และคณะ (2012) ศกษาความหลากหลายทางพนธกรรมของจโนไทปมะมวง

Iranian (M. indica L.) โดยใชเครองหมายไมโครแซทเทลไลท พบวามะมวงในอหราน 41 พนธ เมอ

ตรวจสอบดวยไพรเมอรไมโครแซทเทลไลท 16 ค พบวาม 56 แอลลล ทสามารถตรวจสอบได มความ

หลากรป 15 แบบ (เฉลย 3.7 แอลลลตอต าแหนง) ซงสามารถแยกมะมวงพนธอหรานออกจากพนธ

ตนก าเนดจากอนเดยและปากสถานได

Tsai และคณะ (2013) ระบชนดและวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวง

(M. indica L.) ในไตหวนโดยใชไมโครแซทเทลไลท 37 ชนด พบวามจ านวนแอลลลตอต าแหนง 2-11

แอลลล (มทงหมด 182 แอลลล เฉลย 4.86 แอลลลตอต าแหนง) แสดงใหเหนวา การวเคราะหขอมล

ไมโครแซทเทลไลทเปนวธทมประสทธภาพส าหรบระบชนดพนธ

Hidayat และคณะ (2013) ศกษาความหลากหลายทางชวภาพของมะมวงโดยใชล าดบนวคล

โอไทดบรเวณต าแหนง ITS พบวาสามารถแยกมะมวงออกได 3 กลม โดยในกลมแรกสวนมากเปน

มะมวงทพบในประเทศมาเลเซย กลมทสองสวนมากเปนมะมวงทพบในประเทศไตหวน และกลม

สดทายเปนมะมวงทพบไดในประเทศอนโดนเซย แสดงใหเหนวามะมวงในแตละแหลงตางมความ

ใกลชดกน

Suparman และคณะ (2013) วเคราะหแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวงโดย

ใชล าดบนวคลโอไทดจากยน rbcL ในคลอโรพลาสต พบวามะมวง สกล Mangifera ทง 16 ชนด จาก

อนโดนเซยและไทย สามารถแยกออกเปนกลมได 4 กลม และสามารถแยก M. laurina และ M.

Macrocarpa ของไทยและอนโดนเซยออกจากกนได

ถงแมวาในปจจบนการจดจ าแนกชนดของพชโดยใชเทคนครหสแทงดเอนเอจะเปนทนยม

เนองจากสามารถกระท าไดอยางรวดเรวและมความถกตองแมนย า โดยเทคนครหสแทงดเอนเอนเปน

การเลอกเพยงต าแหนงใดต าแหนงหนงทเปนต าแหนงอนรกษของพชมาใชในการวเคราะห ซ ง

เหมาะสมตอการจ าแนกพชทตางชนดหรอสปชส หากแตพชทใชในการจ าแนกมสปชสเดยวกน อาจ

เปนการยากส าหรบการเทคนคนในการจ าแนกชนดของพชนน ๆ เนองจากพชทมสปชสเดยวกนจะม

ความใกลชดทางพนธกรรมสง

24

2.9 การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม

แผนภมความสมพนธทางพนธกรรม คอ แผนภาพทแสดงความสมพนธทางววฒนาการของ

สงมชวต โดยแผนภาพนเปนเครองมอส าหรบการอธบายและเปนขอมลประกอบส าหรบการบงชความ

หลากหลายทางชวภาพ การจดหมวดหม เพอใหมความเขาใจในววฒนาการของสงมชวตนน ๆ

การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมนนอาศยล าดบนวคลโอไทดของยนหรอล าดบ

กรดอะมโนของโปรตนเพอเปนขอมลส าหรบการใชจ าแนกชนดของสงมชวต โดยกอนการสราง

แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมตองเปรยบเทยบ (alignment) ล าดบนวคลโอไทดของชดขอมล

เพอดความคลายคลงกน (homologous) กอนจงสามารถสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมได

การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมสามารถสรางได 2 แบบ คอ character-based

และ distance-based

2.9.1 Character-based

การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชวธ character-based เปน

วธการสรางแผนภมจากการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดหรอล าดบกรดอะมโนโดยตรง แลวสราง

แบบจ าลองโมเดล (model) ววฒนาการของแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของสงมชวต

(สรนทร, 2552)

2.9.2 Distance-based

การสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชวธ distance-based นน เปน

วธการสรางแผนภมจากการเปรยบเทยบเปนค (pairwise) ของล าดบนวคลโอไทดหรอล าดบกรด

อะมโน โดยอาศยระยะหางซงเกดจากการเปลยนล าดบนวคลโอไทดหรอล าดบกรดอะมโนเปนคา

เมทรกซ (matrix) ระยะหางระหวางล าดบนวคลโอไทดหรอล าดบกรดอะมโนนน ๆ เพอใชส าหรบการ

สรางแบบจ าลองโมเดล (model) ววฒนาการของแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของสงมชวต

(สรนทร, 2552)

25

บทท 3

วธการวจย

3.1 ตวอยางพนธมะมวง

มะมวงทพบไดในประเทศไทยทง 18 ชนด ไดแก โชคอนนต มะปรงปา ทองด า เจาคณทพย

กะลอน แรด ศรสยาม ฟาลน เพชรบานลาด หนองแซง หนงกลางวน มนขนศร แหว เขยวเสวย แกว

น าดอกไม ทลถวายทะวาย และอกรอง

3.2 เครองมอและอปกรณ

3.2.1 การสกดดเอนเอและการตรวจสอบคณภาพของดเอนเอ

ไดแก (1) ชดโกรงบดตวอยาง (mortar และ pestle) (2) กระบอกตวง (cylinder)

(3) หลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร และ 50 มลลลตร (4) ปเปตอตโนมต (automatic

pipettes) และทปขนาดตาง ๆ (5) ตดดควน (fume hood) (6) เครองปรบอณหภมดวยน า (water

bath) (7) เครองหมนเหวยงความเรวสง (high speed refrigerated centrifuge) (8) เครองชง

ทศนยม 4 ต าแหนงไฟฟา (electric balance) (9) เครองท าความเยน (freezer) ไดแก ตแช –20 oC

และตเยน 4 oC (10) เครองวดความเปนกรดเปนดาง (pH meter) (11) เครองผสม (vortex mixer)

(12) ตอบแหง (hot air oven) (13) หมอนงความดน (autoclave) (14) เครองวดคาการดดกลนแสง

(spectrophotometer) เปนตน

3.2.2 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฎกรยาลกโซพอลเมอเรส

ไดแก (1) หลอดสาหรบทาปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส (2) หลอดเซนตรฟวจขนาด

1.5 มลลลตร (3) ปเปตอตโนมต (automatic pipettes) และทปขนาดตาง ๆ (4) เครองผสม

(vortex mixer) (5) เครองเพมปรมาณสารพนธกรรม (thermal cycler machine) (6) เครองจาย

กระแสไฟฟา (power supply) (7) เครองชงทศนยม 4 ต าแหนงไฟฟา (electric balance) (8) ชด

อปกรณอเลกโทรโฟรซส (electrophoresis set) (9) เตาไมโครเวฟ (microwave) (10) เครอง

ถายภาพเจล (UV transilluminator) เปนตน

26

3.3 สารเคม

3.3.1 การสกดดเอนเอ

ไดแก (1) ซทลไตรเมทลแอมโมเนยมโบรไมด (CTAB, cetyltrimethyl

ammonium bromide) (2) โซเดยมคลอไรด (sodium chloride, NaCI) ความเขมขน 2.5 โมลาร

(3) โซเดยมโดเดอลซลเฟต (sodium dodecyl sulfate, SDS) (4) เอทลนไดอามนเตตราอะซตก

(ethylene diamine tetra acetic acid, EDTA) พเอช 8.0 ความเขมขน 20 มลลโมลาร (5) ทรส-

คลอไรด (Tris-HCI) พเอช 8.0 ความเขมขน 100 มลลโมลาร (6) โซเดยมเมตาไบซลเฟส (sodium

metabisulfite, Na2S2O5) (7) พอลไวนลไพโรลโดน (polyvinyl pyrolidone, PVP) (8) เบตาเม

อแคปโตเอทานอล (β–mercaptoethanol) (9) คลอโรฟอรม (chloroform) (10) ไอโซ-เอมล

แอลกอฮอล (isoamylalcochol) (11) ลเนยรพอลอะครลาไมด (linear polyacrylamide) (12) ไอ

โซโพรพานอล (isopropanol) (13) เอทานอลบรสทธ (absolute ethanol) (14) เอนไซม RNase A

(15) ฟนอล (phenol) (16) โซเดยมอะซเตต (sodium acetate) พเอช 5.2 ความเขมขน 3 โมลาร

(17) สารละลายบฟเฟอร TE (10 mM Tris-HCl pH 8.0, 1mM EDTA pH 8.0) ความเขมขน 10

มลลกรมตอมลลลตร เปนตน

3.3.2 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฎกรยาลกโซพอลเมอเรส

ไดแก (1) ชดสารเคมส าเรจรป Taq DNA polymerase (Recombinant,

Vivantis®) ประกอบดวย เอนไซม Taq DNA polymerase ความเขมขน 5 ยนตตอไมโครลตร

สารละลายบฟเฟอร A ความเขมขน 10 เทา แมกนเซยมคลอไรด (MgCl2) ความเขมขน 50 มลลโม

ลาร (2) dNTPs (deoxyribonucleotide triphosphate) ความเขมขน 2 มลลโมลาร (3) น ากลน

เปนตน

3.3.3 การวเคราะหเจลอะกาโรสอเลกโทรโฟรซส

ไดแก (1) เจลอะกาโรส (agarose gel) (2) สารละลายบฟเฟอร TAE ความเขมขน

1 เทา (Tris-base, EDTA pH 8.0 และ glacial acetic acid) (3) สารละลายบฟเฟอร DNA loading

ความเขมขน 6 เทา (glyceral และ bromophenol blue) (4) เอธเดยมโบรไมด (ethidium

bromide) ความเขมขน 10 มลลกรมตอมลลลตร (5) ดเอนเอมาตรฐาน (DNA Ladder,

(InvitrogenTM Life Technology, USA) และ (6) น ากลน เปนตน

27

3.4 วธการด าเนนงาน

3.4.1 การสกดดเอนเอ

สกดดเอนเอดวยวธประยกตจาก Doyle และ Doyle (1987) โดยชงใบมะมวง

ปรมาณ 4-6 กรม ใสในชดโกรงบดตวอยาง เตมบฟเฟอรสกด (Extraction buffer : 4 % CTAB, 2.5

M NaCl, 0.6 % SDS, 20 mM EDTA pH 8.0, 100 mM Tris-HCl pH 8.0 และ 0.1 % Sodium

metabisulfite) ซงอนไวในอางน าควบคมอณหภม 60 องศาเซลเซยส ปรมาตร 20 มลลลตร และพอ

ลไวนลไพโรลโดนปรมาณ 0.3 กรม บดใหละเอยดเปนเนอเดยวกน เทสวนผสมทงหมดลงในหลอดเซน

ตรฟวจขนาด 50 มลลลตร เตมเบตาเมอแคปโตเอทานอล ปรมาตร 20 ไมโครลตร น าไปบมในอางน า

ควบคมอณหภม 60 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมงโดยมการพลกหลอดไป-มาเปนระยะ แลววาง

ใหเยนทอณหภมหอง เตมคลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล อตราสวน 24:1 ปรมาตร 1 เทาของ

ปรมาตรทงหมด ผสมใหเขากน แลวน าไปปนเหวยงทความเรว 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10

นาท ดดสารละลายสวนบนใสหลอดเซนตรฟวจใหม เตมลเนยร -พอลอะครลาไมด ปรมาตร 100

ไมโครลตร และไอโซโพรพานอล ปรมาตร 1 เทาของปรมาตรทงหมด ผสมใหเขากน น าไปบมท

อณหภม -20 องศาเซลเซยส เปนเวลา 30 นาท แลวน าไปปนเหวยงทความเรว 12,000 รอบตอนาท

เปนเวลา 15 นาท เทสารละลายทงและลางตะกอนดวย 70 เปอรเซนต เอทานอล ท าใหตะกอนแหง

ดวยการระเหยเอทานอลทอณหภม 60 องศาเซลเซยส เปนเวลา 10 นาท ละลายตะกอนดวยบพเฟอร

TE ปรมาตร 500 ไมโครลตร แลวถายสารละลายใสหลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตร เตมเอนไซม

RNase A ปรมาตร 2.5 ไมโครลตร บมทอณหภม 37 องศาเซลเซยส เปนเวลา 1 ชวโมง เตม ฟนอล :

คลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล อตราสวน 25:24:1 ปรมาตร 500 ไมโครลตร ผสมใหเขากน

แลวน าไปปนเหวยงทความเรว 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10 นาท ดดสารละลายสวนบนใส

หลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตรใหมเตมคลอโรฟอรม : ไอโซเอมลแอลกอฮอล อตราสวน 24:1

ปรมาตร 500 ไมโครลตร แลวน าไปปนเหวยงทความเรว 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 10 นาท ดด

สารละลายสวนบนใสหลอดเซนตรฟวจขนาด 1.5 มลลลตรใหม เตมลเนยรพอลอะครลาไมด ปรมาตร

5 ไมโครลตร โซเดยมอะซเตต พเอช 5.2 ความเขมขน 3 โมลาร 10 เปอรเซนตของปรมาตรทงหมด

และไอโซโพรพานอล ปรมาตร 1 เทาของปรมาตรทงหมด น าไปบมทอณหภม -20 องศาเซลเซยส

เปนเวลา 30 นาท แลวน าไปปนเหวยงทความเรว 12,000 รอบตอนาท เปนเวลา 15 นาท เท

สารละลายทงและลางตะกอนดวย 70 เปอรเซนต เอทานอล ท าใหตะกอนแหงดวยการระเหยเอทา

28

นอลทอณหภม 60 องศาเซลเซยส เปนเวลา 10 นาท ละลายตะกอนดวยบพเฟอร TE ปรมาตร 100

ไมโครลตร

3.4.2 การตรวจสอบปรมาณและคณภาพของดเอนเอ

ตรวจสอบปรมาณดเอนไดดวยวธการวดคาการดดกลนแสงอลตราไวโอเลต

(ultraviolet) ดวยเครองวดคาการดดกลนแสง (spectrophotometer) ทความยาวคลน 260 นาโน-

เมตร และ 280 นาโนเมตร โดยดอตราสวนของคาดดกลนแสงทความยาวคลน 260 และ 280 นาโน-

เมตร (O.D260/O.D280 ) และตรวจสอบคณภาพของดเอนเอดวยวธเจลอะกาโรสอเลกโทรโฟรรซส

โดยใชความเขมขนของเจลอะกาโรส 0.8 เปอรเซนต จากนนยอมแถบดเอนเอดวยเอธเดยวโบรไมด

ความเขมขน 0.5 ไมโครกรมตอมลลลตร เปนเวลา 5 นาท จากนนตรวจสอบดวยเครองถายภาพเจล

(UV documentation)

3.4.3 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสโดยเทคนครหสแทง

ดเอนเอ

น าดเอนเอตวอยางมะมวงทง 18 พนธ มาเจอจางใหมความเขมขน 100 นาโนกรม

ตอไมโครลตร จากนนเพมปรมาณชนดเอนเอบรเวณยน rbcL, rpoB, rpoC1 และสวนของดเอนเอท

อยระหวางยน trnH และ psbA ดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส โดยใชไพรเมอรชนดทมล าดบสากล

(Universal primer) (ตารางท 3.1) โดยมองคประกอบในปฏกรยาและสภาวะทใชในปฏกรยาลกโซ

พอลเมอเรส ดงตารางท 3.2 และ 3.3 ตามล าดบ

29

ตารางท 3.1 ไพรเมอรทใชส าหรบรหสแทงดเอนเอ

ยน ชอไพรเมอร ล าดบนวคลโอไทด (5’ 3’) อางอง

rbcL rbcL_ F TCACCACAAACAGAAACTAAAGC CBOL, 2005

rbcL _R GGCACAAAATAAGAAACGATCTC CBOL, 2005

rpoB rpoB _F AAGTGCATTGTTGGAACTGG Hollingsworth et al., 2009 rpoB _R CCGTATGTGAAAAGAAGTATA Hollingsworth et al., 2009

rpoC1 rpoC1_F GTGGATACACTTCTTGATAATGG CBOL, 2009

rpoC1_R TGAGAAAACATAAGTAAACGGGC CBOL, 2009

trnH-psbA trnH_F CGCGCATGGTGGATTCACAATCC Tate and Simpson, 2003

psbA_R GTTATGCATGAACGTAATGCTC Sang et al. 1997

ตารางท 3.2 องคประกอบทใชในปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

สาร ปรมาตร (ไมโครลตร)

100 ng/µl ดเอนเอแมแบบ 2

10 µM F Primer 2 10 µM R Primer 2

50 mM MgCl2 3 2 mM dNTP 4

10X บฟเฟอร 4

5 unit/µl Taq DNA polymerase 0.25 ddH2O 22.75

ปรมาตรรวม 40

30

ตารางท 3.3 สภาวะทใชในปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

ขนตอน อณหภม

(องศาเซลเซยส) ระยะเวลา

(นาท) จ านวนรอบ

Initiation Denaturation 94 3.00 -

Denaturation Annealing Extension

94 0.30

35 53 0.40 72 0.40

Final Extension 72 5.0 -

3.4.4 การวเคราะหผล

หาล าดบนวคลโอไทด (sequencing) โดยน าสงบรษท Solgent (ประเทศเกาหล)

จากนนน าล าดบนวคลโอไทดในแตละยนของมะมวงแตละพนธ มาเปรยบเทยบล าดบขอมลกนแบบ

การเทยบเรยงกลม (multiple alignment) โดยใชโปรแกรม ClustalW2 (http://www.ebi.ac.uk/

Tools/msa/clustalw2/) เพอวเคราะหความแตกตางทางพนธกรรมของมะมวงแตละพนธ และฝาก

เกบขอมลล าดบนวคลโอไทดไวใน GenBank ของฐานขอมลออนไลน NCBI (National center for

biotechnology information) หลงจากนนยงน าผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดทไดจาก

โปรแกรม ClustalW2 มาหาคาดชนความแตกตางและน ามาสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม

(phylogenetic tree) ดวยโปรแกรม MEGA รน 6.0 (molecular evolutionary genetics

analysis) โดยเลอกการจดกลมแบบ Neighbor-joining (NJ

32

บทท 4

ผลการวจยและอภปรายผล

4.1 ผลการวจย

4.1.1 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL

4.1.1.1 การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส

การเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสของมะมวงทง

18 พนธ โดยใชคไพรเมอรทมความจ าเพาะตอยน rbcL พบวาสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอไดทง

18 พนธ โดยใหแถบดเอนเอทมขนาดประมาณ 650 คเบส (ภาพท 4.1)

ภาพท 4.1 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rbcL ในมะมวง 18 พนธดวย

ปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสโดยใชไพรเมอรทมความจ าเพาะ [M คอดเอนเอมาตรฐาน

1 Kb Plus DNA Ladder (InvitrogenTM Life Technology, USA), 1-18 คอ (1) โชค

อนนต (2) มะปรงปา (3) ทองด า (4) เจาคณทพย (5) กะลอน (6) แรด (7) ศรสยาม (8)

ฟาลน (9) เพชรบานลาด (10) หนองแซง (11) หนงกลางวน (12) มนขนศร (13) แหว

(14) เขยวเสวย (15) แกว (16) น าดอกไม (17) ทลถวายทะวาย และ (18) อกรอง]

33

4.1.1.2 การหาล าดบนวคลโอไทด

เมอหาล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอหลงจากเพมปรมาณดวยปฏกรยา

ลกโซพอลเมอเรสของบรเวณยน rbcL โดยน าสงบรษท Solgent (ประเทศเกาหลใต) จากนนน าล าดบ

นวคลโอไทดของยน rbcL ของมะมวงแตละพนธทไดไปเปรยบเทยบกบขอมลในฐานขอมล NCBI

(National Center for Biotechnology Information) พบวาล าดบนวคลโอไทดทไดตรงกบขอมล

ล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในพชชนดอนทพบในฐานขอมลออนไลน หลงจากนนไดฝากเกบ

ขอมลล าดบนวคลโอไทดของยนดงกลาว ไวในฐานขอมล NCBI โดยมหมายเลขเฉพาะ (accession

number) ดงตารางท 4.1

34 ตารางท 4.1 หมายเลขเฉพาะของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL, rpoB, rpoC1 และชนดเอนเอท

อยระหวางยน trnH กบ psbA

พนธมะมวง หมายเลขเฉพาะของล าดบนวคลโอไทด

rbcL rpoB rpoC1 trnH-psbA

โชคอนนต KR610374 KR422626 KR028419 KR071822 มะปรงปา KR610375 KR422627 KR071805 KR071823

ทองด า KR610376 KR422628 KR071806 KR071824 เจาคณทพย KR610377 KR422629 KR071807 KR071825

กะลอน KR610378 KR422630 KR071808 KR071826

แรด KR610379 KR422631 KR071809 KR071827 ศรสยาม KR610380 KR422632 KR071810 KR071828

ฟาลน KR610381 KR422633 KR071811 KR071829

เพชรบานลาด KR610382 KR422634 KR071812 KR071830 หนองแซง KR610383 KR422635 KR071813 KR071831

หนงกลางวน KR610384 KR422636 KR071814 KR071832 มนขนศร KR610385 KR422637 KR071815 KR071833

แหว KR610386 KR422638 KR071816 KR071834

เขยวเสวย KR610387 KR422639 KR071817 KR071835 แกว KR610388 KR422640 KR071818 KR071836

น าดอกไม KR610389 KR422641 KR071819 KR071837

ทลถวายทะวาย KR610390 KR422642 KR071820 KR071838 อกรอง KR071821 KR422643 KR071821 KR071839

35

4.1.1.3 การเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทด

น าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธทไดจากการเพมปรมาณชนด

เอนเอบรเวณยน rbcL มาเปรยบเทยบดวยโปรแกรม ClustalW พบวาไดผลดงภาพท 4.2

12 TCACCACAAACAGAAACTAAAGCAAGTGTTGGATTCAAAGCCGGCGTTAAAGACTATAAA 60


















************************************************************

12 TTGACTTATTATACTCCTGACTATATAACCAAAGATACTGATATCTTGGCAGCATTCCGA 120

















2 TTGAATTATTATACTCCTGACTATATAACCAAAGATACTGATATCTTGGCAGCATTCCGA 120

**** *******************************************************

ภาพท 4.2 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL [1-18 คอ (1) โชคอนนต (2) มะปรง

ปา (3) ทองด า (4) เจาคณทพย (5) กะลอน (6) แรด (7) ศรสยาม (8) ฟาลน (9) เพชร

บานลาด (10) หนองแซง (11) หนงกลางวน (12) มนขนศร (13) แหว (14) เขยวเสวย

(15) แกว (16) น าดอกไม (17) ทลถวายทะวาย และ (18) อกรอง (รปแบบการ

เปลยนแปลง – คอ อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน – คอ พวรนทรานสชน)]

36 12 GTAACTCCTCAACCTGGAGTTCCACCCGAGGAAGCAGGGGCTGCGGTAGCTGCGGAATCT 180

18 GTAACTCCTCAACCTGGAGTTCCACCCGAGGAAGCAGGGGCTGCGGTAGCTGCGGAATCT 180

















************************************************************

12 TCTACTGGTACATGGACAACTGTGTGGACCGATGGGCTTACCAGCCTTGATCGTTACAAA 240


















************************************************************

12 GGACGATGCTACAACATTGAGCCCGTTGCTGGAGAAGAAAATCAATATATATGTTATGTA 300


















************************************************************





เปลยนแปลง – คอ อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน – คอ พวรนทรานสชน)] (ตอ)

37 12 GCTTACCCTTTAGACCTTTTTGAAGAAGGTTCTGTTACTAACATGTTTACTTCCATTGTG 360

18 GCTTACCCTTTAGACCTTTTTGAAGAAGGTTCTGTTACTAACATGTTTACTTCCATTGTG 360

















************************************************************

12 GGTAATGTATTTGGGTTCAAAGCCCTGCGCGCTCTACGTCTAGAGGATCTACGAATCCCT 420


















************************************************************

12 ACCGCGTATATAAAAACTTTCCAAGGACCACCGCATGGGATCCAAGTTGAGAGAGATAAA 480

















2 ACCGCGTATATAAAAAGTTTCCAAGGACCACCGCATGGGATCCAAGTTGAGAGAGATAAA 480

**************** *******************************************






38 12 TTGAACAAGTATGGCCGTCCCCTATTGGGATGTACTATTAAACCGAAATTAGGTTTATCC 540

18 TTGAACAAGTATGGCCGTCCCCTATTGGGATGTACTATTAAACCGAAATTAGGTTTATCC 540

















************************************************************

12 GCTAAGAACTACGGTAGAGCTGTTTATGAATGTCTACGTGGTGGACTTGACTTTACCAAA 600


















************************************************************

12 GACGATGAGAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCT-A 653

18 GACGATGAGAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCT-A 653

3 GACGATGAGAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCTTA 654








14 GACGATAAGAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCTTA 654

1 GACGATGACAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCTTA 654

9 GACGATGAGAACGTGAACTCCCAACCATTTATGCGTTGGAGAGATCGTTTCTTT 654






****** * *******************************************






39 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในมะมวงทง 18 พนธ พบวาไมสามารถ

แยกมะมวงทง 18 พนธออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน อยางไรกตาม ล าดบ

นวคลโอไทดของยน rbcL นสามารถแยกมะมวงได 3 พนธ คอ โชคอนนต มะปรงปา และเขยวเสวย

และจากการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธ พบวามต าแหนงของล าดบนวคล

โอไทดทแตกตางกนอย 6 ต าแหนง (ตารางท 4.2) ซงเกดจากการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทด โดย

เปนการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดแบบทรานสเวอรชน 4 ต าแหนงเปนการเปลยนแปลงล าดบน

วคลโอไทดแบบพวรนทรานสชน 1 ต าแหนง และเปนการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดแบบอนเดล

1 ต าแหนง โดยต าแหนงทสามารถระบความแตกตางส าหรบการแสดงเอกลกษณของมะมวงพนธ

มะปรงปา คอ ต าแหนงท 65 และ 437 ต าแหนงทสามารถระบความแตกตางส าหรบการแสดง

เอกลกษณของมะมวงพนธเขยวเสวย คอ ต าแหนงท 607 และต าแหนงทสามารถระบความแตกตาง

ส าหรบการแสดงเอกลกษณของมะมวงพนธโชคอนนต คอ ต าแหนงท 609

ตารางท 4.2 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ในมะมวงพนธตาง ๆ

ต าแหนง ชนดของมะมวง รปแบบความ

แตกตาง รปแบบความเปลยนแปลง

65 มะปรงปา C เปน A ทรานสเวอรชน

437 มะปรงปา C เปน G ทรานสเวอรชน

607 เขยวเสวย G เปน A พวรนทรานสชน

609 โชคอนนต G เปน C ทรานสเวอรชน

653 มนขนศรและอกรอง Gap (deletion) อนเดล

654 มะปรงปา กะลอน แรด ศรสยาม

ฟาลน และเพชรบานลาด T เปน A ทรานสเวอรชน

40

4.1.1.4 การวเคราะหล าดบนวคลโอไทด

เมอน าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธ ทไดจากการเพมปรมาณ

ชนดเอนเอของยน rbcL มาวเคราะหดวยโปรแกรม MEGA พบวาสามารถสรางแผนภมความสมพนธ

ทางพนธกรรมได แตเมอวเคราะหแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมแลวไมสามารถแยกมะมวงทง

18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทด เหมอนกน โดยแผนภมความสมพนธทาง

พนธกรรมของยน rbcL เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining สามารถแยกมะมวงเขยวเสวย โชค

อนนต และมะปรงปาได (ภาพท4.3) และมคาความแตกตางทางพนธกรรมเทากบ 0.000-0.006

(ตารางท 4.3)

ภาพท 4.3 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rbcL เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-

Joining

41 ตารางท 4.3 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL

โชคอนนต 0.000

มะปรงปา 0.006 0.000

ทองด า 0.002 0.005 0.000

เจาคณทพย 0.002 0.005 0.000 0.000

กะลอน 0.003 0.003 0.002 0.002 0.000

แรด 0.003 0.003 0.002 0.002 0.000 0.000

ศรสยาม 0.003 0.003 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000

ฟาลน 0.003 0.003 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000

เพชรบานลาด 0.003 0.003 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

หนองแซง 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000

หนงกลางวน 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000

มนขนศร 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000

แหว 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000

เขยวเสวย 0.003 0.006 0.002 0.002 0.003 0.003 0.003 0.003 0.003 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000

แกว 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000

น าดอกไม 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000 0.000

ทลถวายทะวาย 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000 0.000 0.000

อกรอง 0.002 0.005 0.000 0.000 0.002 0.002 0.002 0.002 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000 0.002 0.000 0.000 0.000 0.000

โชคอ

นนต

มะปร

งปา

ทองด

า

เจาค

ณทพย

กะลอ

น

แรด

ศรสย

าม

ฟาลน

เพชร

บานล

าด

หนอง

แซง

หนงก

ลางว

น

มนขน

ศร

แหว

เขยว

เสวย

แกว

น าดอ

กไม

ทลถว

ายทะ

วาย

อกรอ

ง

42

4.1.2 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB



18 พนธ โดยใชคไพรเมอรทมความจ าเพาะตอยน rpoB พบวาสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอไดทง


ภาพท 4.4 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rpoB ในมะมวง 18 พนธดวย







เมอหาล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอหลงจากเพมปรมาณดวยปฏกรยา

ลกโซพอลเมอเรสของยน rpoB โดยน าสงบรษท Solgent (ประเทศเกาหลใต) จากนนน าล าดบนวคล

โอไทดของมะมวงแตละพนธทไดไปเปรยบเทยบกบขอมลในฐานขอมล NCBI (National Center for

43 Biotechnology Information) พบวาล าดบนวคลโอไทดทไดตรงกบขอมลล าดบนวคลโอไทดของยน

ในพชชนดอนทพบในฐานขอมลออนไลน หลงจากนนไดฝากเกบขอมลล าดบนวคลโอไทดของยน

ดงกลาวไวในฐานขอมล NCBI โดยมหมายเลขเฉพาะ (accession number) ดงตารางท 4.1


น าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธ ทไดจากการเพมปรมาณชนด

เอนเอยน rpoB มาเปรยบเทยบดวยโปรแกรม ClustalW พบวาไดผลดงภาพท 4.5 และตารางท 4.4

17 AAGTGCATTGTTGGAACTGGGTTGGAACGCCAAGCGGCTCTAGATTCAGGAGTTCCTGCT 60


















************************************************************

17 ATAGCCCAACACGAGGGAAAGATCATTTATACCGATATTGACAAGATCGTTTTATCGGCC 120


















************************************************************

ภาพท 4.5 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB [1-18 คอ (1) โชคอนนต (2) มะปรง



(15) แกว (16) น าดอกไม (17) ทลถวายทะวาย และ (18) อกรอง (รปแบบการ – คอ

พวรนทรานสชน)]

44 17 AATGGAGATACTATAAGTATTCAATTCGTTGTCTATCAACGTTCCAACAAGAATACTTGT 180

18 AATGGAGATACTATAAGTATTCAATTCGTTGTCTATCAACGTTCCAACAAGAATACTTGT 180














2 AATGGAGATACTATAAGTATTCAATTCGTTGTCTATCAACGTTCCAACAAAAATACTTGT 180



************************************************** *********

17 ATGCATCAAAAAAGACAGGTTGGACGGAGTAAATGCATTAAAAAGGGACAAGTTTTAGCG 240


















************************************************************

17 GATGGTGCCGCTACAGTTGGGGGCGAACTCGCTTTGGGGAAAAACGTATTAGTAGCTTAT 300


















************************************************************





พวรนทรานสชน)] (ตอ)

45 17 ATGCCATGGGAAGGTTATAATTTTGAGGATGCGGTACTTATTAGCGAACGTCTGATATAT 360

18 ATGCCATGGGAAGGTTATAATTTTGAGGATGCGGTACTTATTAGCGAACGTCTGATATAT 360

















************************************************************

17 GAAGATATTTATACTTCTTTTCACATACGGA 391


















*******************************





พวรนทรานสชน)] (ตอ)

ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB ในมะมวงทง 18 พนธ พบวาไมสามารถ

แยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน อยางไรกตาม ล าดบ

นวคลโอไทดบรเวณยน rpoB นสามารถแยกมะมวงได 1 พนธ คอ มะปรงปา ซงเปนต าแหนงท

สามารถระบความแตกตางส าหรบการแสดงเอกลกษณของมะมวงพนธมะปรงปาได โดยต าแหนงนน

คอต าแหนงท 171 ซงมการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดแบบพวรนทรานสชน

46 ตารางท 4.4 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB ในมะมวงพนธตาง ๆ



171 มะปรงปา G เปน A พวรนทรานสชน



ชนดเอนเอของยน rpoB มาวเคราะหดวยโปรแกรม MEGA พบวาสามารถสรางแผนภมความสมพนธ

ทางพนธกรรมได แตเมอวเคราะหแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมแลวไมสามารถแยกมะมวงทง

18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน โดยแผนภมความสมพนธทาง

พนธกรรมของยน rpoB เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining สามารถแยกมะมวงมะมวงมะปรง

ปาได (ภาพท 4.6) และมคาความแตกตางทางพนธกรรมเทากบ 0.000-0.003 (ตารางท 4.5)

ภาพท 4.6 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rpoB เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-

Joining

47 ตารางท 4.5 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB

โชคอนนต 0.000 มะปรงปา 0.003 0.000

ทองด า 0.000 0.003 0.000 เจาคณทพย 0.000 0.003 0.000 0.000

กะลอน 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 แรด 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000

ศรสยาม 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 ฟาลน 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

เพชรบานลาด 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 หนองแซง 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

หนงกลางวน 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 มนขนศร 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

แหว 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 เขยวเสวย 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

แกว 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 น าดอกไม 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

ทลถวายทะวาย 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 อกรอง 0.000 0.003 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

โชคอ

นนต

มะปร

งปา

ทองด

า

เจาค

ณทพย

กะลอ

น

แรด

ศรสย

าม

ฟาลน

เพชร

บานล

าด

หนอง

แซง

หนงก

ลางว

น

มนขน

ศร

แหว

เขยว

เสวย

แกว

น าดอ

กไม

ทลถว

ายทะ

วาย

อกรอ

ง

48

4.1.3 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1



18 พนธ โดยใชคไพรเมอรทมความจ าเพาะตอยน rpoC1 พบวาสามารถเพมปรมาณชนดเอนเอไดทง



หาล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอหลงจากเพมปรมาณดวยปฏกรยา

ลกโซพอลเมอเรสของยน rpoC1 โดยน าสงบรษท Solgent (ประเทศเกาหลใต) จากนนน าล าดบ

นวคลโอไทดในแตละยนของมะมวงแตละพนธทไดไปเปรยบเทยบกบขอมลในฐานขอมล NCBI

(National Center for Biotechnology Information) พบวาล าดบนวคลโอไทดทไดตรงกบขอมล

ล าดบนวคลโอไทดของยนในพชชนดอนทพบในฐานขอมลออนไลน หลงจากนนไดฝากเกบขอมลล าดบ

นวคลโอไทดของยนดงกลาวไวในฐานขอมล NCBI โดยมหมายเลขเฉพาะ (accession number) ดง

ตารางท 4.1

ภาพท 4.7 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอของยน rpoC1 ในมะมวง 18 พนธดวย






49


เมอน าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธ หลงจากการเพมปรมาณ

ชนดเอนเอของยน rpoC1 มาเปรยบเทยบดวยโปรแกรม ClustalW พบวาไดผลดงภาพท 4.8 และ

ตารางท 4.6 15 GTGGATACACTTCTTGATAATGGAATCCGGGGACAACCAACGAGGGATGGTCATAATAAG 60

18 GTGGATACACTTCTTGATAATGGAATCCGGGGACAACCAACGAGGGATGGTCATAATAAG 60

















************************************************************

15 GTTTATAAGTCCTTTTCGGATGTAATTGAAGGCAAAGAGGGAAGATTTCGTGAGACTCTC 120


















************************************************************

ภาพท 4.8 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 [1-18 คอ (1) โชคอนนต (2) มะปรง

ปา (3) ทองด า (4) เจาคณทพย (5) กะลอน (6) แรด (7) ศรสยาม (8) ฟาลน (9) เพชรบาน

ลาด (10) หนองแซง (11) หนงกลางวน (12) มนขนศร (13) แหว (14) เขยวเสวย (15) แกว

(16) น าดอกไม (17) ทลถวายทะวาย และ (18) อกรอง] (รปแบบการเปลยนแปลง – คอ

อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน)]

50 15 CTTGGCAAACGGGTCGATTATTCGGGGCGTTCTGTCATTGTCGTAGGCCCCTCACTTTCA 180

18 CTTGGCAAACGGGTCGATTATTCGGGGCGTTCTGTCATTGTCGTAGGCCCCTCACTTTCA 180

















************************************************************

15 TTACATCGATGTGGATTGCCTCGCGAAATCGCAATAGAGCTTTTCCAGACATTTGTAATT 240


















************************************************************

15 TGTGGTCTAATTAGACAACATCTTGCTTCAAACATAGGAGTTGCTAAGAGTAAAATTCGG 300


















************************************************************





อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน)] (ตอ)

51

15 GAAAAAGGGCCGATTGTATGGGAAATACTTCAGGAAGTTATGCAGGGACATCCTGTATTG 360


















************************************************************

15 CTGAATAGAGCGCCTACGCTGCATAGATTAGGCATACAGGCATTCCAGCCCATTTTAGTG 420


















************************************************************

15 GAAGGACGTGCTATTTGTTTACATCCATTAGTTTGTAAGGGATTCAACGCAGACTTTGAT 480

















2 GAAGGACGTGCTATTTGTTTACATCCATTAGTTTGTAAGGGATTCAATGCAGACTTTGAT 480

*********************************************** ************






52 15 GGGGATCAAATGGCTGTTCATGTACCTTTATCTTTAGAGGCTCAAGCGGAGGCCCGTTTA 540

18 GGGGATCAAATGGCTGTTCATGTACCTTTATCTTTAGAGGCTCAAGCGGAGGCCCGTTTA 540

















************************************************************

15 CTTTGTTTTT--CTCAA 555

18 CTTTGTTTTTTTCTCAA 557







17 CTTTGTTTTTT-CTCAA 556










********** *****






ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในมะมวงทง 18 พนธ พบวาไม

สามารถแยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน อยางไรกตาม

ล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 นสามารถแยกมะมวงได 2 พนธ คอ อกรอง และมะปรงปา จาก

ล าดบนวคลโอไทดม 2 ต าแหนงทมการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทด ซงทงสองต าแหนงถอเปน

ต าแหนงทเปนเอกลกษณของมะมวงทงสองพนธ โดยต าแหนงท 468 เปนต าแหนงทระบเอกลกษณ

ของมะมวงพนธมะปรงปา ซงมการเปลยนแปลงล าดบนวคลโอไทดในรปแบบทรานสเวอรชน และ

53 ต าแหนงท 551และ 552 เปนต าแหนงทระบเอกลกษณของมะมวงพนธอกรอง ซงมการเปลยนแปลง

ล าดบนวคลโอไทดในรปแบบอนเดล

ตารางท 4.6 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 ในมะมวงพนธตาง ๆ



468 มะปรงปา C เปน T ทรานสเวอรชน

551 อกรอง Gap (deletion) อนเดล

552 อกรอง Gap (deletion) อนเดล



ชนดเอนเอของยน rpoC1 มาวเคราะหดวยโปรแกรม MEGA พบวาสามารถสรางแผนภม

ความสมพนธทางพนธกรรมได แตเมอวเคราะหแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมแลวไมสามารถ

แยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน โดยแผนภม

ความสมพนธทางพนธกรรมของยน rpoC1 เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining สามารถแยก

อกรอง และมะปรงปาได (ภาพท 4.9) และมคาความแตกตางทางพนธกรรมเทากบ 0.000-0.009 (ตาราง

ท 4.7)

54

ภาพท 4.9 แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมทไดจากยน rpoC1 เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-

Joining

55 ตารางท 4.7 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหดวยล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1


ทองด า 0.007 0.002 0.000 เจาคณทพย 0.007 0.002 0.000 0.000

กะลอน 0.000 0.009 0.007 0.007 0.000 แรด 0.007 0.002 0.000 0.000 0.007 0.000

ศรสยาม 0.000 0.009 0.007 0.007 0.000 0.007 0.000 ฟาลน 0.000 0.009 0.007 0.007 0.000 0.007 0.000 0.000



แหว 0.007 0.002 0.000 0.000 0.007 0.000 0.007 0.007 0.007 0.000 0.000 0.000 0.000 เขยวเสวย 0.000 0.009 0.007 0.007 0.000 0.007 0.000 0.000 0.000 0.007 0.007 0.007 0.007 0.000

แกว 0.000 0.009 0.007 0.007 0.000 0.007 0.000 0.000 0.000 0.007 0.007 0.007 0.007 0.000 0.000 น าดอกไม 0.007 0.002 0.000 0.000 0.007 0.000 0.007 0.007 0.007 0.000 0.000 0.000 0.000 0.007 0.007 0.000


โชคอ

นนต

มะปร

งปา

ทองด

า

เจาค

ณทพย

กะลอ

น

แรด

ศรสย

าม

ฟาลน

เพชร

บานล

าด

หนอง

แซง

หนงก

ลางว

น

มนขน

ศร

แหว

เขยว

เสวย

แกว

น าดอ

กไม

ทลถว

ายทะ

วาย

อกรอ

ง

56

4.1.4 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA



18 พนธ โดยใชคไพรเมอรทมความจ าเพาะตอชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA พบวา

สามารถเพมปรมาณชนดเอนเอไดทง 18 พนธ โดยใหแถบดเอนเอทมขนาดประมาณ 400 และ 700

คเบส (ภาพท 4.10)


เมอหาล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทถกเพมปรมาณดวยปฏกรยา

ลกโซพอลเมอเรสของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA โดยน าสงบรษท Solgent (ประเทศ

เกาหลใต) จากนนน าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงแตละพนธทไดไปเปรยบเทยบกบขอมลใน

ฐานขอมล NCBI (National Center for Biotechnology Information) พบวาล าดบนวคลโอไทดท

ไดตรงกบขอมลล าดบนวคลโอไทดของยนในพชชนดอนทพบในฐานขอมลออนไลน หลงจากนนไดฝาก

เกบขอมลล าดบนวคลโอไทดของยนดงกลาวไวในฐานขอมล NCBI โดยมหมายเลขเฉพาะ (accession

number) ดงตารางท 4.1

57

ภาพท 4.10 แถบดเอนเอทไดจากการเพมปรมาณชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA ใน

มะมวง 18 พนธดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสโดยใชไพรเมอรทมความจ าเพาะ [M คอ

ดเอนเอมาตรฐาน 1 Kb Plus DNA Ladder (InvitrogenTM Life Technology,

USA), 1-18 คอ (1) โชคอนนต (2) มะปรงปา (3) ทองด า (4) เจาคณทพย (5) กะลอน

(6) แรด (7) ศรสยาม (8) ฟาลน (9) เพชรบานลาด (10) หนองแซง (11) หนงกลางวน

(12) มนขนศร (13) แหว (14) เขยวเสวย (15) แกว (16) น าดอกไม (17) ทลถวาย

ทะวาย และ (18) อกรอง]


เมอน าล าดบนวคลโอไทดของมะมวงทง 18 พนธ หลงจากการเพมปรมาณ

ชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA มาเปรยบเทยบดวยโปรแกรม ClustalW พบวาไดผลดง

ภาพท 4.11 และตารางท 4.8

58 17 GTTATGCATGAACGTAATGCTCATAATTTCCCTCTAGACCTAGCTGCTATTGAAGCTCCA 60

18 GTTATGCATGAACGTAATGCTCATAATTTCCCTCTAGACCTAGCTGCTATTGAAGCTCCA 60

















************************************************************

17 TCTACAAATGTATAAGATTTCGTTTTTTGTGTATACGAGTTTTTGAAAATAACGGAGCAA 120


















************************************************************

17 TACCAATTTCTTGCAAAGGGTCGGTATTGCTCCGTTATTTAGTAGTTTTTTATTTACATA 180


















************************************************************

ภาพท 4.11 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA

[1-18 คอ (1) โชคอนนต (2) มะปรงปา (3) ทองด า (4) เจาคณทพย (5) กะลอน (6) แรด

(7) ศรสยาม (8) ฟาลน (9) เพชรบานลาด (10) หนองแซง (11) หนงกลางวน (12) มน

ขนศร (13) แหว (14) เขยวเสวย (15) แกว (16) น าดอกไม (17) ทลถวายทะวาย และ

(18) อกรอง] (รปแบบการเปลยนแปลง – คอ อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน)]

59 17 CGTTTCGTTTGGTTGTTTGTTTTTCAACAAAACAAAATTTT------------------- 221

18 CGTTTCGTTTGGTTGTTTGTTTTTCAACAAAACAAAATTTT------------------- 221
















2 CGTTTCGTTTGGTTGTTTGTTTTTCAACAAAACAAAATTTTATGCAAATTAATTAATGTT 240

*****************************************

17 ------------------------------------------------------------

18 ------------------------------------------------------------

16 ------------------------------------------------------------

15 ------------------------------------------------------------

14 ------------------------------------------------------------

13 ------------------------------------------------------------

12 ------------------------------------------------------------

11 ------------------------------------------------------------

10 ------------------------------------------------------------

9 ------------------------------------------------------------

8 ------------------------------------------------------------

7 ------------------------------------------------------------

6 ------------------------------------------------------------

5 ------------------------------------------------------------

4 ------------------------------------------------------------

3 ------------------------------------------------------------

1 ------------------------------------------------------------

2 AATATATATTTCATTTCTATTTCTTTCTATTTCTAGAAATAAGAACTCGAAACAATTGAT 300

17 ------------------------------------------------------------

18 ------------------------------------------------------------

16 ------------------------------------------------------------

15 ------------------------------------------------------------

14 ------------------------------------------------------------

13 ------------------------------------------------------------

12 ------------------------------------------------------------

11 ------------------------------------------------------------

10 ------------------------------------------------------------

9 ------------------------------------------------------------

8 ------------------------------------------------------------

7 ------------------------------------------------------------

6 ------------------------------------------------------------

5 ------------------------------------------------------------

4 ------------------------------------------------------------

3 ------------------------------------------------------------

1 ------------------------------------------------------------

2 TTCTATCTATTTAATAATAATAATATTAATATAATATTCTTCTGTATATTAGAATCCATA 360





(18) อกรอง] (รปแบบการเปลยนแปลง – คอ อนเดล – คอ ทรานสเวอรชน)] (ตอ)

60 17 ------------------------------------------------------------

18 ------------------------------------------------------------

16 ------------------------------------------------------------

15 ------------------------------------------------------------

14 ------------------------------------------------------------

13 ------------------------------------------------------------

12 ------------------------------------------------------------

11 ------------------------------------------------------------

10 ------------------------------------------------------------

9 ------------------------------------------------------------

8 ------------------------------------------------------------

7 ------------------------------------------------------------

6 ------------------------------------------------------------

5 ------------------------------------------------------------

4 ------------------------------------------------------------

3 ------------------------------------------------------------

1 ------------------------------------------------------------

2 GAATCTATAATCTATTAGATAAATAGATAAAAATCCAACAAAAAAAAATCTAAGAAATTC 420

17 ------------------------------------------------------------

18 ------------------------------------------------------------

16 ------------------------------------------------------------

15 ------------------------------------------------------------

14 ------------------------------------------------------------

13 ------------------------------------------------------------

12 ------------------------------------------------------------

11 ------------------------------------------------------------

10 ------------------------------------------------------------

9 ------------------------------------------------------------

8 ------------------------------------------------------------

7 ------------------------------------------------------------

6 ------------------------------------------------------------

5 ------------------------------------------------------------

4 ------------------------------------------------------------

3 ------------------------------------------------------------

1 ------------------------------------------------------------

2 TTTGAATTTGTAATTCAAATTAAACAATTTACTAATTATTATTTGACTTTTACAGTTAAA 480

17 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

18 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

16 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

15 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

14 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

13 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

12 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

11 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

10 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

9 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

8 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

7 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

6 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

5 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

4 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

3 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

1 -----------------------------------------------CTGCTTCTTGTTT 234

2 AAAATCGAAATGATAAAGGTTGTAGAAAAGAAAAGGGTTGAAATTTTCTGCTTCTTGTCT 540

*********** *






61 17 TGTATCTTCATTTCGAGATTGATAAGTAAGGTACCATAAAAAAAGGAGAATGATCAAAAA 294

18 TGTATCTTCATTTCGAGATTGATAAGTAAGGTACCATAAAAAAAGGAGAATGATCAAAAA 294

















************************************************************

17 T--------ATGGTAGAAATTGTAATCCTTGTATTTTTTGTAATTTTTTAAGAGGGGCGG 346

















2 TTATGATCAATGGTAGAAATTGTAATCCTTGTATTTTTTGTAATTTTTTAAGAGGGGCGG 660

* ***************************************************

17 ATGTAGCCAAGTGGATCAAGGCAGTGGATTGTGAATC 383


















*************************************






62 ผลการเปรยบเทยบล าดบนวคลโอไทดชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA ในมะมวง

ทง 18 พนธ พบวาไมสามารถแยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน เนองจากมล าดบนวคลโอไทด

เหมอนกน อยางไรกตาม ล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA สามารถ

แยกมะมวงไดเพยง 1 พนธ คอ มะปรงปา ซงเปนต าแหนงทมการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทด

ในรปแบบของอนเดลและทรานสชน

ตารางท 4.8 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวาง

ยน trnH กบ psbA ในมะมวงพนธตาง ๆ



221 ถง 527 มะปรงปา Gap (deletion) อนเดล

539 มะปรงปา C เปน T ทรานสชน

602 ถง 609 มะปรงปา Gap (deletion) อนเดล



ชนดเอนเอของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA มาวเคราะหดวยโปรแกรม MEGA พบวา

สามารถสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมได แตเมอวเคราะหแผนภมความสมพนธทาง

พนธกรรมแลวไมสามารถแยกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกน เนองจากล าดบนวคลโอไทดเหมอนกน

โดยแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของบรเวณชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA เมอ

วเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining สามารถแยกมะมวงมะปรงปาได (ภาพท 4.12) และมคาความ

แตกตางทางพนธกรรมเทากบ 0.000-0.399 (ตารางท 4.9)

63

ภาพท 4.12 แผนภมความทางพนธกรรมทไดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA

เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

64 ตารางท 4.9 คาความแตกตางทางพนธกรรมระหวางพนธมะมวงเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทดของชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA


ทองด า 0.000 0.399 0.000 เจาคณทพย 0.000 0.399 0.000 0.000

กะลอน 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 แรด 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000

ศรสยาม 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 ฟาลน 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000



แหว 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 เขยวเสวย 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

แกว 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 น าดอกไม 0.000 0.399 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000


โชคอ

นนต

มะปร

งปา

ทองด

า

เจาค

ณทพย

กะลอ

น

แรด

ศรสย

าม

ฟาลน

เพชร

บานล

าด

หนอง

แซง

หนงก

ลางว

น

มนขน

ศร

แหว

เขยว

เสวย

แกว

น าดอ

กไม

ทลถว

ายทะ

วาย

อกรอ

ง

65

4.1.5 การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของทง 4 ต าแหนง รวมกน

เมอตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดแตละต าแหนงแลวพบวาไมสามารถแยกมะมวงไดทง

18 พนธ ดงนนจงน าต าแหนงทท าการตรวจสอบทงหมดมาวเคราะหรวมกน โดยน าล าดบนวคลโอไทด

ทง 2-4 ต าแหนง มาสรางแผนภมความสมพนธทางพนธกรรม ไดดงภาพท 4.13-4.23

ภาพท 4.13 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoB รวมกน


66

ภาพท 4.14 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoC1 รวมกน


ภาพท 4.15 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และชนดเอนเอทอย

ระหวางยน trnH-psbA รวมกนเมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

67

ภาพท 4.16 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB และยน rpoC1 รวมกน


ภาพท 4.17 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB และชนดเอนเอทอย


68

ภาพท 4.18 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และชนดเอนเอทอย


ภาพท 4.19 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoB และยน

rpoC1 รวมกน เมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

69

ภาพท 4.20 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoB และชนดเอน

เอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกนเมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

ภาพท 4.21 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL ยน rpoC1 และชนด

เอนเอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกนเมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

70

ภาพท 4.22 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB ยน rpoC1 และชนด

เอนเอทอยระหวางยน trnH-psbA รวมกนเมอวเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

ภาพท 4.23 แผนภมความทางพนธกรรมจากล าดบนวคลโอไทดของยนทง 4 ต าแหนง รวมกน เมอ

วเคราะหดวยวธ Neighbor-Joining

71 จะเหนไดวาการวเคราะหจากล าดบนวคลโอไทดของยน 2-4 ต าแหนง รวมกน ยงไมสามารถ

แยกมะมวงออกจากกน แตสามารถแยกโชคอนนต เขยวเสวย อกรอง และมะปรงปาออกจากพนธอน

ๆ โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และยน rpoC1 มาวเคราะหรวมกน ซงทงสองยนเปน

ต าแหนงทสามารถจ าแนกมะมวงออกจากกนไดดทสดจากทงหมดสต าแหนงของยน

4.2 อภปรายผล

การตรวจสอบล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะในมะมวงทพบในประเทศไทย 18 พนธ

เมอสกดดเอนเอและเพมปรมาณชนดเอนเอดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส โดยใชไพรเมอรทม

ความจ าเพาะตอชนดเอนเอของยน rbcL, rpoB, rpoC1 และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ

psbA พบวาล าดบนวคลโอไทดทง 4 ต าแหนงไมสามารถจ าแนกมะมวงทง 18 พนธ ออกจากกนได

อยางไรกตามล าดบนวคลโอไทดและแผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของยน rbcL สามารถจ าแนก

มะมวงได 3 พนธ คอ โชคอนนต เขยวเสวย และมะปรงปา

เมอพจารณาต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทด พบวาเมอแปลรหสเปนล าดบ

กรดอะมโนจะมล าดบกรดอะมโนเปลยนไปดวย ไดแก

(1) ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 65 มการเปลยนแปลงไปสามารถระบมะมวงพนธมะปรงปา

เมอแปลรหสเปนล าดบกรดอะมโนแลวพบวามการเปลยนแปลงกรดอะมโนจากทรโอนน (threonine)

เปนแอสพาราจน (asparagine) ซงเปนกรดอะมโนทจดอยในกลมมขวแตไมมประจเชนเดยวกน

(2) ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 437 สามารถระบมะมวงพนธมะปรงปา เมอแปลรหสเปน

ล าดบกรดอะมโนแลวพบวามการเปลยนแปลงของกรดอะมโนจากจากทรโอนน (threonine) เปนเซอ

รน (serine) ซงเปนกรดอะมโนทจดอยในกลมมขวแตไมมประจ

(3) ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 607 สามารถระบมะมวงพนธเขยวเสวย เมอแปลรหสเปน

ล าดบกรดอะมโนแลวพบวามการเปลยนแปลงของกรดอะมโนจากกรดกลตามก (glutamic acid) ซง

เปนกรดอะมโนทจดอยในกลมมขวและมประจเปนลบเปนไลซน (lysine) ซงเปนกรดอะมโนทจดอยใน

กลมมขวและมประจเปนบวก

(4) ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 609 สามารถระบมะมวงพนธโชคอนนต เมอแปลรหสเปน

ล าดบกรดอะมโนแลวพบวามการเปลยนแปลงของกรดอะมโนจากกรดกลตามค (glutamic acid)

เปนกรดแอสพาตก (aspatic acid) ซงเปนกรดอะมโนทจดอยในกลมมขวและมประจเปนลบ

72

(5) ล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 653 สามารถระบมะมวงพนธมนขนศรและอกรอง เมอแปล

รหสเปนล าดบกรดอะมโนแลวพบวาล าดบของกรดอะมโนนนไมมการเปลยนแปลง (ตารางท 4.10)

กลาวคอ แมวามการเปลยนแปลงนวคลโอไทดและรหสพนธกรรม (genetic code) แตยงคง

ก าหนดการสรางกรดอะมโนชนดเดม ซงถอวาเปนการกลายแบบพอง (synonymous mutation

หรอ silent mutation) (ธระชย, 2553)

ตารางท 4.10 ต าแหนงทมความแตกตางของล าดบนวคลโอไทดในยน rbcL ซงเมอแปลรหสแลวม

กรดอะมโนเปลยนแปลงไป

ต าแหนง พนธมะมวง การเปลยนแปลง ของนวคลโอไทด

การเปลยนแปลงของกรดอะมโน

65 มะปรงปา C เปน A Thr เปน Asn

437 มะปรงปา C เปน G Thr เปน Ser 607 เขยวเสวย G เปน A Glu เปน Lys

609 โชคอนนต G เปน C Glu เปน Asp 653 มนขนศรและอกรอง Gap (deletion) ไมเปลยนแปลง

แผนภมความสมพนธทางพนธกรรมของยน rpoB และชนของดเอนเอทอยระหวางยน trnH

กบ psbA สามารถจ าแนกมะมวงพนธมะปรงปา ออกจากพนธอน ๆ ได และเมอน าไปพจารณาการ

แปลรหสเปนล าดบกรดอะมโนโดยพจารณาเพยงยน rpoB เทานน เนองจากชนของดเอนเอทอย

ระหวางยน trnH กบ psbA คอ อนตรอน (intron) ไมไดแปลรหสเปนยนทมผลตอการท างานของพช

ซงจากการพจารณาพบวาการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทดต าแหนงท 171 ของยน rpoB ไมม

การเปลยนแปลงของกรดอะมโนซงถอวาเปนการกลายแบบพอง (ธระชย, 2553) เชนเดยวกบยน

rpoC1ทไมมการเปลยนแปลงของกรดอะมโน แตสามารถจ าแนกอกรองและมะปรงปาไดจากแผนภม

ความสมพนธทางพนธกรรมของยน

แมวาทงสต าแหนงจะเปนทนยมใชกนอยางแพรหลายส าหรบการท ารหสแทงดเอนเอ

(Degtjareva et al., 2012) แตเนองจากตวอยางพนธมะมวงทน ามาใชในการวเคราะหนอยในสปชส

เดยวกน จงอาจมความสมพนธทางพนธกรรมทมความใกลชดกนสงท าใหยากตอการจ าแนกพนธ

73 มะมวงโดยใชบรเวณใดบรเวณหนงส าหรบการจ าแนกพนธ แมวาจะมการพจารณาในหลายต าแหนง

รวมกนกตาม ซงสอดคลองกบ นฤมล และคณะ (2557) ศกษาความสมพนธทางพนธกรรมของขาวมส

โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rpoC1 และยน rbcL ซงไมสามารถจ าแนกชนดของขาวมสไดในแต

ละพนธ แตมความตางของผลวจยจากสรนทร และคณะ (2538) ทสามารถแยกความแตกตางของ

มะมวงในแตละพนธไดโดยใชเทคนคอารเอพด (random amplified polymorphic DNA; RAPD)

และผลวจยของ Wichan และคณะ (1999) ทสามารถแยกความแตกตางของมะมวงในแตละพนธได

โดยใชเทคนคไมโครแซทเทลไลท (simple sequence repeat; SSR) ซงในขณะเดยวกนรหสแทงด

เอนเอกลบมความเหมาะสมส าหรบการใชจ าแนกสงมชวตทมความตางกนของสปชส เชน การแยก

กลวยไมสกลหวายกลมเอองสาย (นฤมล และคณะ, 2557) การแยกกลวยไมกลมสงโตสยาม (นฤมล

และคณะ, 2557) การแยกกลวยไมสกลกหลาบ (นฤมล และคณะ, 2557) หรอมะมวงทมความตาง

ของสปชส (Suparman et al., 2013;Topik et al., 2013)

ดงนนจงกลาวไดวา การใชล าดบนวคลโอไทดของต าแหนงจ าเพาะเพยงต าแหนงใดต าแหนง

หนงอาจไมเพยงพอตอการใชแยกชนดของพช เนองจากต าแหนงนนมขนาดเลกมากเมอเทยบกบ

ขนาดจโนม (genome) (นฤมล และคณะ, 2557) ของพชชนดนน ๆ หรอเนองจากต าแหนงนนมการ

ผนแปรทางพนธกรรมต าเปนผลใหบรเวณดงกลาวไมมววฒนาการตอการเปลยนแปลงล าดบทาง

พนธกรรม ซงตางจากการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชเครองหมายดเอนเอทสามารถ

วเคราะหไดทวทงจโนมมากกวาวเคราะหทต าแหนงใดต าแหนงหนงเพยงอยางเดยว (สรนทร และคณะ

, 2538)

74

บทท 5

สรปผลการวจยและขอเสนอแนะ

5.1 สรปผลการวจย

การใชเทคนครหสแทงดเอนเอในการตรวจสอบเพอจ าแนกและวเคราะหความสมพนธทาง

พนธกรรมของมะมวงทพบในประเทศไทยทง 18 พนธ เมอสกดดเอนเอและเพมปรมาณชนดเอนเอ

ดวยปฏกรยาลกโซพอลเมอเรส โดยใชไพรเมอรทมความจ าเพาะตอยน rbcL ยน rpoB ยน rpoC1

และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA พบวาไพรเมอรทจ าเพาะตอยนดงกลาวทง 4 ไพร

เมอร สามารถเพมปรมาณชนดเอนของมะมวงโดยใชปฏกรยาลกโซพอลเมอเรสไดทง 18 พนธ

ยน rbcL สามารถเพมปรมาณชนดเอนเอ โดยแถบของดเอนเอมขนาดประมาณ 650 คเบส

และเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด พบวามต าแหนงของล าดบนวคลโอไทดทมการเปลยนแปลงอย 6

ต าแหนง ซงจากการเปลยนแปลงของล าดบนวคลโอไทด 6 ต าแหนงน ม 4 ต าแหนงทสามารถเปน

ต าแหนงส าหรบการระบเอกลกษณของพนธ คอ ต าแนงท 65 และ 438 สามารถระบเอกลกษณของ

มะมวงพนธมะปรงปาได ต าแหนงท 607 สามารถระบเอกลกษณของมะมวงพนธเขยวเสวยได และ

ต าแหนงท 609 สามารถระบเอกลกษณของมะมวงพนธโชคอนนตได

ยน rpoB สามารถเพมปรมาณชนดเอนเอได โดยแถบของดเอนเอมขนาดประมาณ 400 ค

เบส และเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด พบวามต าแหนงของล าดบนวคลโอไทดทมการเปลยนแปลง

อย 1 ต าแหนง คอต าแหนงท 171 ของล าดบนวคลโอไทด ซงต าแหนงดงกลาวยงเปนต าแหนง

ส าหรบการระบเอกลกษณของมะมวงพนธมะปรงปาได

ยน rpoC1 สามารถเพมปรมาณชนดเอนเอได โดยแถบของดเอนเอมขนาดประมาณ 550 ค

เบส และเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด พบวามต าแหนงของล าดบนวคลโอไทดทมการเปลยนแปลง

อย 2 ต าแหนง ซงทง 2 ต าแหนงสามารถใชระบเอกลกษณของมะมวงได ไดแก ต าแหนงท 468

สามารถระบเอกลกษณของมะมวงพนธมะปรงปา และต าแหนงท 552 สามารถระบเอกลกษณของ

มะมวงพนธอกรองได

ชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH กบ psbA สามารถเพมปรมาณชนดเอนเอได โดยแถบของ

ดเอนเอมขนาดประมาณ 400 และ 700 คเบส และเมอวเคราะหล าดบนวคลโอไทด พบวาม 3

75 บรเวณของล าดบนวคลโอไทดทสามารถใชส าหรบการระบเอกลกษณของมะมวงได ไดแก บรเวณ

ต าแหนงท 221 ถง 527 ต าแหนงท 539 และบรเวณต าแหนงท 602 ถง 609 ทสามารถ ระบ

เอกลกษณของมะมวงพนธมะปรงปา

5.2 ขอเสนอแนะ

การตรวจสอบพนธพชโดยการใชล าดบนวคลโอไทดมาวเคราะหนน หากเปนพชทมระดบชนด

หรอมสปชสเดยวกนนนจะสามารถแยกความสมพนธทางพนธกรรมไดยาก เนองจากพชเหลานนม

ความใกลชดทางพนธกรรมมาก ดงนนหากตองการวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมโดยใชล าดบ

นวคลโอไทดควรท าการวเคราะหในพชทมความแตกตางกนในระดบชนดหรอสปชสขนไป จงจะเหน

ความผนแปรทางพนธกรรม เนองจากพชทมระดบชนดหรอมสปชสเดยวกนนนจะมความผนแปรทาง

พนธกรรมต าจงไมสามารถบอกความแตกตางทางพนธกรรมของพชนนได และการใชเทคนครหสแทง

ดเอนเอในการจ าแนกชนดของมะมวงนจ าเปนตองใช มากกวา 2 ยนขนไป ส าหรบการวเคราะห

รวมกน ซงมคาใชจายคอนขางสง ดงนนจงควรหายนหรอบรเวณใหมทสามารถใชจ าแนกความ

แตกตางของมะมวงไดเพยงต าแหนงเดยวเพอเปนการประหยดคาใชจาย

76

รายการอางอง

1. กรมวชาการเกษตร. (2547). ฐานขอมลเชอพนธพช: มะมวง เลม 2. เอกสารวชาการล าดบท

10/2545. ฝายคมครองพนธพช กองคมครองพนธพช กรมวชาการเกษตร กระทรวงเกษตรและ

สหกรณ กรงเทพฯ.

2. กรมวชาการเกษตร. (2551). เอกสารวชาการ เรอง มะมวง. กระทรวงเกษตรและสหกรณ, กรงเทพฯ.

3. เจนวทย พชตพนธ. (2553). เทคนคการผลตมะมวงนอกฤด. พมพครงท 2. ธนธชการพมพ, กรงเทพฯ.

4. เฉลมชย แกววรชาต. (2539). การปลกมะมวง. อกษรสยามการพมพ, กรงเทพฯ.

5. ณฐกร เพชรชา, ดวงกมล แมนศร, และสรพล แสนสข. (2554). การประเมนดเอนเอในพลาสตด

บรเวณ rpoC1 และ rpoB ในการใชเปน DNA barcode และกรณศกษาในพชสกล Alpinia

Roxb. (Zingiberaceae). การจดประชมเสนอผลงานวจยระดบบณฑตศกษาแหงชาต, 554-

563.

6. ณฐกานต โกเสนตอ, สณสา ณฐพรณชกล, และ มลวรรณ นาคขนทด. (2557). การจดจ าแนกพชวงศบวสาย โดยใชคลอโรพลาสตดเอนเอ. ภาควชาชววทยา คณะวทยาศาสตร มหาวทยาลยนเรศวร. วารสารวทยาศาสตรบรพา, 1-5.

7. ทารกา สทธสม. (2550). สณฐานวทยาและความสมพนธทางพนธกรรมของมะมวงเขยวมรกตสายตนคด. (วทยานพนธปรญญามหาบณฑต). มหาวทยาลยเชยงใหม.

8. นฤมล ธนานนต, เกยรตชย แซไต และธระชย ธนานนต. (2557). การวเคราะหความสมพนธทาง

พนธกรรมของกลวยไมสงโตกลอกตา หมสงโตสยามโดยใชล าดบนวคลโอไทดของยนจ าเพาะ .

วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. มหาวทยาลยธรรมศาสตร, 22(4), 523-530.

9. นฤมล ธนานนต, จาตรงค สมฤทธ และธระชย ธนานนต. (2557). การวเคราะหความสมพนธ

ทางพนธกรรมของขาวมส โดยใชล าดบนวคลโอไทดของยน rbcL และ rpoC1. วารสาร

วทยาศาสตรและเทคโนโลย. มหาวทยาลยธรรมศาสตร, 22(5), 674-682.

77 10. นฤมล ธนานนต, ฐตพร โทมโสภา และธระชย ธนานนต. (2557). การจ าแนกพนธและการ

วเคราะหความสมพนธทางพนธกรรม ของกลวยไมสกลหวายกลมเอองสายโดยใชล าดบนวคลโอ

ไทดของยน matK และ rpoC1. วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย, 23(1), 1-10.

11. นฤมล ธนานนต, วรสรา แทนสงา และธระชย ธนานนต. (2557). การจ าแนกพนธและการ

วเคราะหความสมพนธทางพนธกรรมของกลวยไมสกลกหลาบดวยล าดบนวคลโอไทดของ

ต าแหนงจ าเพาะ. วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย. มหาวทยาลยธรรมศาสตร, 22(5), 664-

673.

12. พรรษา มนตแขง, อรณรตน ฉวราช, ธวดชย ธาน และรงลาวลย สดมล. (2556). ดเอนเอ

บารโคดเพอการระบชนดสมนไพรแปรรปสกล Senna. การประชมเสนอผลงานวจยระดบ

บณฑตศกษาแหงชาต, 532-543.

13. มนตร นนทสทธ. (2556). การปลกมะมวง. ธนธชการพมพ, กรงเทพฯ. 14. มทนา จองกาและดวงกมล แมนศร. (2552). ดเอนเอบรเวณยน matK ส าหรบใชเปนดเอนเอ

บารโคดเพอระบพชสกล Alpinia Roxb. การประชมเสนอผลงานวจยระดบบณฑตศกษา

แหงชาต, 1403-1402.

15. วนสสา หวานเสนาะ. (2552). ประสทธภาพและประสทธผลของเอนเอเอ และเอทธฟอน เพอการชกน าการหลดรวงของชอดอกและชอผลของมะมวงน าดอกไม . (วทยานพนธปรญญามหาบณฑต). มหาวทยาลยเชยงใหม.

16. วจตร วงใน. (2529). มะมวง. ภาควชาพชสวน คณะเกษตรศาสตร มหาวทยาลยเกษตรศาสตร, กรงเทพฯ.

17. ศนยนวตกรรมเทคโนโลยหลงการเกบเกยว. (2556). มะมวง-การผลตและเทคโนโลยหลงการ เกบเกยว. ส านกงานคณะกรรมการอดมศกษา, เชยงใหม.

18. ส านกคมครองพนธพชแหงชาต. (2544). ฐานขอมลเชอพนธพชมะมวง (Plant Germplasm

Database for Mango). กรมวชาการเกษตร กระทรวงเกษตรและสหกรณ. กรงเทพฯ.

19. สรนทร ปยะโชคณากล, สมศกด อภสทธวาณช, ประดษฐ พงศทองค า, เสาวนย สพทธธาดา และสมน มาสธน. (2538). การพฒนาเทคนคทางพนธวศวกรรมเพอการจ าแนกและรบรองพนธมะมวงและมงคด. รายงานการวจย. 45 น.

20. สรนทร ปยะโชคณากล. (2552). เครองหมายดเอนเอ: จากพนฐานสการประยกต. กรงเทพฯ:

ส านกพมพ มหาวทยาลยเกษตรศาสตร.

78 21. อรณรตน ฉวราช. (2552). อนกรมวธานระดบโมเลกลของพช (Plant Molecular

Systematics). โครงการผลตต ารา ภาควชาชววทยา คณะวทยาศาสตร มหาวทยาลยขอนแกน,

ขอนแกน.

22. โองการ วณชาชวะ. (2555). ดเอนเอบารโคด: เครองมอใหมสาหรบการระบชนดทางชวภาพ.

วารสารวทยาศาสตร. มหาวทยาลยขอนแกน, 40(2), 396-407

23. Bernard, S., Greg, I., J., Pedro, W., C., Teresa, A., C., Brenda, D., W., & Michael, J. W. (2005). Phylogenetic and morphological re-evaluation of the Botryosphaeria species causing diseases of Mangifera indica. Mycologia, 97(1), 99–110.

24. Brown, S.M., Szewc-McFadden, A. K., & Kresovish, S. (1996). Development and

application of simple sequence repeat (SSR) loci for plant genome analysis.

Florida: CRS Press.

25. CBOL Plant working Group. (2009). A DNA barcode for land plants. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, 106, 12794-12797.

26. Chase, M.W., Cowan ,R.S., Hollingsworth, P.M., VanderBerg, C., Madrinan, S.,

Petersen, G., Seberg, O., Jorgsensen, T., Cameron-Kenneth, M., Carine, M.,

Pedersen, N., Hedderson-Terry, H., Conrad, F., Salazar-Gerardo, A., Richardson-

James, E., Hollingsworth-Michelle, L., Barraclough-Timothy, G., Kelly, L., &

Wilkinson, M. (2007). A proposal for a standardized protocol to barcode all land

plants. Taxon, 56, 295–299.

27. Cho, Y., J., Mower, P., Qiu, Y.L., & Palmer J.D. (2004). Mitochondrial substitution rates are extraordinarily elevated and variable in a genus of flowering plants. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, 101, 17741–17746.

28. Das, S., Dash, H., Mangwani, N., Chakraborty, J., & Kumari, S. (2014). Understanding molecular identification and polyphasic taxonomic approaches for genetic relatedness and phylogenetic relationships of microorganisms. Journal of Microbiological Methods. 103: 80–100.

79 29. Degtjareva, G.V., Logacheva, M.D., Samigullin, T.H., Terentieva E.I., & Roman C. M.

V. (2012). Organization of Chloroplast psbA-trnH Intergenic Spacer in Dicotyledonous Angiosperms of the Family Umbelliferae. Biochemistry, 77, 1056-1064.

30. Doyle, J. J., & Doyle, J.L. (1987). A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue. Phytochemical Bulletin, 19, 11-15.

31. Gielly, L., & Taberlet P. (1994). The Use of Chloroplast DNA to Resolve Plant Phylogenies: Noncoding versus rbcL Sequences. Molecular Biology and Evolution, 11(5), 769-777.

32. Hare K., Singh S.K. (2007). Biotechnological advances in mango (Mangifera indica L.) and their future implication in crop improvement — A review. Biotechnology Advances, 25, 223–243.

33. Hebert, P.D.N., Cywinska, A., Ball, S.L., & deWaard, J.R.. (2003). Biological identification through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society B, 270, 313-321.

34. Hollingsworth, P.M., Forrest, L.L., Spouge, J.L., Hajibabaei, M., Ratnasingham, S.,

Van der Bank, M., Chase, M.W., Cowan, R.S., Erickson, D.L., Fazekas, A.J., Graham,

S.W., James, K.E., Kim, K.J., Kress, W.J., Schneider, H., van Alphen Stahl, J., Barrett,

S.C., van den Berg, C., Bogarin, D., Burgess, K.S., Cameron, K.M., Carine, M.,

Chacón, J., Clark, A., Clarkson, J.J., Conrad, F., Devey, D.S., Ford, C.S., Hedderson,

T.A., Hollingsworth, M.L., Husband, B.C., Kelly, L.J., Kesanakurti, P.R., Kim, J.S.,

Kim, Y.D., Lahaye, R., Lee, H.L., Long, D.G., Madriñán, S., Maurin, O., Meusnier, I.,

Newmaster, S.G., Park, C.W., Percy, D.M., Petersen, G., Richardson, J.E., Salazar,

G.A., Savolainen, V., Seberg, O., Wilkinson, M.J., Yi, D.K., & Little, D.P. (2009). A

DNA barcode for land plants. Proceedings of the National Academy of Sciences,

106(31), 12794-12797.

35. Ivanova, N.V., Zemlak, T.S., Hanner, R.H., & Hebert, P. D. N. (2007). Universal primer cocktails for fish DNA barcoding. Molecular Ecology Notes, 7, 543-548.

80 36. Kiyomi, N., Young, A., C., Chitose, H., Wichan, E., & Keizo, Y. (2006). Application of

genomic in situ hybridization for phylogenetic study between Mangifera indica L. and eight wild species of Mangifera. Scientia Horticulturae, 110, 114-117.

37. Kochert, G. (1994). RFLP technology. In DNA-based markers in plants. Dordrecht: Kluwer Academic Publishers.

38. Lahaye, R., Savolainen, V., Duthoit, S., Maurin, O. & Bank, M. (2008). A test of psbK-psbI and atpF-atpH as potential plant DNA barcodes using the flora of the Kruger National Park as a model system (South Africa). Nature Precedings.

39. Li, M., Wong, K., Chan, W., Li, J., But, P.P.H., Cao, H., & Shawa, P. (2012). Establishment of DNA barcodes for the identification of the botanical sources of the Chinese ‘cooling’ beverage. Food Control. 25: 758-766.

40. Liu, Z., Zeng, X., Yang, D., Chu, G., Yuan, Z., & Chen, S. (2012). Applying DNA barcodes for identification of plant species in the family Araliaceae. Gene, 499, 76-80.

41. Ma, H., Zhu, Z., Zhang, X., Miao, Y., & Guo, Q. (2014). Species identification of the medicinal plant Tulipa edulis (Liliaceae) by DNA barcode marker. Biochemical Systematics and Ecology, 55, 362-368.

42. McCouch, S., & Tankslay, S.D. (1991). Development and use of restriction fragment length polymorphisms in rice breeding and genetic in rice biotechnology. Wallingford: Khush, G.S. and Toenniessen, G.H. (eds.) CAB International.

43. Natalie, L., D., David, J., I., Ian, S., E., B., Carole, L., W., Luke, C., D., & Ralf. G., D. (2014). Expressed Sequence Tag-Simple Sequence Repeat (EST-SSR) Marker Resources for Diversity Analysis of Mango (Mangifera indica L.). Diversity, 6, 72-87.

44. Olivier, C., Lilian, E., Christian, R., Adriano, S., Spencer, B., Arnaud, C., Corine, C., Eliane, K., Roxana, Y., Tatiana, T., S., & Sophie, N. (2010). Evolution of oil-producing trichomes in Sisyrinchium (Iridaceae): insights from the first comprehensive phylogenetic analysis of the genus. Annals of Botany, 1-26.

81 45. Powell, W., Machray, C., & Provan, J. (1996). Polymorphism revealed by simple

sequence repeats. Trends in Plant Sci, 1, 215-222. 46. Prasad, M.,P., & Rekha, S. (2014). Phylogenetic Analysis of Mangifera Using RAPD

Molecular Markers. International Journal of Advanced Biotechnology and Research, 5(3), 452-456.

47. Sang, T., Crawford, D.J, Stuessy, T.F., (1997). Chloroplast DNA phylogeny, reticulate evolution and biogeography of Paeonia (Paeoniaceae). American Journal of Botany, 84, 1120–1136.

48. Selvaraj, D., Sarma, R. K., & Sathishkumar, R. (2008). Phylogenetic analysis of chloroplast matK genefrom Zingiberaceae for plant DNA barcoding. Bioinformation, 3(1), 24-27.

49. Suparman, S., Adi, P., Topik, H. (2013). Phylogenetic Analisys of Mangifera Base on RBCL Sequences, Chloroplast DNA. Scientific Papers. Series B, Horticulture, 57, 235-240.

50. Tankslay, S.D., Young, N.D., Paterson, A.H., & Bonierbale, M.W. (1989). RFLP mapping in plant breeding: New tools for an old science. Biotechnology, 7, 257-264.

51. Tate, J.A. and Simpson B.B. (2003). Paraphyly of Tarasa (Malvaceae) and Diverse Origins of the Polyploid Species. Systematic Botany, 28(4), 723–737.

52. Tomar, R., S., Gajera, H., P., Viradiya, R., R., Patel, S., V., & Golakiya, B., A. (2011). Phylogenetic relationship among Mango (Mangifera indica L.) Landraces of Saurashtra based on DNA fingerprinting. Journal of Horticulture and Forestry, 3(13), 379-385.

53. Topik, H., Adi, P., Diah, K., & Wichan, E. (2011). Molecular Diversification and Phylogeny of Mangifera (Anacardiaceae) in Indonesia and Thailand. Proceeding of the International Conference on Advanced Science, Engineering and Information Technology.

54. Topik, H., Adi, P., Diah, K., & Wichan, E. (2012). Development matK Gene as DNA Barcode to Assess Evolutionary Relationship of Important Tropical Forest Tree

82

Genus Mangifera (Anacardiaceae) in Indonesia and Thailand. Jurnal Teknologi, 59, 17-20.

55. Topik, H., Shahkila, M., A., & Azman, A., S. (2013). Molecular Biodiversity of Selected Mango Cultivars Based on DNASequences of Internal Transcribed Spacer Region. Pakistan Journal of Biological Sciences, 16(19), 1072-1075.

56. Vos, P., Hogers, R., Bleeker, M., Reijans, M., Van de Lee, T., Hornes, M., Frijters, A.,

Pot, J., Peleman, J., Kuiper, M., & Zebeau, M. (1995). AFLP: A new technique for

DNA fingerprintings. Nucleic Acids Research, 23, 4407-4414.

57. Wichan, E., Keizo, Y., Akira, S., Naoki, U., & Suranant, S. (1999). Identification of mango cultivars of Thailand and evaluation of their genetic variation using the amplified fragments by simple sequence repeat-(SSR-) anchored primers. Scientia Horticulturae, 82, 57-66.

58. Wichan, E., Keizo, Y., Akira, S., Naoki, U., & Suranant, S. (1999). Analysis of phylogenetic relationships in Mangifera by restriction site analysis of an amplified region of cpDNA. Scientia Horticulturae, 80, 145-155.

59. Wichan, E., Keizo, Y., Shinya, K., & Akira, S. (2000). Amplified Fragment Length Polymorphism Analysis for Studying Genetic Relationships among Mangifera Species in Thailand. Journal of the American Society for Horticultural Science, 125(2), 160-164.

60. Williams, J.G.K., Kubelik, A.R., Livak, K.J., Rafalski, J.A., & Tingey, S.U. (1990). DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Research, 8(22), 6531-6535.

61. Xin-hua, H., Yong-ze, G., Yang-mi, L., & Sh-jin, O. (2007). Assessment of the Genetic Relationship and Diversity of Mango and Its Relatives by cplSSR Marker. Agricultural Sciences in China, 6(2), 137- 142.

62. Yonemori, K., Honsho, C., Kanzaki, S., Eiadthong, W., & Sugiura, A. (2002). Phylogenetic relationships of Mangifera species revealed by ITS sequences of nuclear ribosomal DNA and a possibility of their hybrid origin. Plant Systematics and Evolution, 231, 59-75.

ภาคผนวก

84

ภาคผนวก ก

การเตรยมสาร

1. สารละลายบฟเฟอรสกด 1.1 สารเคม

- ซทลไตรเมทลแอมโมเนยมโบรไมด (cetyltrimethyl ammonium bromide, CTAB)

- เอทลนไดอามนเตตราอะซตก (ethylene diamine tetra acetic acid, EDTA)

- โซเดยมคลอไรด (NaCI) - ทรส-คลอไรด - โซเดยมโดเดอลซลเฟต (sodium dodecyl sulfate, SDS) - โซเดยมเมตาไบซลเฟส (sodium metabisulfite)

1.2 วธการเตรยม เทน าลงในบกเกอรประมาณ 400 มลลลตร น าไปบมทอณหภม 60 องศาเซลเซยส

เปนเวลาประมาณ 15-30 นาท ใสโซเดยมคลอไรดปรมาณ 146.1 กรม ผสมใหเขากนจนไมมตะกอน

จากนนเตม EDTA ความเขมขน 0.5 โมลาร pH 8.0 ปรมาตร 40 มลลลตร และทรส-คลอไรดความ

เขมขน 1 โมลาร pH 8.0 ปรมาตร 100 มลลลตร ผสมใหเปนเนอเดยวกน เตมโซเดยมโดเดอล

ซลเฟตปรมาณ 6 กรม เตมซทลไตรเมทลแอมโมเนยมโบรไมดปรมาณ 40 กรม เตม โซเดยมเมตาไบ

ซลเฟส 1 กรม ผสมใหเขากน ปรบปรมาตรใหเปน 1 ลตร น าไปนงฆาเชอทอณหภม 121 องศา

เซลเซยส เปนเวลา 15 นาท

2. สารละลายบฟเฟอร TAE ความเขมขน 50 เทา 2.1 สารเคม

- ทรส-คลอไรด - กรดอะซตกเขมขน (glacial acetic acid) - เอทลนไดอามนเตตราอะซตก (ethylene diamine tetra acetic acid,

EDTA)

85

2.2 วธการเตรยม เทน าลงในบกเกอรประมาณ 400 มลลลตร ใสทรส-คลอไรดปรมาณ 242 กรม

เตมกรดอะซตกเขมขนปรมาตร 57.2 มลลลตร เตม EDTA ความเขมขน 0.5 โมลาร pH 8.0 ปรมาตร

100 มลลลตร ผสมใหเขากน จากนนใชน ากลนทผานการฆาเชอปรบปรมาตรใหเปน 1 ลตร

3. สารละลายบฟเฟอร TE 3.1 สารเคม

- ทรส-คลอไรด - เอทลนไดอามนเตตราอะซตก (ethylene diamine tetra acetic acid,

EDTA) 3.2 วธการเตรยม

เทน าลงในบกเกอรประมาณ 400 มลลลตร เตมทรส-คลอไรดความเขมขน 1

โมลาร ปรมาตร 10 มลลลตร เตม EDTA ความเขมขน 0.5 มลลโมลาร pH 8.0 ปรมาตร 2 มลลลตร

ผสมใหเขากน จากนนใชน ากลนทผานการฆาเชอปรบปรมาตรใหเปน 1 ลตร

4. สารละลายบฟเฟอร DNA Loading ความเขมขน 6 เทา 4.1 สารเคม

- โบโมฟนอลบล (bromophenol blue) - xylene cyanol FF - กลเซอรอล (glycerol)

4.2 วธการเตรยม ประกอบดวย bromophenol blue ความเขมขนรอยละ 0.25 โดยมวลตอ

ปรมาตร xylene cyanol FF ความเขมขนรอยละ 0.25 โดยมวลตอปรมาตร และกลเซอรอล ความ

เขมขนรอยละ 30 โดยมวลตอปรมาตร โดยใชน ากลนทปราศจากไอออน (deionized water) ในการ

ปรบปรมาตร เกบทอณหภม 4 องศาเซลเซยส

86

ภาคผนวก ข

ดเอนเอมาตรฐาน

ดเอนเอมาตรฐาน 1 Kb Plus DNA Ladder (InvitrogenTM Life Technology, USA)

แสดงขนาดของดเอนเอตงแต 100-12,000 คเบส

ภาพผนวกท 1 ดเอนเอมาตรฐาน 1 Kb Plus DNA Ladder ทมา : InvitrogenTM Life Technology

87

ภาคผนวก ค

ล าดบนวคลโอไทดทจดเกบในฐานขออมล Genbank

LOCUS KR610374 654 bp DNA linear PLN 07-OCT-2015

DEFINITION Mangifera indica cultivar Chok Anan ribulose-1,5-bisphosphate

carboxylase/oxygenase large subunit (rbcL) gene, partial cds;

chloroplast.

ACCESSION KR610374

VERSION KR610374

KEYWORDS .

SOURCE chloroplast Mangifera indica (mango)

ORGANISM Mangifera indica

Eukaryota; Viridiplantae; Streptophyta; Embryophyta; Tracheophyta;

Spermatophyta; Magnoliophyta; eudicotyledons; Gunneridae;

Pentapetalae; rosids; malvids; Sapindales; Anacardiaceae;

Mangifera.

REFERENCE 1 (bases 1 to 654)

AUTHORS Bussadee,P., Thanananta,T. and Thanananta,N.

TITLE Identification and Genetic Relationship Analysis of Mango

(Mangifera indica L.) in Thailand Using DNA Sequences

JOURNAL Unpublished



TITLE Direct Submission

JOURNAL Submitted (06-MAY-2015) Biotechnology, Thammasat University,

Phahonyothin, Khlong Luang, Pathum Thani 12120, Thailand

COMMENT ##Assembly-Data-START##

Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing

##Assembly-Data-END##

FEATURES Location/Qualifiers

source 1..654

/organism="Mangifera indica"

/organelle="plastid:chloroplast"

/mol_type="genomic DNA"

/cultivar="Chok Anan"

/db_xref="taxon:29780"

gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11

ORIGIN

1 tcaccacaaa cagaaactaa agcaagtgtt ggattcaaag ccggcgttaa agactataaa

61 ttgacttatt atactcctga ctatataacc aaagatactg atatcttggc agcattccga

121 gtaactcctc aacctggagt tccacccgag gaagcagggg ctgcggtagc tgcggaatct

181 tctactggta catggacaac tgtgtggacc gatgggctta ccagccttga tcgttacaaa

241 ggacgatgct acaacattga gcccgttgct ggagaagaaa atcaatatat atgttatgta

301 gcttaccctt tagacctttt tgaagaaggt tctgttacta acatgtttac ttccattgtg

361 ggtaatgtat ttgggttcaa agccctgcgc gctctacgtc tagaggatct acgaatccct

421 accgcgtata taaaaacttt ccaaggacca ccgcatggga tccaagttga gagagataaa

481 ttgaacaagt atggccgtcc cctattggga tgtactatta aaccgaaatt aggtttatcc

541 gctaagaact acggtagagc tgtttatgaa tgtctacgtg gtggacttga ctttaccaaa

601 gacgatgaca acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt ctta

ภาพผนวกท 1 ขอมลล าดบนวคลโอไทดหมายเลข KR610374

88


DEFINITION Mangifera indica cultivar Mapring Pa ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610375

VERSION KR610375

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Mapring Pa"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11

/product="ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase

large subunit"

/protein_id="ALI16480"

/translation="SPQTETKASVGFKAGVKDYKLNYYTPDYITKDTDILAAFRVTPQ

PGVPPEEAGAAVAAESSTGTWTTVWTDGLTSLDRYKGRCYNIEPVAGEENQYICYVAY

PLDLFEEGSVTNMFTSIVGNVFGFKALRALRLEDLRIPTAYIKSFQGPPHGIQVERDK

LNKYGRPLLGCTIKPKLGLSAKNYGRAVYECLRGGLDFTKDDENVNSQPFMRWRDRFF

"

ORIGIN


61 ttgaattatt atactcctga ctatataacc aaagatactg atatcttggc agcattccga






421 accgcgtata taaaaagttt ccaaggacca ccgcatggga tccaagttga gagagataaa



601 gacgatgaga acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt cttt


89


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thongdam ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610376

VERSION KR610376

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Thongdam"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"


/translation="SPQTETKASVGFKAGVKDYKLTYYTPDYITKDTDILAAFRVTPQ


PLDLFEEGSVTNMFTSIVGNVFGFKALRALRLEDLRIPTAYIKTFQGPPHGIQVERDK

LNKYGRPLLGCTIKPKLGLSAKNYGRAVYECLRGGLDFTKDDENVNSQPFMRWRDRFL

"

ORIGIN











601 gacgatgaga acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt ctta


90


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chaokhunthip ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610377

VERSION KR610377

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Chaokhunthip"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













91


DEFINITION Mangifera indica cultivar Ka Lon ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610378

VERSION KR610378

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Ka Lon"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













92


DEFINITION Mangifera indica cultivar Raet ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610379

VERSION KR610379

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Raet"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













93


DEFINITION Mangifera indica cultivar Sri Sa Yam ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610380

VERSION KR610380

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Sri Sa Yam"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













94


DEFINITION Mangifera indica cultivar Falan ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610381

VERSION KR610381

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Falan"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













95


DEFINITION Mangifera indica cultivar Phetbanlat ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610382

VERSION KR610382

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Phetbanlat"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













96


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nongsaeng ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610383

VERSION KR610383

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Nongsaeng"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













97


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nangklangwan ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610384

VERSION KR610384

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Nangklangwan"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













98


DEFINITION Mangifera indica cultivar Man Khun Sri ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610385

VERSION KR610385

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..653




/cultivar="Man Khun Sri"


gene <1..>653

/gene="rbcL"

CDS <1..>653

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"





LNKYGRPLLGCTIKPKLGLSAKNYGRAVYECLRGGLDFTKDDENVNSQPFMRWRDRF"

ORIGIN











601 gacgatgaga acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt cta


99

LOCUS c 654 bp DNA linear PLN 07-OCT-2015

DEFINITION Mangifera indica cultivar Haeo ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610386

VERSION KR610386

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Haeo"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













100


DEFINITION Mangifera indica cultivar Khiaosawoey ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610387

VERSION KR610387

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Khiaosawoey"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"





LNKYGRPLLGCTIKPKLGLSAKNYGRAVYECLRGGLDFTKDDKNVNSQPFMRWRDRFL

"

ORIGIN











601 gacgataaga acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt ctta


101


DEFINITION Mangifera indica cultivar Kaeo ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610388

VERSION KR610388

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Kaeo"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













102


DEFINITION Mangifera indica cultivar Namdokmai ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610389

VERSION KR610389

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="NamDokMai"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













103


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thunthawai Tha Wai

ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit

(rbcL) gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR610390

VERSION KR610390

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..654




/cultivar="Thunthawai Tha Wai"


gene <1..>654

/gene="rbcL"

CDS <1..>654

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"






"

ORIGIN













104


DEFINITION Mangifera indica cultivar Okrong ribulose-1,5-bisphosphate


chloroplast.

ACCESSION KR610391

VERSION KR610391

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..653




/cultivar="OkRong"


gene <1..>653

/gene="rbcL"

CDS <1..>653

/gene="rbcL"

/codon_start=1

/transl_table=11


large subunit"





LNKYGRPLLGCTIKPKLGLSAKNYGRAVYECLRGGLDFTKDDENVNSQPFMRWRDRF"

ORIGIN











601 gacgatgaga acgtgaactc ccaaccattt atgcgttgga gagatcgttt cta


105


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chok Anan RNA polymerase beta subunit

(rpoB) gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR422626

VERSION KR422626

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11

/product="RNA polymerase beta subunit"


/translation="KCIVGTGLERQAALDSGVPAIAQHEGKIIYTDIDKIVLSANGDT

ISIQFVVYQRSNKNTCMHQKRQVGRSKCIKKGQVLADGAATVGGELALGKNVLVAYMP

WEGYNFEDAVLISERLIYEDIYTSFHIR"

ORIGIN

1 aagtgcattg ttggaactgg gttggaacgc caagcggctc tagattcagg agttcctgct

61 atagcccaac acgagggaaa gatcatttat accgatattg acaagatcgt tttatcggcc

121 aatggagata ctataagtat tcaattcgtt gtctatcaac gttccaacaa gaatacttgt

181 atgcatcaaa aaagacaggt tggacggagt aaatgcatta aaaagggaca agttttagcg

241 gatggtgccg ctacagttgg gggcgaactc gctttgggga aaaacgtatt agtagcttat

301 atgccatggg aaggttataa ttttgaggat gcggtactta ttagcgaacg tctgatatat

361 gaagatattt atacttcttt tcacatacgg a


106


DEFINITION Mangifera indica cultivar Mapring Pa RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422627

VERSION KR422627

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN



121 aatggagata ctataagtat tcaattcgtt gtctatcaac gttccaacaa aaatacttgt






107


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thongdam RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422628

VERSION KR422628

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









108


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chaokhunthip RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422629

VERSION KR422629

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









109


DEFINITION Mangifera indica cultivar Ka Lon RNA polymerase beta subunit (rpoB)

gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR422630

VERSION KR422630

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="Ka Lon"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









110


DEFINITION Mangifera indica cultivar Raet RNA polymerase beta subunit (rpoB)


ACCESSION KR422631

VERSION KR422631

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="Raet"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









111


DEFINITION Mangifera indica cultivar Sri Sa Yam RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422632

VERSION KR422632

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









112


DEFINITION Mangifera indica cultivar Falan RNA polymerase beta subunit (rpoB)


ACCESSION KR422633

VERSION KR422633

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="Falan"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









113


DEFINITION Mangifera indica cultivar Phetbanlat RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422634

VERSION KR422634

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









114


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nongsaeng RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422635

VERSION KR422635

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









115


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nangklangwan RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422636

VERSION KR422636

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









116


DEFINITION Mangifera indica cultivar Man Khun Sri RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422637

VERSION KR422637

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









117


DEFINITION Mangifera indica cultivar Haeo RNA polymerase beta subunit (rpoB)


ACCESSION KR422638

VERSION KR422638

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="Haeo"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









118


DEFINITION Mangifera indica cultivar Khiaosawoey RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422639

VERSION KR422639

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









119


DEFINITION Mangifera indica cultivar Kaeo RNA polymerase beta subunit (rpoB)


ACCESSION KR422640

VERSION KR422640

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="Kaeo"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









120


DEFINITION Mangifera indica cultivar Namdokmai RNA polymerase beta subunit


ACCESSION KR422641

VERSION KR422641

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









121


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thunthawai Tha Wai RNA polymerase beta

subunit (rpoB) gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR422642

VERSION KR422642

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391






gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









122


DEFINITION Mangifera indica cultivar Okrong RNA polymerase beta subunit (rpoB)


ACCESSION KR422643

VERSION KR422643

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..391




/cultivar="OkRong"


gene <1..>391

/gene="rpoB"

CDS <1..>391

/gene="rpoB"

/codon_start=1

/transl_table=11






ORIGIN









123

LOCUS KR028419 555 bp DNA linear PLN 04-SEP-2015

DEFINITION Mangifera indica RNA polymerase beta' subunit (rpoC1) gene, partial

cds; chloroplast.

ACCESSION KR028419

VERSION KR028419

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished




JOURNAL Submitted (25-MAR-2015) Biotechnology, Thammasat University,






source 1..555






gene <1..>555

/gene="rpoC1"

CDS <1..>555

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11

/product="RNA polymerase beta' subunit"

/protein_id="ALD47590"

/translation="VDTLLDNGIRGQPTRDGHNKVYKSFSDVIEGKEGRFRETLLGKR

VDYSGRSVIVVGPSLSLHRCGLPREIAIELFQTFVICGLIRQHLASNIGVAKSKIREK

GPIVWEILQEVMQGHPVLLNRAPTLHRLGIQAFQPILVEGRAICLHPLVCKGFNADFD

GDQMAVHVPLSLEAQAEARLLCFSQ"

ORIGIN

1 gtggatacac ttcttgataa tggaatccgg ggacaaccaa cgagggatgg tcataataag

61 gtttataagt ccttttcgga tgtaattgaa ggcaaagagg gaagatttcg tgagactctc

121 cttggcaaac gggtcgatta ttcggggcgt tctgtcattg tcgtaggccc ctcactttca

181 ttacatcgat gtggattgcc tcgcgaaatc gcaatagagc ttttccagac atttgtaatt

241 tgtggtctaa ttagacaaca tcttgcttca aacataggag ttgctaagag taaaattcgg

301 gaaaaagggc cgattgtatg ggaaatactt caggaagtta tgcagggaca tcctgtattg

361 ctgaatagag cgcctacgct gcatagatta ggcatacagg cattccagcc cattttagtg

421 gaaggacgtg ctatttgttt acatccatta gtttgtaagg gattcaacgc agactttgat

481 ggggatcaaa tggctgttca tgtaccttta tctttagagg ctcaagcgga ggcccgttta 541 ctttgttttt ctcaa


124


DEFINITION Mangifera indica cultivar Mapring Pa RNA polymerase beta' subunit

(rpoC1) gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR071805

VERSION KR071805

KEYWORDS .






Mangifera.




(Mangifera indica L.) in Thailand using DNA Sequences

JOURNAL Unpublished




JOURNAL Submitted (05-APR-2015) Biotechnology, Thammasat University,






source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11


/protein_id="ALG38037"




GDQMAVHVPLSLEAQAEARLL"

ORIGIN








421 gaaggacgtg ctatttgttt acatccatta gtttgtaagg gattcaatgc agactttgat

481 ggggatcaaa tggctgttca tgtaccttta tctttagagg ctcaagcgga ggcccgttta

541 ctttg


125


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thongdam RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071806

VERSION KR071806

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


126


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chaokhunthip RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071807

VERSION KR071807

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


127


DEFINITION Mangifera indica cultivar Ka Lon RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071808

VERSION KR071808

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="Ka Lon"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


128


DEFINITION Mangifera indica cultivar Raet RNA polymerase beta' subunit (rpoC1)


ACCESSION KR071809

VERSION KR071809

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="Raet"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


129


DEFINITION Mangifera indica cultivar Sri Sa Yam RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071810

VERSION KR071810

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


130


DEFINITION Mangifera indica cultivar Falan RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071811

VERSION KR071811

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="Falan"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


131


DEFINITION Mangifera indica cultivar Phetbanlat RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071812

VERSION KR071812

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


132


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nongsaeng RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071813

VERSION KR071813

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


133


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nangklangwan RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071814

VERSION KR071814

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


134


DEFINITION Mangifera indica cultivar Man Khun Sri RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071815

VERSION KR071815

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


135


DEFINITION Mangifera indica cultivar Haeo RNA polymerase beta' subunit (rpoC1)


ACCESSION KR071816

VERSION KR071816

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="Haeo"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


136


DEFINITION Mangifera indica cultivar Khiaosawoey RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071817

VERSION KR071817

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


137


DEFINITION Mangifera indica cultivar Kaeo RNA polymerase beta' subunit (rpoC1)


ACCESSION KR071818

VERSION KR071818

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="Kaeo"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


138


DEFINITION Mangifera indica cultivar NamDokMai RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071819

VERSION KR071819

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


139


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thunthawai Tha Wai RNA polymerase beta'

subunit (rpoC1) gene, partial cds; chloroplast.

ACCESSION KR071820

VERSION KR071820

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545






gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


140


DEFINITION Mangifera indica cultivar OkRong RNA polymerase beta' subunit


ACCESSION KR071821

VERSION KR071821

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..545




/cultivar="OkRong"


gene <1..>545

/gene="rpoC1"

CDS <1..>545

/gene="rpoC1"

/codon_start=1

/transl_table=11







ORIGIN










541 ctttg


141


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chok Anan photosystem II protein D1

(psbA) gene, partial cds; psbA-trnH intergenic spacer, complete

sequence; and tRNA-His gene, partial sequence; chloroplast.

ACCESSION KR071822

VERSION KR071822

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11

/product="photosystem II protein D1"


/translation="VMHERNAHNFPLDLAAIEAPSTNV"

misc_feature 76..343

/note="psbA-trnH intergenic spacer"

tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN

1 gttatgcatg aacgtaatgc tcataatttc cctctagacc tagctgctat tgaagctcca

61 tctacaaatg tataagattt cgttttttgt gtatacgagt ttttgaaaat aacggagcaa

121 taccaatttc ttgcaaaggg tcggtattgc tccgttattt agtagttttt tatttacata

181 cgtttcgttt ggttgtttgt ttttcaacaa aacaaaattt tctgcttctt gttttgtatc

241 ttcatttcga gattgataag taaggtacca taaaaaaagg agaatgatca aaaatatggt

301 agaaattgta atccttgtat tttttgtaat tttttaagag gggcggatgt agccaagtgg

361 atcaaggcag tggattgtga atccaccatg cgcga


142


DEFINITION Mangifera indica cultivar Mapring Pa photosystem II protein D1



ACCESSION KR071823

VERSION KR071823

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..698






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 658..>698

/product="tRNA-His"

ORIGIN




181 cgtttcgttt ggttgtttgt ttttcaacaa aacaaaattt tatgcaaatt aattaatgtt

241 aatatatatt tcatttctat ttctttctat ttctagaaat aagaactcga aacaattgat

301 ttctatctat ttaataataa taatattaat ataatattct tctgtatatt agaatccata

361 gaatctataa tctattagat aaatagataa aaatccaaca aaaaaaaatc taagaaattc

421 tttgaatttg taattcaaat taaacaattt actaattatt atttgacttt tacagttaaa

481 aaaatcgaaa tgataaaggt tgtagaaaag aaaagggttg aaattttctg cttcttgtct

541 tgtatcttca tttcgagatt gataagtaag gtaccataaa aaaaggagaa tgatcaaaaa

601 ttatgatcaa tggtagaaat tgtaatcctt gtattttttg taatttttta agaggggcgg

661 atgtagccaa gtggatcaag gcagtggatt gtgaatca


143


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thongdam photosystem II protein D1 (psbA)

gene, partial cds; psbA-trnH intergenic spacer, complete sequence;

and tRNA-His gene, partial sequence; chloroplast.

ACCESSION KR071824

VERSION KR071824

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









144


DEFINITION Mangifera indica cultivar Chaokhunthip photosystem II protein D1



ACCESSION KR071825

VERSION KR071825

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









145


DEFINITION Mangifera indica cultivar Ka Lon photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071826

VERSION KR071826

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="Ka Lon"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









146


DEFINITION Mangifera indica cultivar Raet photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071827

VERSION KR071827

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="Raet"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









147


DEFINITION Mangifera indica cultivar Sri Sa Yam photosystem II protein D1



ACCESSION KR071828

VERSION KR071828

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









148


DEFINITION Mangifera indica cultivar Falan photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071829

VERSION KR071829

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="Falan"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









149


DEFINITION Mangifera indica cultivar Phetbanlat photosystem II protein D1



ACCESSION KR071830

VERSION KR071830

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









150


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nongsaeng photosystem II protein D1



ACCESSION KR071831

VERSION KR071831

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









151


DEFINITION Mangifera indica cultivar Nangklangwan photosystem II protein D1



ACCESSION KR071832

VERSION KR071832

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









152


DEFINITION Mangifera indica cultivar Man Khun Sri photosystem II protein D1



ACCESSION KR071833

VERSION KR071833

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









153


DEFINITION Mangifera indica cultivar Haeo photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071834

VERSION KR071834

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="Haeo"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









154


DEFINITION Mangifera indica cultivar Khiaosawoey photosystem II protein D1



ACCESSION KR071835

VERSION KR071835

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









155


DEFINITION Mangifera indica cultivar Kaeo photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071836

VERSION KR071836

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="Kaeo"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









156


DEFINITION Mangifera indica cultivar NamDokMai photosystem II protein D1



ACCESSION KR071837

VERSION KR071837

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









157


DEFINITION Mangifera indica cultivar Thunthawai Tha Wai photosystem II protein

D1 (psbA) gene, partial cds; psbA-trnH intergenic spacer, complete


ACCESSION KR071838

VERSION KR071838

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395






gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









158


DEFINITION Mangifera indica cultivar OkRong photosystem II protein D1 (psbA)



ACCESSION KR071839

VERSION KR071839

KEYWORDS .






Mangifera.





JOURNAL Unpublished










source 1..395




/cultivar="OkRong"


gene <1..75

/gene="psbA"

CDS <1..75

/gene="psbA"

/codon_start=1

/transl_table=11






tRNA 344..>395

/product="tRNA-His"

ORIGIN









159

ประวตผเขยน

ชอ นางสาวปยดา บสด

วนเดอนปเกด 23 ตลาคม 2532

วฒการศกษา ปการศกษา 2554; วทยาศาสตรบณฑต

(เทคโนโลยชวภาพ) มหาวทยาลยธรรมศาสตร

ผลงานทางวชาการ

ปยดา บสด, ธระชย ธนานนต และ นฤมล ธนานนต. (2558). การจ าแนกพนธมะมวงในประเทศไทย

จากล าดบดเอนเอของยน rpoC1 และ rbcL, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย 23(6):

983-993.

ปยดา บสด, ธระชย ธนานนต และ นฤมล ธนานนต. (2559). การใชล าดบนวคลโอไทดของยน rpoB

และชนดเอนเอทอยระหวางยน trnH และ psbA เพอวเคราะหความสมพนธทางพนธกรรม

ของมะมวงในประเทศไทย, วารสารวทยาศาสตรและเทคโนโลย 24(1): 102-111.

การจ...

Documents

Transcript of การจ...