A Novel FluorimetricAssay for the Detection of TACE (α ...
Transcript of A Novel FluorimetricAssay for the Detection of TACE (α ...
levoN A levoN A cirtemiroulF cirtemiroulF ( ECAT fo noitceteD eht rof yassA ( ECAT fo noitceteD eht rof yassA αααα-- esaterceS esaterceS ))elevaW gnoL a gnisU ytivitcA etartsbuS editpeP TERF htgnelevaW gnoL a gnisU ytivitcA etartsbuS editpeP TERF htgn
areV areV avonamhkaR avonamhkaR ,, gnoduX gnoduX ,uhZ ,uhZ gniygneF gniygneF ,iL ,iL nefoaiX nefoaiX gnohZ gnohZ dna gnoH atinA , dna gnoH atinA , ehoaiX ehoaiX gnoT gnoTO 9412 ,.cnI cepSanA O 9412 ,.cnI cepSanA ’’ ASU ,13159 AC ,esoJ naS ,evA elooT ASU ,13159 AC ,esoJ naS ,evA elooT
noitcudortnI-FNT( ECAT α ro 71MADA dellac osla ,)emyzne gnitrevnoc α-
hguorht noitazilitref dna ,sisenegoruen ,sisenegoym ni devlovni si ,esatercescafrus llec fo gniddehs fo ssecorp eht tnanimoderp eht si ECAT .snietorp e
.FNT erutam elbulos fo noitareneg eht rof elbisnopser 'esaddehs' 1
fo tnempoleved dna hcraeser eht rof edam neeb evah stroffe elbaredisnoC-FNT-itna α ni sesnopser yrotammalfni fo ytireves eht ecuder ot stnega
yam tnega lacigolocamrahp a yb ECAT fo noitibihni ehT .setats esaesid-FNT fo tceffe eht etaludom ot hcaorppa evitanretla na tneserper α .2
ew ,srotibihni ECAT fo gnineercs tuphguorht hgih etatilicaf oTLXQ gnisu ECAT rof etartsbus editpep levon a dezisehtnys MT MAF-5/025
eht– tik wen a depoleved ew ,etartsbus TERF siht gnisU .riap TERF eht tceted ot desu eb nac tik sihT .yassA ytivitcA ECAT 025™etyLosneS ylhgih si tI .srotibihni ECAT fo gnineercs rof dna emyzne eht fo ytivitca
.emyzne fo stnuomamargonanbus tceted nac dna evitisnes
snoisulcnoC hcihw ,tik yassa ECAT 025™etyLosneS eht– tik yassa ECAT wen a depoleved evah eW
LXQ evitisnes ylhgih asesu MT .etartsbus TERF MAF-5/025
shtgnelevaw noissime dna noitaticxe regnol ehT morf ecnerefretni eht eziminim MAF-5 fo .stnenopmoc llec dna sdnuopmoc tset fo ecnabrosba dna ecnecseroulfotua
fo gnirotinom suoenegomoh ,suounitnoc fo elbapac si tik yassa ECAT 025™etyLosneS sihT.noitcaer citamyzne eht
CI 05 tnetsisnoceratik yassa ECAT 025™etyLosneS htiw denimreted rotibihni na rof eulav.atad dehsilbup htiw
:secnerefeR.)7991( 337 ,583 erutaN .la te .LM ,ssoM .1
.)3002( 9972 ,31 .tteL .mehC .deM .rooiB .la te .IJ ,niveL .2
sdohteM dna slairetaM)58027 #taC( tiK yassA ytivitcA ECAT 025™etyLosneS
LXQ( ECAT MT dna dengised- etartsbuS TERF )MAF-5(-editpep-)025.dohtem sisehtnys esahp diloscomF yb dezisehtnys
reffuB noitcaeR ECAT noitaroproC hcraeseR fo tcudorp detnetap a si 0-IPAT( rotibihnI ECAT
)seigolonhceT )AC ,ogeiD naS ,mehcoiblaC( ECAT namuH tnanibmoceR
HN-apD-RSSSRVAQAL-zbA(apD/zbA ECAT 2 -acM(apD/acM dna )HN-RA-apD-LGLPK 2 diloscomF yb dezisehtnys- setartsbus TERF )
.])pnD(paD=apD[ dohtem sisehtnys esahp eht yb dednemmocer sa desu saw tiK yassA ECAT 025™etyLosneS
04 era tik siht rof semulov noitcaer ehT .locotorp µ 01 ,emyzne fo l µ fo l 05 ,reffub/dnuopmoc tset µ demrofrep erew snoitabucni llA .etartsbus fo l
73 ta o .setalp kcalb llew-69 ni derugifnoc erew syassA .C
025™etyLosneS fo ytivitisneS.4 erugiF.tiK yassA ECAT derusaem saw ecnecseroulF
htiw etartsbus TERF fo noitabucni retfa nim 06 ta yassa fo ytivitisneS .ECAT fo snoitulid laires
.emyzne fo gn 13.0 saw snoitidnoc eseht
.tolp netneM-sileahciM .2 erugiFLXQ eht roF MT ECAT MAF-5/025
seiticolev laitini ,etartsbus TERF erew emyzne yb sisylordyh fo )oV( gn 01 fo noitabucni retfa denimreted fo egnar a htiw ECAT ehT.setartsbus fo snoitartnecnoc yb dezylana erew atad gnitluser
K ehT .noisserger raenil-non m eulav 23 saw deniatbo µ .M
oitar dnuorgkcab/langis fo nosirapmoC.5 erugiF .setartsbus ECAT tnereffid rof setartsbus ECAT
LXQ dna apD/acM ,apD/zbA( MT a ta )MAF-5/025 5 fo noitartnecnoc lanif µ 01 htiw detabucni erew M
rof oitar dnuorgkcab/langiS .ruoh 1 rof emyzne fo gnLXQ MT sa detneserp si etartsbus delebal MAF-5/025
.%001
elpicnirP yassA TERF no desab si yassA ytivitcA ECAT 025™etyLosneS ehT dna MAF-5 .elpicnirp )refsnart ygrene ecnanoserretsröF ro ecnecseroulF( noitprosba ehT .seditpep TERF rof riap rotpecca- ronod levon a si 025™LXQ
spalrevo yltcefrep025™LXQ fo murtceps -5 fo murtceps noissime eht htiw ibohpordyh eht ekilnU .)1 erugiF( MAF cilihpordyh a si 025™LXQ ,pnD c
editpep eht fo ytilibulos eht sesaercni 025™LXQ fo ytreporp sihT .dnuopmocyb desuac melborp eht suht ;etartsbus ynam fo erutan cibohpordyh eht
.detaivella si srehcneuq dna sronod tnecseroulf
.1 erugiF LXQ fo egavaelccityloetorP MT 025™LXQ .ECAT yb editpep TERF MAF-5/025 etarapes owt otni egavaelc nopU .MAF-5 htiw deriap nehw rehcneuq tnellecxe na si ta derotinom eb nac dna derevocer si MAF-5 fo ecnecseroulf eht ,esaetorp yb stnemgarf
.mn 025/mn 094 =mE/xE
seiduts rotibihnI.6 erugiF rof yassa etadilav oT .LXQ eht ,gnineercs rotibihni MT MAF-5/025
ni emyzne fo gn 01 htiw detabucni saw etartsbus01( 0-IPAT rotibihni ECAT fo ecneserp eht 2- ot
01 3 nim 5 yreve nekat erew sgnidaer citeniK .)MnCI detaluclac ehT .nim 06 rof 05 .Mn 91 saw
stluseR
stluseR
.scitenik yassA .3 erugiF LXQ MT
sawetartsbus MAF-5/025.ECAT fo gn 01 htiw detabucni saw langis tnecseroulF = mE/xE ta derotinom ylsuounitnoc
.nim 06 rof mn 025 /mn 0940
0005
00001
00051
00002
00052
080604020nim ,emiT
RFU
dnuorgkcabemyzne
0
02
04
06
08
001
S/B
, %
MAF-5acMzbA0
0002
0004
0006
0008
00001
00021
00041
RFU
0155.252.1526.0313.0651.0
llew/gn ,emyznE
0 05 001 051 0020
5
01
51
02
52
,S µµM
V 0
100.0 10.0 1.0 1 01 001 0001 000010
02
04
06
08
001
021
Mn ,0-IPAT
Rel
. Act
ivity
, %
5-FAM
FRET Peptide
TACE Cleavage
5-FAM
QXL 520TM
QXL 520TM