A heterodimeric complex that promotes the assembly of mammalian 20S proteasomes

Vol 437|27 October 2005|doi:10.1038/nature04106Yuko Hirano

生科四甲 91390355

葉孟軒

Model for the Structure of the 26S Proteasome

名詞解釋

26S Proteasome : 真核生物體中一種蛋白質水解酶，為 multisubunt ，是由 20S 的核心 proteasome 和兩軸上的 19S regulatory complexs 組合而成，而 20S 是由 28 個 subunits 組成， ” α1-

7β1-7β1-7α1-7” 為其排列成圓筒狀方式 PAC1 ＆ PAC2 ： Proteasome assembling chaperone-1 ＆ 2 ，

為此篇論文討論的重點， PAC1 和 PAC2 會形成一個 heterodimers ，能幫助 proteasome precursors 聚集成為成熟的 preteasome

MG132 ：

實驗方法

DNA constructs and cell culture. Protein extracts, immunological analysis and antib

odies. Glycerol gradient analysis Purification of PAC1-PAC2 complex Pulse-chase experiments RNAi experiments Assay of proteasome activity Chromatography

density

Introduction “Half-proteasome” 包括一個 α ring + 一個 β ring

+ heterodimeric 還有一個 chaperone Ump1 。要組成一個成熟的 proteasome ，就需要兩個 Half-proteasome dimerize ，在結合之前 β ring 上的 propeptide會先脫離，而且 Ump1( 人體中為 hUmp1) 也會降解離去；在整個 assembling 過程當中， heterodimeric所扮演的角色就是促進 precursor proteasome 構型組成，此外還能提供一個鷹架，協助 α ring 組成，還有保持充足的 α rings 以構成 half-proteasome ，接下來就是要利用實驗的方法去證實 heterodimeric 的這些功能。

圖一

PAC-1 and PAC-2 associate with precursor proteasomes.

4~24%

圖二PAC-1 and PAC-2 associate with precursor proteasomes.

The PAC1–PAC2 heterodimer is rapidly degraded by proteasomes. 圖三

4~17%

The PAC1–PAC2 heterodimer is rapidly degraded by proteasomes. 圖四

圖四siRNA-mediated knockdown of PAC1 and PAC2 impairs proteasome assembly.

4~24%

圖六

PAC1–PAC2 provides a scaffold for a-ring formation.

圖六PAC1–PAC2 provides a scaffold for a-ring formation.