RPR 100 72515 500 72516

КИТОВЕ ЗА КАЧЕСТВЕНО И ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕНО ОПРЕДЕЛЯНЕ НА НЕ-ТРЕПОНЕМАЛНИ СИФИЛИС АСОЦИИРАНИ АНТИТЕЛА (РЕАГИНИ) В ЧОВЕШКИ СЕРУМ ИЛИ ПЛАЗМА ЧРЕЗ МАКРОСКОПСКА АГЛУТИНАЦИЯ ВЪРХУ ТЕСТ КАРТИ ЗА ЕДНОКРАТНА УПОТРЕБА

883684 - 2014/12

[BG] 2

СЪДЪРЖАНИЕ

1. ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ ................................................................................ 3 2. КРАТКО ОПИСАНИЕ И ОБЯСНЕНИЕ НА ТЕСТА .................................... 3 3. ПРИНЦИПИ НА ПРОЦЕДУРАТА .............................................................. 3 4. РЕАКТИВИ .............................................................................................. 4 5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ .......................................... 4 6. ПРОБИ .................................................................................................... 6 7. ПРОЦЕДУРА ........................................................................................... 6 8. ОГРАНИЧЕНИЯ НА ТЕСТА ..................................................................... 9 9. РАБОТНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ ................................................................ 9 10. БИБЛИОГРАФИЧНИ ПРЕПРАТКИ. ........................................................ 1 0

[BG] 3

1. ПРЕДНАЗНАЧЕНИЕ RPR китовете са предназначени за използване за качествено и полуколичествено откриване на не-трепонемални, свързани със сифилис, антитела (реагини) в човешки серум и плазма и служат като помощно средство при диагнозата на инфекция със сифилис.

2. КРАТКО ОПИСАНИЕ И ОБЯСНЕНИЕ НА ТЕСТА Сифилисът е хронична инфекция, която минава през обособени стадии: първичен, вторичен, третичен и четвъртичен. През тези стадии се изявяват разнообразни клинични симптоми, обикновено се появяват първоначален твърд шанкър, след което сифилистичен обрив, последван от дълги периоди на латентност. Не лекуваната инфекция в крайна сметка може да доведе до сърдечно-съдови проблеми и невросифилис. Инфекцията се причинява от спирохетата Treponema pallidum и обикновено е придобита чрез сексуален контакт, освен това болестта може да бъде предадена при преливане на заразена кръв. Също така може да настъпи и вътрематочна инфекция. На практика се оказва почти невъзможно този организъм да се култивира в изкуствена среда и диагностиката на инфекцията обикновено зависи от доказването на антитела в кръвта, които се появяват скоро след първоначалната инфекция и могат да персистират в продължение на много години. Изследванията за сифилис попадат в четири категории: директно микроскопско изследване, тестове за антитела срещу трепонема, тестове за антитела, които не са срещу трепонема и директни антигенни тестове. RPR (бърз плазмен реагин) е „не-трепонемален“ тест, при който откритите антитела не са специфични за T pallidum, въпреки че тяхното присъствие в серум или плазма на пациента е тясно свързано с инфекция от този микроорганизъм. Този тип тест измерва антитела (IgG и IgM), получени в отговор на липоиден материал, освободен от увредени клетки на гостоприемника, както и на липопротеин-подобен материал, освобождаван от спирохетите. Тези антитела имат склонност да изчезват след успешно лечение на инфекцията.

3. ПРИНЦИПИ НА ПРОЦЕДУРАТА RPR китовете използват въглеродни частици, покрити със смес от липидни антигени, които могат да се свържат с реагинин антитела присъстващи в серума или плазмата на пациента. Частиците са суспендирани в среда, съдържаща компоненти, които елиминират неспецифични реакции. Положителните реакции се проявяват чрез макроскопска аглутинация (струпвания) на частиците. Въпреки че този кит е предназначен за използване преди всичко като качествен тест, нивата на антителата могат да бъдат титрирани чрез удвояване на разреждането. Характерът на аглутинация се тълкува на око.

[BG] 4

4. РЕАКТИВИ

4.1. Описание

Означение на етикета Описание

Представяне 72515 72516 100 теста 500 теста

R1 RPR Antigen Антиген RPR Въглеродни частици, покрити с кардиолипин, лецитин и холестерол антигени във фосфатен буфер

1 флакон 2 ml

1 флакон 10 ml

R2 Positive control

Положителна контрола Човешки серум, съдържащ антитела, свързани с Т. Pallidum, отрицателен за HBs антиген, анти-HIV1/2 и анти-HCV антитела, разреден във фосфатен буфер

1 флакон 1 ml

1 флакон 2 ml

R3 Negative control Отрицателна контрола Заешки серум във фосфатен буфер

1 флакон 1 ml

1 флакон 2 ml

Разпределителна бутилка (за многократна употреба) 1 1

Разпределителна игла (за многократна употреба) 1 1

Тест карти (10 цикъла) 10 50

4.2. Изисквания за съхранение и работа Този кит трябва да се съхранява при температура +2 - 8°C. Шишетата да се съхраняват в изправено положение. Да не се замразява. Всеки елемент от набора, консервиран при температура +2–8°C, може да бъде използван до датата на срока на годност, посочена върху етикета на опаковката. След отваряне и при липса на замърсяване реактивите R1, R2 & R3, съхранявани при температура +2–8 °C, могат да бъдат използвани до датата на срока на годност, посочена върху етикета.

5. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ За употреба при in vitro диагностика. За професионално използване в здравеопазването.

5.1. Предпазни мерки за безопасност и опазване на здравето: § С този тестов набор трябва да работи само квалифициран персонал, обучен по отношение на лабораторните процедури и запознат с потенциалните рискове. Да се носят подходящо предпазно облекло, ръкавици и защита за очите и лицето и да се работи при спазване на задължителните добри лабораторни практики.

[BG] 5

§ Предоставените материали за контрол са получени от човешки серум. Те са били тествани на ниво донор и е установено, че са отрицателни по отношение на HBs антиген, анти-HIV-1/2 и анти-HCV антитела. Не е известен метод, който да гарантира пълното отсъствие на инфекциозни агенти. Затова всички човешки кръвни продукти, реактиви и човешки проби, трябва да се считат за потенциални преносители на инфекциозни болести, като се спазват универсалните предпазни мерки за пренасяни по кръвен път патогени, както е определено от местните, регионалните и националните разпоредби.

§ Биологични материали: Разлетите материали от човешки произход да се считат за потенциално заразни.

Замърсявания с биологични материали, които не съдържат киселини, трябва да се обеззаразят незабавно, включително площта, където е разлято, материалите и всякакви замърсени повърхности или оборудване, с подходящ химически дезинфектант, който действа ефикасно срещу потенциалните биологични опасности, свързани със съответните проби (обичайно се използва обикновена белина, разредена 1:10, 70–80 % етанол или изопропанол, йодофор [като например 0,5 % Wescodyne™ Plus и др.) и да се подсуши.

Замърсявания с биологични материали, които съдържат киселини, следва да се попият (избършат) по подходящ начин или да се неутрализират, като облятата площ се изплакне с вода и се подсуши; може да е необходимо материалите, използвани за попиване на разлива, да се подложат на обезвреждане като биологически опасни отпадъци. След това площта следва да се обеззарази с един от химическите дезинфекционни препарати. БЕЛЕЖКА: Да не се поставят разтвори, съдържащи белина, в автоклава!

§ Всички проби и материали, използвани за теста, следва да се изхвърлят като съдържащи инфекциозни агенти. С лабораторните, химически и биологично опасни отпадъци се работи и те се изхвърлят в съответствие с действащите местни, регионални и национални нормативни разпоредби.

§ Информационният лист за безопасност е наличен на

www.bio-rad.com.

5.2. Предпазни мерки, свързани с процедурата 5.2.1. Подготовка

Надеждността на резултатите зависи от правилното прилагане на следните добри лабораторни практики: • Да не се смесват и използват съвместно реактиви от различни партиди в рамките на един цикъл на изследването.

[BG] 6

• Да не се използват реактиви с изтекъл срок на годност. • Преди употреба следва да се изчака 30 минути, за да се стабилизират реактивите при стайна температура (18–30 °C).

5.2.2. Обработка • Не променяйте реда за извършване на изследването. • Използвайте нов накрайник за накапване за всяка проба. • Да не се докосва повърхността, предназначена за реакцията на аглутинационните карти.

6. ПРОБИ В пробите серум или плазма (EDTA, натриев цитрат, натриев хепарин и ACD) трябва да няма кръвни клетки. Те могат да бъдат съхранявани при температура +2–8 °C до 7 дни преди извършването на теста. Пробите, които се нуждаят от продължително съхранение, трябва да бъдат замразени при температура –20 °С или по-ниска. Замразените проби трябва да бъдат размразени и добре разбъркани преди извършването на теста. Да не се повтарят повече от 5 цикъла на замразяване/размразяване. Затопляне на пробите при 56°C в продължение на 1 час няма да окаже влияние върху резултатите. Ако в пробите се съдържат до 120 g/l албумин, 200 mg/l билирубин, 33 g/l триолеин и до 2 g/l хемоглобин, това няма да повлияе на резултатите. Все пак, препоръчва се да не се използват хиперлипемични и хиперхемолизирани проби. Ако е необходимо пробите да се транспортират, те трябва да бъдат опаковани в съответствие с действащите разпоредби по отношение на транспортирането на етиологични агенти и е за предпочитане да се транспортират замразени.

7. ПРОЦЕДУРА

7.1. Необходими материали 7.1.1. Предоставен материал

Подходящо калибрирани шише за накапване и игла за накапване за еднократна употреба за разпределяне на въглеродни частици.

7.1.2. Необходими материали, които не са включени в набора Ротатор, за да се завъртат тест картите при 100 об/мин в кръг с диаметър приблизително 1 cm. Подходящо калибрирана и поддържана пипета и накрайници, за да се доставя обем от 50 µl. 0,9 % физиологичен разтвор (за полуколичествената процедура)

7.2. Процедура на теста Положителна (R2) и отрицателна (R3) контроли на набора трябва да бъдат изработвани при всеки един цикъл от тестове.

[BG] 7

7.2.1. Качествен тест 1. Да се поставят 50 µl от пробата или от контролата в кръга върху тест

картата. 2. Пробата и контролите да се разстелят равномерно върху кръга на областта

за тестване. 3. Да се разклати флакона с RPR антиген, за да се осигури пълно смесване

точно преди употреба, за да се избегне седиментация. 4. Иглата за накапване да се прикрепи към шишето за накапване и да се

поеме от RPR антигена чрез всмукване. 5. Капкомерът да се обърне и леко да се стисне, за да се отстрани въздухът

от иглата. 6. Като се държи шишето за накапване вертикално над пробата за тестване,

да се освободи само една капка RPR антиген. 7. Да се постави тест картата върху ротатора за карти и да се завърти при 100

об/мин за 8 минути. 8. Да се отчете незабавно, а резултатът да се интерпретира визуално при

добро осветление. (Обърнете се за справка към § 7.4) Бележка:

Ако не е възможно да се отчете веднага, карта трябва да продължи да стои на ротатора за карти до 15 минути

9. Да се върне неизползваният антиген от шишето за накапване в стъкления флакон. 10. Шишето за накапване и иглата да се почистят с дестилирана вода и да се

оставят да изсъхнат преди повторна употреба.

7.2.2. Полуколичествен тест 1. Да се направи дублиращ разтвор от неразреден до 1:16 в 0,9 % физиологичен разтвор. 2. Да се поставят 50 µl от всяко разреждане и от контролите в отделен кръг върху тест картата. 3. Всяко разреждане да се разстели равномерно върху тест кръга. 4. Да се продължи както при Качествен тест, раздел 3. Титърът на пробата се изразява като реципрочната стойност на най-високото разреждане, показващо аглутинация. Ако най-високото тествано разреждане (1:16) е реактивно, да се пристъпи към серии допълнителни разреждания чрез приготвяне на дублиращи разреждания на пробата от 1:32 до 1: 512, като се използва 0,9 % физиологичен разтвор. Да се разбърка добре и да се продължи като от етап 2 в полуколичествения тест.

7.3. Контрол на качеството Да се използва положителна контрола (R2) и отрицателна контрола (R3) при всяка серия на теста за валидиране на анализа.

[BG] 8

7.4. Тълкуване на резултатите и критерии за валидиране на теста

Силно реактивен (SR): Големи струпвания на въглеродни частици в бистра среда.

Реактивен (R): Големи струпвания на въглеродни частици, малко по-разпръснати в сравнение със Силно реактивен.

Слабо реактивен (WR): Малки струпвания на въглеродни частици в светлосива среда.

Следи от реактивност (TR): Леко струпване на въглеродни частици, което обикновено се вижда като малък диск от агрегати в центъра на тест кръга или разпръснато около ръба на тест кръга.

Не-реактивен (NR): В характерните случаи има гладко сив изглед или под формата на малък диск от неагрегирани въглеродни частици в центъра на тест кръга или голям кръг от въглеродни частици без никакво струпване вътре. Реактивните проби трябва да се записват като положителни за антитела и трябва (с оглед на неспецифичния характер на откритите антитела) да бъдат подложени на допълнителни тестове за определяне на наличието или отсъствието на специфични анти-трепонемални антитела. За да бъде валиден анализът, положителната контрола трябва да даде модел на силна реактивност, а отрицателната контрола трябва да даде ясно нереактивен резултат.

[BG] 9

8. ОГРАНИЧЕНИЯ НА ТЕСТА Не се разполага с нито един отделен тест или окончателен сравнителен стандарт, който да е приложим за всеки стадий на болестта. Следователно диагнозата на сифилиса може да бъде сигурна главно въз основа на серологични тестове, които изискват резултати както от не-трепонемални, така и от трепонемални методи. Фалшиво положителни резултати могат да се наблюдават, когато отчитането не става веднага след ротиране. Въглеродният RPR тест не е специфичен за сифилис. Всички реактивни проби трябва да се изследват повторно с трепонемални методи като TPHA за потвърждаване на резултатите.

9. РАБОТНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ

9.1. Прецизно проучване Панел с проби, който се състои от една отрицателна проба, 1 слабо положителна проба (титър 1:4) и 1 положителна проба (титър 1:16), е изследван за повторяемост при 8 дублирания по време на същата работна серия. За междинна прецизност и проучвания за интерпартидна възпроизводимост пробите са изследвани в 2 дублирания на ден в продължение на 5 дни (с отчитане от двама различни оператори) и върху две различни партиди.

9.1.1. Повторяемост Всички отрицателни дублиращи се проби дават отрицателни резултати, а всички положителни дублиращи се проби дават положителни резултати.

9.1.2. Междинна прецизност/интерпартидна възпроизводимост Всички отрицателни дублиращи се проби дават отрицателни резултати, а всички положителни дублиращи се проби дават положителни резултати, каквито и да са условията.

9.2. Клинични характеристики 9.2.1. Специфичност

Проучването за специфичност е ретроспективно проучване, извършено върху 102 замразени проби серум от рутинната практика на лабораторията на Център за болести, предавани по полов път във Франция. Резултатите от RPR анализа за сифилис са сравнени с RPR/VDRL анализ с CE маркировка.

Общ брой проби

Първоначално реактивни (IR)

Повторно реактивни (RR)

RR специфичност

(%)

95 % CI (интервал на доверителност)

102 2 (съмнителни) 0 100 %

102/102 [96,4 % – 100,0 %]

Установени са 2 съмнителни проби от 102 проби. Всички проби са отрицателни след повторно изследване.

[BG] 10

Диагностичната специфичност върху ретроспективни проби е равна на 102/102 = 100 % с интервал на доверителност при 95 % [96,4 % – 100,0 %].

9.2.2. Чувствителност Проучването за чувствителност е ретроспективно проучване, извършено върху 101 замразени проби серум от рутинната практика на лабораторията на Център за болести, предавани по полов път във Франция. Резултатите от RPR анализа за сифилис са сравнени с RPR/VDRL анализ с CE маркировка.

Общ брой проби

Първоначално реактивни (IR)

Повторно реактивни (RR)

RR специфичност

(%)

95 % CI (интервал на доверителност)

101 100 (1 съмнителна) 101 100 %

101/101 [96,4 % – 100,0 %]

Установена е 1 съмнителна проба от 101 проби. Всички проби са положителни след повторно изследване. Диагностичната специфичност върху ретроспективни проби е равна на 100 % (101/101) с интервал на доверителност при 95 % [96,4 % – 100,0 %].

9.3. Аналитична специфичност – проучване на кръстосана реактивност

Аналитичната специфичност на RPR анализа за сифилис е оценена върху общо 65 кръстосано реагиращи проби, избрани измежду други инфекциозни заболявания и/или състояния, които може да дадат фалшиво положителен резултат поради неспецифичност [Ревматоиден фактор, Лаймска болест (Lyme disease), вирус на Епщайн-Бар (EBV), рубеола (Rubella), лептоспироза (leptospirosis), системен еритематозен лупус (SLE, Lupus), хепатит B (Hepatitis B), хепатит C (Hepatitis С), ХИВ 1/2 (HIV 1/2), многораждали жени, бременни жени]. Получената специфичност на анализа е равна на 100,0 % (65/65) с 95 % интервал на доверителност [94,5 % – 100,0 %].

9.4. Прозонов ефект Три (3) много силно положителни проби за сифилис (> 1:128) са изследвани неразредени и разредени, за да се потвърди отсъствието на прозонов ефект. Всички неразредени положителни проби са положителни. Прозонов ефект не е открит при титри до 1:256.

10. БИБЛИОГРАФИЧНИ ПРЕПРАТКИ. 1. Larsen SA.,Pettit , et coll., EDTA –treated plasma in the Rapid Plasma Reagin

card test and the toluidine red unheated serum test for serodiagnosis of syphilis. J Clin Microbiology 1983;17;431-5

[BG] 11

2. Larsen S.A., Pope V., et coll., A manual of Tests for Syphilis. 9th Edition ;1998; 193 – 207

3. Portnoy J. Modifications of the rapid plasma reagin (RPR) card test for syphilis, for use in large-scale testing.Am J Clin Pathol;1963;40;473-9

4. Singh AE and Romanowski. Syphilis: Review with emphasis on clinical, epidemiological, and some biologic features. Clin Microbiol Rev. 1999 Apr; 12(2):187–209.

5. Stability of selected serum proteins after long-term storage in the Janus Serum Bank. Clin Chem Lab Med. 2009. 47:596-606.

[BG] 12

[BG] 13

Bio-Rad 3, Boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette Франция Тел.: +33 (0) 1 47 95 60 00 Факс: +33 (0) 1 47 41 91 33 2014/12

www.bio-rad.com 883684