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Tinciones

Universidad Mayor de San Simón

Lic. Gabriela S. Navia Rojas

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El proceso de tinción supone una reacción deintercambio de iones entre el colorante y lossitios activos de la superfcie de la clula

Es una tcnica au!iliar utili"ada en microscop#apara mejorar el contraste en la ima$en vista almicroscopio.

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La mor%olo$#a de las bacterias se puede estudiar de &

%ormas'

Sin te(ir )posible movilidad*

 Te(idos mediante colorantes )concentración tal +uemata a las bacterias, sin movilidad*, mejora lavisuali"ación de la mor%olo$#a , estructura se$-n eltipo de tinción la cual produce un contraste

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entajas de la Tinción

/bservar m0s adecuadamente su mor%olo$#a.

1roporcionar el contraste preciso y sufciente encada caso, lo +ue permitir0 di%erenciar distintostipos mor%oló$icos.

Establecer una in%ormación complementariasobre sus estructuras internas y2o e!ternas +ueno podr#an ser observadas por e!amen en %resco.

3onocer sus caracter#sticas tintorialesorient0ndonos 4acia un $rupo ta!onómico u otroen la clasifcación bacteriana

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FACTORES QUE AFECTAN A TODA TÉCNICADE TINCIÓN

Las tcnicas de coloración constituyen unapr0ctica diaria en el laboratorio demicrobiolo$#a por los cuales se deber0considerar una serie de %actores +ue puedan

alteras los resultados de los mismos. 5s# pueslos principales %actores son'

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Pureza de un colorante: 6 $rado de impure"a,6 error, 7calidad de tinción

Concentracin del colorante!" a mayor concentración mayor erroren la tinción8 i$ual +ue a menor concentración.

El #$ del colorante!" este es un %actor %undamental ya +ue dependede las estructuras +ue se desee observar para ele$ir el p9 adecuado.

Conser%acin del colorante!" se debe conservarse en lu$TcnicaEmpleada.: se deber0 se$uir ri$urosamente paso a paso cada tcnica

de tinción.Teeratura!" en la mayor#a de los casos se utili"a la temperaturaambiental pero si e!isten al$unas tcnicas +ue re+uieran detemperatura adecuada.

Cantidad de la &uestra!" ;eber0 ser representativa y 4omo$nea

pero no muy $rande.Reali"ar correctamente el %rotis.: se debe fjarse bien para +ue cuandose les a(ada los colorantes mordientes y decolorantes no arrastren alos microor$anismos +ue se desee observar.

ares %rescos, secos, y obscuros8 envasados y eti+uetados.

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Soluciones mordientes.: en ciertos casos sonnecesarios ya +ue act-an como fjadores yayudan a la fjación del colorante a lascorrespondientes estructuras.

 Tiempos de Tinción.: es necesario +ue todaslas sustancias se manten$an en lapreparación un tiempo preciso y variablese$-n la tinción.

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3lasifcación de los colorantes

Naturales: e!tra#do de plantas )a"ul deindi$o de le$uminosas*, animales )colc4icinael carm#n*

Arti'ciales: son preparados artifcialesobtenidos en su mayor parte de al+uitr0n de4ulla8 se distin$uen colorantes 0cidos)contraste* y b0sicos )primarios*, puedenpresentarse %ormando sales, as# comocolorantes neutros. 1or ejemplo el cristalvioleta, violeta de $enciana, %ucsina b0sica,a"ul de metileno.

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Se$-n su comportamiento +uimico

Acidos o a&onicos (contraste): la car$a del radical colorantees ne$ativa, colorantes citoplasm0ticos, ya +ue los citoplasmasde las clulas se consideran b0sicos, captando muy bien loscolorantes 0cidos. 1or ejemplo, las eosinas, las auraminas, etc.

Colorantes *+sicos o catinicos (#ri&arios): 3orresponder0n

a colorantes +ue ti(en estructuras de car0cter nuclear o similares+ue son acidas o li$eramente acidas, es decir, car$adasne$ativamente. 1or ejemplo la %ucsina b0sica, cristal violeta ovioleta de $enciana, as#, a"ul de metileno.

Colorantes neutros: es una sal compuesta de un colorante0cido y un colorante b0sico como, por ejemplo, el a"ul de

metileno +ue en $eneral posee las propiedades de colorantes0cidos y b0sicos. 3olorantes indi%erentes' son colorantesinsolubles en a$ua y solubles en alco4ol donde no predomina nila car$a positiva ni la car$a ne$ativa pero tampoco un car0cterneutro8 son los colorantes de los l#pidos, por Ne$ro Sud0n

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5cidos o amonicos )contraste*' la car$a del radical colorantees ne$ativa, colorantes citoplasm0ticos, ya +ue loscitoplasmas de las clulas se consideran b0sicos, captando

muy bien los colorantes 0cidos. 1or ejemplo, las eosinas, lasauraminas, etc.

3olorantes b0sicos o catiónicos )primarios*' 3orresponder0na colorantes +ue ti(en estructuras de car0cter nuclear osimilar +ue son acidas o li$eramente acidas, es decir,

car$adas ne$ativamente. 1or ejemplo la %ucsina b0sica,cristal violeta o violeta de $enciana, as#, a"ul de metileno.

3olorantes neutros' es una sal compuesta de un colorante0cido y un colorante b0sico como, por ejemplo, el a"ul demetileno +ue en $eneral posee las propiedades de colorantes

0cidos y b0sicos.3olorantes indi%erentes' son colorantes insolubles en a$ua y

solubles en alco4ol donde no predomina ni la car$a positivani la car$a ne$ativa pero tampoco un car0cter neutro8 sonlos colorantes de los l#pidos, por Ne$ro Sud0n

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Funda&ento:

3onsiste en poner en un portaobjetos, atravs de un asa de siembra, una cantidad de

microor$anismo problema suspendido enmedio l#+uido estril, e!tendindoloadecuadamente 4asta %ormar una fna pel#cula4omo$nea +ue, posteriormente, se fjar0

$eneralmente con calor cuando sea re+uerido,se$-n el mtodo de tinción +ue se utili"ar0posteriormente.

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 Tipos de Tinciones

Siles )para visuali"ar mor%olo$#a bacteriana*

Ne,ati%a )para observar caracter#sticasestructurales adem0s de mor%olo$#cas*Di-erencial )mor%olo$#a y otras caracter#sticascomo composición de pared*

Estructurales )presencia de esporas =a$elos,cilios capsula*

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En Gram )>* son decolori"adas, el etanolcontrae a los poros del peptido$lucano, el

complejo tinción ? yodo es retenido durante elpaso de la decoloración y la bacteriapermanece p-rpura.

En Gram ):* el peptido$lucano es muy fno sientrecru"amientos y con poros $randes, en eltratamiento con alco4ol se e!trae sufcientel#pido de la pared incrementado su porosidad,el complejo cristal yodo es removidor0pidamente de la bacteria y se ti(e de rojocon la sa%ranina.

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.RACIAS////!!