8/9/2019 1. biuret

1/20

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Protein termasuk kelompok senyawa yang terpenting dalam setiap organisme.

Kata Protein berasal dari yunani Proteros, yang artinya pertama. Protein adalah

makro molekul yang paling berlimpah di dalam sel hidup dan merupakan 50 persen.

Protein ditemukan di dalam semua sel dan semua bagian sel. Protein mempunyai

peranan biologis, karena protein merupakan instrumen yang mengekspresikan

informasi genetik .

Protein memegang peranan yang penting dalam kehidupan. Suatu proses

kimia dalam tubuh dapat berlangsung dengan baik karena adanya enzim. Suatu

protein yang berfungsi sebagai biokatalis. isamping itu hemoglobin dalam butir!

butir darah merah atau eritrosit yang berfungsi sebagai pengangkut oksigen dari

paru!paru ke seluruh bagian tubuh, adalah salah satu "enis protein. emikian pula zat!

zat yang berperan untuk melawan bakteri penyakit atau yang disebut antigen, "uga

suatu protein.Kita dapat memperoleh protein dari makanan yang berasal dari hewan atau

tumbuhan. Protein yang berasal dari hewan disebut protein hewani sedangkan yang

berasal dari tumbuhan disebut protein nabati# beberapa sumber dari protein hewani

dan protein nabati dapat diperoleh dari bahan!bahan seperti yang digunakan dalam

per$obaaan ini, yaitu dari ekstrak nanas, beki$ot, maupun air kelapa.

%ntuk menganalisis suatu protein yang terkandung dalam suatu sampel yang

diduga mengandung protein dapat dilakukan analisis dengan dua metode, yaitu u"i

se$ara kualitatif atau u"i se$ara kuantitatif. Pada per$obaan kali ini, dilakukan u"i

se$ara kuantitatif yaitu dengan metode biuret dengan menggunakan spektrometer

yang bertu"uan untuk mengetahui nilai absorbansi dari sampel!sampel yang

digunakan dan akhirnya dapat diketahui konsentrasi dari sampel!sampel tersebut.

7

8/9/2019 1. biuret

2/20

1.2 Tujuan Percobaan

&engetahui analisis pada u"i protein

&engetahui mengenai u"i biuret pada protein

&engetahui nilai dari konsentrasi sampel!sampel yang dianalisis

1.3 Prinsip Percobaan

Prinsip per$obaan ini adalah suatu u"i kuantitatif yaitu dengan menggunakan

pereaksi biuret dimana ion 'u()dari biuret akan bereaksi dengan ikatan peptida

dalam larutan alkali membentuk kompleks berwarna biru!ungu setelah itu dilakukan

pengukuran absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer %*!*is yang

nantinyan dapat dihitung konsentrasi sampel yang dianalisis.

BAB 2

TN!AUAN PU"TA#A

7

8/9/2019 1. biuret

3/20

Protein adalah suatu senyawa organik yang berbobot molekul tinggi berkisar

antara beberapa ribu sampai "utaan. Protein ini tersusun dari atom ', +, dan - serta

unsur lainnya seperti P dan S yang membentuk unit!unit asam amino. %rutan susunan

asam amino dalam protein maupun hubungan antara asam amino yang satu dengan

asam amino lainnya, menentukan sifat biologis suatu protein.

Protein terdapat pula pada semua sel hidup, kira!kira 50 persen dari berat

keringnya dan berfungsi sebagai pembangun struktur, biokatalis, hormon, sumber

energi, penyangga ra$un, pengatur p+, dan bahkan sebagai pembawa sifat turunan

dari generasi ke generasi.

/is"ah irindra # 1iokimia 23

Protein dapat dibagi men"adi dua golongan utama berdasarkan bentuk dan

sifat!sifat fisik tertentu. Protein globural dan protein serabut!serabut globural rantai

dan rantai!rantai polipeptida berlipat rapat!rapat men"adi bentuk globural atau bulat

yang padat. Protein globural biasanya larut di dalam sistem larutan air3 dan transport

pada darah, antibodi dan protein penyimpanan nutrien. Protein serabut bersifat tidak

larut dalam air, merupakan molekul serabut pan"ang, dengan rantai polipeptida yang

meman"ang pada suatu sumbu, dan tidak berlipat men"adi bentuk globural. +ampir

semua protein serabut memberikan peranan struktural atau pelindung. Protein serabut

yang khas adalah 4!keratin pada rambut dan wol, fibrion dari sutra dan kolagen dari

sutra.

ehninger 6 789(3

Sifat!sifat Protein

1erat molekul protein sangat besar, ribuan sampai "utaan, sehingga

merupakan suatu makromolekul, seperti senyawa polimer lain misalnya 6 pati3.

Protein dapat pula dihidrolisis oleh asam, basa atau enzim tertentu yang

menghasilkan $ampuran! $ampuran asam amino.

Sifat fisika kimia protein berbeda satu sama lain, tergantung pada komposisi

dan "enis asam amino penyusunnya. Sebagian besar protein, bila dilarutkan dalam air,

7

8/9/2019 1. biuret

4/20

akan membentuk dispersi koloidal dan tidak dapat berdifusi bila dilewatkan melalui

membran semipermeabel. 1eberapa protein mudah larut dalam pelarut organik seperti

eter, kloroform dan benzene.

Pada umumnya, protein sangat peka terhadap pengaruh!pengaruh fisik dan zat

kimia, sehingga mudah mengalami perubahan! perubahan bentuk atau modifikasi

pada struktur molekul protein disebut denaturasi adalah panas, p+, tekanan, aliran

listrik dan adanya bahan kimia seperti urea, alkohol atau sabun. Proses denaturasi

kadang berlangsung se$ara re:ersibel, tetapi ada pula yang irre:ersibel, tergantung

keadaan yang menyebabkannya. Protein yang mengalami denaturasi akan

menurunkan akti:itas biologisnya dan berkurang kelarutannya, sehingga mudah

mengendap.

;azid 6 (00

8/9/2019 1. biuret

5/20

alam sebuah molekul protein, gugus karboksil suatu asam amino berikatan

dengan asam amino lainnya melalui ikatan peptida

- C

H

R

C N C C N

H

O

H

R O

2katan peptida

alam sel hidup sintesis ikatan peptida ini melalui "alan yang rumit, namun

untuk mudahnya digambarkan sebagai berikut 6

= C C OH

NH2

H O

) -+( R1 = C C N

NH2

H O

H

R1

Suatu peptida yang terdiri dari dua atau lebih ikatan peptida bereaksi dengan

'u))dalam larutan basa dan membentuk kompleks berwarna biru!ungu. =eaksi ini

dikenal sebagai reaksi 1iuret.

/is"ah irindra 6 788032dentifikasi Protein

/nalisa protein dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu se$ara kualitatif

terdiri atas 6

=eaksi Aantoprotein

=eaksi +opkins D 'ole

=eaksi &illon

Se$ara kuantitatif terdiri dari 6

&etode owry

&etode K"ehdahl

&etode Spektrofotometri *isible biuret3, dan

&etode Spektrofotometri %*

/nalisis Kualitatif 6

a. =eaksi Aantoprotein

7

8/9/2019 1. biuret

6/20

arutan asam nitrat pekat ditambahkan dengan hati!hati ke dalam larutan

protein. =eaksi yang ter"adi ialah nitrasi pada inti benzene yang terdapat pada

molekul protein. =eaksi ini positif untuk protein yang mengandung tirosin,

fenilalanin dan triptofan.

b. =eaksi &illonPereaksi &illon adalah larutan merkuro dan merkuri nitrat dalam asam nitrat,

pada dasarnya reaksi ini positif untuk fenol!fenol, karena terbentuknya senyawa

merkuri dengan gugus hidroksifenil yang berwarna.

$. &etode 1iuret

arutan protein dibuat alkalis dengan -a+ kemudian ditambahkan larutan

'uSC en$er. %"i ini untuk menun"ukkan adanya senyawa!senyawa yangmengandung gugus amida asam berada bersama gugus amida yang lain. %"i ini

memberikan reaksi positif yaitu ditandai dengan timbulnya warna merah :iolet

atau biru :iolet.

/nalisa Kuantitatif

/nalisa protein dapat digolongkan men"adi dua metode, yaitu 6 metode

kon:ensional, yaitu metode K"ehdahl terdiri dari dekstruksi, destilasi, titrasi3, titrasi

formol. igunakan untuk protein tidak terlarut. &etode modern yaitu metode owry,

metode Spektrofotometri *isible, metode Spektrofotometri %* digunakan untuk

protein terlarut.

+ard"ono # 788(3

'iri!$iri Protein

Protein kadang!kadang diperkenalkan sebagai molekul makro pemberi

keterangan, karena urutan asam amino dari protein tertentu men$erminkan keterangan

genetik yang terkandung dalam urutan basa dari bagian yang bersangkutan dalam

-/ yang mengarahkan biosintesa protein. >iap "enis protein ditandai $iri!$irinya

oleh 6

7. Susunan kimia yang khas. Setiap protein indi:idual merupakan senyawa murni.(. 1obot molekular yang khas. Semua molekul dalam suatu $ontoh tertentu dari

protein murni mempunyai bobot molekul yang sama. Benis polimer ini disebut

7

8/9/2019 1. biuret

7/20

monodispers, suatu $ontoh a$ak dari polimer yang polidispers akan mengandung

molekul!molekul yang mempunyai batas!batas harga bobot molekular. &olekul

makro polidispers men$akup berbagai plastik buatan maupun polisakarida alam,

seperti kan"i dan selulosa. >idak ada pengendalian genetik langsung dari ukuran

dan urutan polimer demikian, bertentangan dengan molekul makro pemberi

keterangan seperti protein.

?. %rutan asam amino yang khas. %rutan asam amino dari protein tertentu adalah

terperin$i se$ara genetik. /kan tetapi perubahan!perubahan ke$il dalam urutan

asam amino dari protein tertentu dapat ter"adi melalui proses yang dikenal dengan

mutasi. &utasi dapat mengarahkan kepada hasil!hasil yang diinginkan, "ika proteinyang diperbaiki di$iptakan melalui proses pemilihan alamiah pada tingkat

molekulat. &utasi dapat "uga mempunyai akibat!akibat yang men$alakakan. /da

dua "enis protein, dibedakan oleh hasil!hasil yang diperoleh, apabila protein

dihidrolisa men"adi satuan monomer penyusun.

2ni adalah protein sederhana dan protein terkon"ugasi 6

Protein sederhana 6 +anya asam amino

Protein terkon"ugasi 6 /sam amino ) gugus gugus3 prostetik non protein.

a:id.S.Page # 78953

Sifat 2katan PeptidaPembentukan ikatan peptida dari asam!asam amino penyusunnya adalah

termodinamik tidak menguntungkan. /lasan utama untuk ini adalah bahwa

pembentukan mata rantai peptida amida3 antara dua asam amino terpisah

mengharuskan bahwa gugus!gugus yang bereaksi pertama!tama diubah bentuk.

1entuk zwitter ion yang lebih stabil men"adi bentuk!bentuk tak terionisasikan !

'+3 dan !-+(3. 2lmu daya usaha yang tidak menguntungkan dari pembentukan

ikatan peptida, menyebabkan protein terhidrolisa se$ara spontan. /kan tetapi

reaksinya luar biasa lambat tanpa adanya katalis.Struktur ikatan peptida semula diterangkan oleh inus Pauling dalam tahun

78C0!an. 1agan dari struktur ditun"ukkan dalam gambar (.9. +al!hal penting yang

menon"ol adalah 6

7

8/9/2019 1. biuret

8/20

7. 2katan peptida Karbon!-itrogen 7,?(/o3 lebih pendek dari pan"ang ikatan rata!

rata sebesar 7,5/o 7/o E 70!9$m3 dari ikatan rangkap, yaitu dengan bentuk

resonansi yang menyokong kepada ikatan peptida se$ara keseluruhannya yaitu

' N

O

' N+

-O

(. Sifat ikatan rangkap yang tinggi dari ikatan peptida mengharuskan semua atom

yang diikat pada karbon peptida dan nitrogen koplanar.

a:id.S.Page # 78953

&etode 1iuret

arutan protein dibuat alkalis dengan -a+ kemudian ditambahkan larutan'uSC en$er. %"i ini untuk menun"ukkan adanya senyawa!senyawa yang

mengandung gugus amida asam !'-+(3 yang berada bersama dengan gugus amida

asam yang lain atau gugus yang lain seperti !'5-+(# !'-+3-+(# !'+(-+(#

!'=+-+(.engan demikian u"i biuret tidak hanya untuk protein tetapi zat lain seperti biuret

atau malonamida "uga memberikan reaksi positif yaitu ditandai dengan timbulnya

warna merah!:iolet atau biru!:iolet.

2ntensitas warna tergantung pada konsentrasi protein yang ditera. Penentuanprotein $ara biuret adalah dengan mengukur opti$al density 3 pada pan"ang

gelombang 500!590 nm. /gar dapat dihitung banyaknya protein dalam bahan maka

perlu lebih dahulu dibuat kur:a standar yang melukiskan hubungan antara konsentrasi

protein dengan pada pan"ang gelombang terpilih.

Sudarmad"i.S 6 78983

7

8/9/2019 1. biuret

9/20

BAB 3

$ET%D%L%& PE'(%BAAN

3.1 Alat )an Ba*an

?.7.7 /lat!alat

>abung reaksi =ak tabung

1eaker glass

elas ukur

1atang pengaduk

Spektrofotometer

Ku:et

Pipet :olume

1ulp

?.7.( 1ahan!bahan %rin puasa

%rin tidak puasa

Fkstrak nanas

endir 1eki$ot

/ir kelapa

=eagent 1iuret

=eagent 1o:ine Serum /lbumin

/Guadest

/ir liur

3.2 Prose)ur Percobaan

?.(.7 arutan Standar

7

8/9/2019 1. biuret

10/20

iambil ( ml aGuadest dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi

itambahkan 0 ml 1S/ 70 mgH ke dalamnya tanpa penambahan sampel

itambahkan dengan 9 ml reagent 1iuret ke dalam tabung reaksi tersebut

dan diko$ok perlahan

iinkubasi selama ?0 menit dengan suhu kamar

imasukkan larutan ke dalam ku:et, kemudian ditempatkan di dalam

spektrofotometer %*!*is dengan pan"ang gelombang 5C0 nm

i$ari nilai absorbansinya

ilakukan hal yang sama dengan menggunakan aGuadest 7,0 ml# 7,( ml#

0,9 ml# 0,C ml# 0 ml dan larutan standart 1o:ine Serum /lbumin 0,C ml

?.(.( arutan Sampel iambil ( ml sampel air kelapa dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi

itambahkan dengan 9 ml reagent 1iuret ke dalamnya dan diko$ok

perlahan

imasukkan larutan ke dalam ku:et, kemudian ditempatkan di dalam

spektrofotometer %*!*is dengan pan"ang gelombang 5C0 nm.

iukur dan di$atat nilai absorbansi

iulangi langkah diatas dengan mengganti sampel yang digunakan dengan

sampel urin puasa, urin tidak puasa

7

8/9/2019 1. biuret

11/20

BAB +HA"L DAN PE$BAHA"AN

+.1 Data Penga,atan

/. standar

-o =eagent>abung Ke

7 ( ? C 5

70mgHml

0 0,C 0,9 7,( 7,< (

? Sampel ! ! ! ! ! !

C 1iuret 9 9 9 9 9 9

/bsorbansi 0,709 0,?79 0,C09 0,C8< 0,559 0,IC(

iinkubasi ?0 menit, suhu ruang, diukur serapan, J E 5C0 nm

1. Sampel

-o =eagent>abung Ke

7 ( ? C 5

70mgHml

! ! ! ! ! !

? Sampel ( ( ( ( ( (

C 1iuret 9 9 9 9 9 9

/bsorbansi 7,7?0 0,(5C 0,788 0,(57 0,755 0,I0