1 / 3

Table of Contents

No. Title Page

1 Production and Specificity Testing of Monoclonal Antibodies to Bovine ZonnaPellucida 3 Deglycosylated (Mab-bZP3dG) for Woman ImmunocontraceptiveVaccine

1 - 4

2 Potency of Crude Spirulina on Protein Efficiency Ratio in Laying Hen 5 - 8

3 H-Y antisera Preparation and X Chromosomal Receptor Tracer as SexDetermination Prototype

9 - 14

4 Erythrocyte's Form Changes in Dog's Blood Smear Before and After the StorageUsing Citrate Phosphate Dextrose

15 - 18

5 Avian Influenza H5N1 Vaccine Candidate for Chicken from East Java IsolateVirus

19 - 24

6 Pengaruh Pemberian Antagonis Reseptor N-Metil-D-Aspartat (NMDA) Mk-801Terhadap Penurunan Sensasi Nyeri Inflamasi pada Mencit Putih (Mus Musculus)Strain Balb/C

25 - 36

7 Exploration Cellulolytic of Bacterium of Rumen Liquid Beef Cattle As Inoculum ofWaste Agriculture

37 - 42

8 Respon hMG Toward Ovarium Development In Goat 43 - 48

9 Identification Of Pregnancy Associated Glycoprotein (PAG) From Milk Of PregnantDairy Cattle

49 - 52

10 The Role Of Soil As A Helminths Transmitter Around The Habitas of Babirusa 53 - 56

11 Potency of Brown Seaweed (Sargassum duplicatum Bory) Ethanol and EthylAcetic Fraction to Malondialdehyde Concentration Decreasing and HistologicalRetriveal of IBD (Inflammatory Bowel Disease) Rat Small Intestinal Jejunum

57 - 64

12 Blood Glucose and Total Blood Protein Profile in Sheep Provided With Lactic AcidBacteria and Yeast on King Grass and Rice Straw

65 - 70

13 Effect Of Pegagan (Centella Asiatica) Extract in Ovariectomized Wistar-strainRattus norvegicus On Epithelial Proliferation Of Vaginal Wall

71 - 76

14 Excessive Dose Of Vitamine A On Skeletal Development In The Mice Embryos 77 - 80

2 / 3

Vol. 4 - No. 1 / 2011-02TOC : 5, and page : 19 - 24

Avian Influenza H5N1 Vaccine Candidate for Chicken from East Java Isolate Virus

Kandidat Vaksin Flu Burung H5N1 Bagi Ternak Ayam Isolat Asal Jawa Timur

Author :Ernawati, Rahayu | rrrnawati@yahoo.co.idFakultas Kedokteran Hewan Universitas AirlanggaPoetranto, E.D |Mahasiswa Program Doktor Pascasarjana UnairHanief R.M |Mahasiswa Program Magister Pascasarjana Unair

Abstract

Highly Pathogenic Avian Influenza (HPAI) H5N1 virus is an ongoing public health and socio-economic challenge,particularly in Indonesia. Avian Influenza (H5N1) is now endemic in poultry in many countries, and represents a majorpandemic threat. Now, the evolution of H5N1 virus in Indonesia has evolved with genetic variations affecting virulence,drug-resistance, and adaptation to new host species. The reassortment events leading to high genetic diversity in theregion, and factors responsible for virus spread. Development of H5N1-specific vaccine may be become a good strategyfor the prevention or controlling the spread of AI. This study was aimed to find avaccine candidate for Avian Influenzasubtype H5N1 which has a good quality, safe, homolog genetically and antigenically with the virus in East Java. Thesample viruses were isolated from village chicken in traditional market at Surabaya, Jombang, Pare, and Kediri.Suspensions in antibiotic solution of cloacal swabs (or organs), taken from village chicken, inoculated into the allantoiccavity of 9 to 11-day-old embryonating chicken eggs. The eggs areincubated at 37°C (range 35–39°C) for4–7 days. The allantoic fluid of any eggs containing dead or dying embryos during the incubation and all eggs atthe end of the incubation period are tested for the presence of haemagglutinating activity by HA and HI test. Thepresence of Hemagglutinin gene which are common to all influenza A viruses can be confirmed by One Step PCR using 4pairs of specific primers. Then, the product being purificated and sequenced to get the hemagglutinin nucleotide data.The data were analysed for homology relationship. The antigenic test against confirmed antisera panel was conducted toobserved the antigenic potential from the isolate. The study results two isolates, Jombang and Pare isolate. The result ofthis study show that the isolate have a high homology ofhemagglutinin gene with another virus isolate(A/chicken/WestJava/Tasiksol/2006) which have wide covered spatial area. The antigenic test showed the same result,but Pare isolate have much wider covered area because it can react with all of antigenic test panel antisera.

Keyword : Vaccine, Avian, Influenza, (H5N1), Chicken, Hemagglutinin, , ,

Daftar Pustaka :1. Chen H, G. Deng, Z. Li, G. Tiam, Y. Li, P. Jiao, L. Zhang, Z. Liu, R.G. Webster, and K. Yu., (2004). The evolutionof H5N1 influenza viruses in ducks in Southern China. . United States : Microbiology 101 : 10451-104572. Fouchier, R.A.M., V. Munster, A. Wallenstens, T.M. Bestebroer, S. Hersfst, D. Smith, G.F. Rimmelzwaa, (2005).Characterization of novel influenza A virus hemagglutinin subtype (H16) obtained black-headed gulls. United States : JVirol 79 (5) : 2814-28223. Rantam, F.A., (2005). Virologi. Surabaya : Airlangga University Press

Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)

3 / 3

Kandidat Vaksin Flu Burung H5N1 Bagi Ternak Ayam Isolat Asal Jawa Timur

Avian Influenza H5N1 Vaccine Candidate for Chicken from East Java Isolate virus

1 2 3Rahayu Ernawati , E. Djoko Putranto , Maulana Hanief R

1Fakultas Kedokteran Hewan Unair 2Mahasiswa Program DoktorPascasarjana Unair

3Mahasiswa Program MagisterPascasarjana Unair

Kampus C Unair, Jl. Mulyorejo Surabaya-60115 Telp. 031-5992785, Fax. 031-5993015

Email : rrrnawati@yahoo.co.id

Abstract

Highly Pathogenic Avian Influenza (HPAI) H5N1 virus is an ongoing public health and socio-economic challenge, particularly in Indonesia. Avian Influenza (H5N1) is now endemic in poultry in many countries, and represents a major pandemic threat. Now, the evolution of H5N1 virus in Indonesia has evolved with genetic variations affecting virulence, drug-resistance, and adaptation to new host species. The reassortment events leading to high genetic diversity in the region, and factors responsible for virus spread. Development of H5N1-specific vaccine may be become a good strategy for the prevention or controlling the spread of AI. This study was aimed to find a vaccine candidate for Avian Influenza subtype H5N1 which has a good quality, safe, homolog genetically and antigenically with the virus in East Java. The sample viruses were isolated from village chicken in traditional market at Surabaya, Jombang, Pare, and Kediri. Suspensions in antibiotic solution of cloacal swabs (or organs), taken from village chicken, inoculated into the allantoic cavity of 9 to 11-day-old embryonating chicken eggs. The eggs are incubated at 37°C (range 35–39°C) for 4–7 days. The allantoic fluid of any eggs containing dead or dying embryos during the incubation and all eggs at the end of the incubation period are tested for the presence of haemagglutinating activity by HA and HI test. The presence of Hemagglutinin gene which are common to all influenza A viruses can be confirmed by One Step PCR using 4 pairs of specific primers. Then, the product being purificated and sequenced to get the hemagglutinin nucleotide data. The data were analysed for homology relationship. The antigenic test against confirmed antisera panel was conducted to observed the antigenic potential from the isolate. The study results two isolates, Jombang and Pare isolate. The result of this study show that the isolate have a high homology of hemagglutinin gene with another virus isolate (A/chicken/WestJava/Tasiksol/2006) which have wide covered spatial area. The antigenic test showed the same result, but Pare isolate have much wider covered area because it can react with all of antigenic test panel antisera.

Keywords : Vaccine, Avian Influenza (H5N1), Chicken, Hemagglutinin, Homology

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Pendahuluan

Kejadian wabah Flu Burung (Avian

Influenza) selain mengakibatkan kerugian ekonomi

yang sangat tinggi karena kematian pada ternak

unggas juga menimbulkan kepanikan yang luar biasa

karena dapat menular dan mematikan pada manusia.

Di Indonesia sejak Agustus 2003 hingga 10

September 2008 telah menyebabkan kematian lebih

dari 10 juta ayam dengan menimbulkan kerugian

lebih dari 4 trilyun rupiah dan hingga bulan Januari

2010 tercatat 163 kasus pada manusia dengan

kematian 135 orang (Hasan, 2009; Dharmawan dan

Wahyuningsih, 2010).

Virus Avian Influenza (AI) mempunyai

struktur antigen permukaan antara lain Hemaglutinin

(HA) dan Neuroamidase (NA). Penggolongan

subt ipe AI adalah atas dasar kandungan

Hemaglutinin yang terdiri atas 16 subtipe dan atas

dasar Neuroamidase yang terdiri atas 9 subtipe. Jenis

yang menyerang Indonesia, menurut pemerintah

yang diumumkan oleh Ditjenak adalah subtype

H5N1 (Nidom, 2009; Kawaoka, 2009).

Virus AI mempunyai 8 segmen gen yang

menyandi 10 macam protein, yakni PB-2

(Polymerase Basic-2), PB-1(Polymerase Basic-1),

PA (Polymerase acidic), HA (Haemaglutinin),

NP(Nucleo Protein) , NA (Neuroamidase) ,

M1(Matrix-1), M2 (Matrix-2) , NS1 (Non Struktural-

1) dan NS2 (Non Struktural-2). Protein HA

merupakan target awal dalam pembentukan antibody

inang. Pada awal infeksi protein ini akan berikatan

dengan reseptor sel inang dan melepaskan

ribonukleoprotein. Akibat aktivasi precursor HA

(HAO) oleh protease inang, protein akan terbelah

menjadi HA1 dan HA2. Protein HA1 akan berikatan

dengan reseptor dan merupakan target utama untuk

timbulnya respons imun, sedangkan protein HA2

akan memfasilitasi fusi antara amplop virus dengan

membrane endosomal inang. Oleh karenanya Protein

HA merupakan pertimbangan utama dalam

19

menentukan bahan dalam pembuatan vaksin flu

burung (Suzuki and Nei, 2002). Namun membuat

vaksin yang dijamin aman, efektif, stabil secara

genetik serta homolog secara antigenik adalah suatu

hal yang tidak mudah, karena sebagai virus RNA

virus ini mudah mengalami mutasi sehingga virus

yang mewabah dari tiap daerah dan tiap waktu sering

tidak sama karena telah mengalami mutasi delesi

atau insersi bahkan reassortment (Hoffmann dkk.,

2005).

Sekalipun publikasi tentang genotipe virus

Al H5N1 asal Indonesia belum banyak dipublikasi,

data yang telah tersedia menunjukkan bahwa virus AI

telah berevolusi dan kian menyebar di Indonesia

melalui perantara lalu lintas unggas dan produk

perunggasan. Reassortment genetik dan peran burung

liar belum teridentifikasi dengan jelas namun seperti

yang diduga, materi genetika virus Al H5N1 terus

mengalami perubahan melalui mutasi (genetic drift)

terutama pada segmen ke-4 yang menyandi protein

HA. Perkembangan diatas mempunyai implikasi

yang besar dalam pemilihan seed vaksin yang hendak

digunakan di suatu wilayah. Idealnya, vaksin yang

digunakan mestinya mempunyai homologi genetik

dan antigenik yang mendekati sempurna dengan

virus yang beredar di wilayah yang bersangkutan

(Kawaoka,Y.2009., Rantam dkk. 2008).

Materi dan Metode Penelitian

Sampel

Koleksi sampel berasal dari puluhan ayam

buras yang didapat dari pasar Wonokromo Keputran,

Djombang, Pare dan Kediri. Tehnik pengambilan

sampel virus Avian Influenza dilakukan dengan

berbagai cara, diantaranya dengan tehnik swab/

usapan dan tehnik gerusan organ. Pada tehnik

swab/usapan di lakukan dengan melakukan swab

atau usapan pada bagian kloaka unggas dengan

menggunakan cotton bud/ batang berkapas kemudian

di masukkan dalam media transport yang telah

disediakan di dalam tabung-tabung kecil/ ependof,

campuran inilah yang nantinya menjadi bahan

inokulan pada TAB. Pada tehnik gerusan organ

dilakukan dengan mengambil sebagian potongan

organ seperti paru-paru, trakea, hepar, usus ataupun

otak yang kemudian digerus di dalam cawan gerus

dengan sedikit cairan PZ dan dicampur dengan pasir

kuarsa dalam proses penggerusan bila dianggap

perlu. Selanjutnya, hasil larutan gerusan organ

tersebut dimasukkan ke dalam tabung untuk

dilakukan sentrifuse, kemudian diambil cairan

supernatannya sebagai bahan inokulan pada TAB.

Selanjutnya bahan inokulan dari usapan kloaka dan

gerusan organ tersebut diinokulasikan pada telur

ayam bertunas (TAB) berumur antara 8 – 11 hari.

Kemudian diinkubasikan pada inkubator dengan osuhu 37 C selama 5 hari. TAB ini diamati

perkembangannya tiap 4 jam untuk dicandling

embrionya. Apabila terdapat TAB yang embrionya

mati sebelum 5 hari, maka dimasukkan kedalam orefrigerator -4 C. Pada hari ke 5 semua telur

dimasukkan ke dalam refrigerator. Kemudian cairan

alantois dari TAB tersebut dipanen. Setiap sampel

ditanam pada TAB sebanyak 2 butir. Cairan alantois

tersebut kemudian diuji dengan Hemaglutinin test

(Uji HA). Isolat-isolat cairan alantois ini digunakan

sebagai sampel penelitian, dan kemudian disimpan di odalam refrigerator -4 C.

Uji Hemaglutinasi Mikroteknik

Uji hemaglutinasi (HA) dapat digunakan

untuk mengidentifikasi virus jenis orthomyxovirus

yang mampu menggumpalkan darah serta untuk

mengetahui titer awal antigen yang digunakan

terutama guna kelanjutan uji hambatan hemaglutinasi

(HI). Prosedur pelaksanaan uji ini adalah semua

lubang pada mikroplate diisi dengan PZ sebanyak

25μl. Kemudian diisikan antigen sebanyak 25μl ke

lubang A1 untuk sampel I dan lubang A2 untuk

sampel ke II dan seterusnya, lalu dilakukan

pengenceran serial dengan mengambil 25μl dari

lubang A1 dicampur ke lubang B1, kemudian

diambil lagi dari lubang B1 sebanyak 25μl dicampur

lagi ke lubang C1 begitu seterusnya sampai lubang

H1. Pengambilan terakhir dari lubang H1 dibuang.

Kemudian semua lubang diisi dengan eritrosit ayam

0,5% sebanyak 50μl, lalu diinkubasi pada suhu ruang

selama 30 menit. Setelah itu titer sampel bisa

diperiksa. Reaksi hemaglutinasi positif ditandai

dengan terjadinya aglutinasi pada eritrosit.

Uji Hambatan Hemaglutinasi (HI) Mikroteknik

Pelaksanaan uji ini dilakukan dengan

mengisikan ke semua lubang mikroplate dengan

0,025 ml PZ/PBS menggunakan mikropipet.

Kemudian diisi lubang no.1 dan 12 dengan antiserum

sebanyak 0,025 ml dengan menggunakan mikropipet,

lalu campurkan dengan mikropipet juga antiserum

dan PZ/PBS pada lubang no.1 dengan menghisap dan

mengeluarkan kembali lalu ambil 0,025 ml dan

pindahkan ke lubang berikutnya, demikian

seterusnya sampai lubang no.10. Setelah itu

dilakukan pengisisan lubang no.1 sampai no.10

dengan antigen 4HA unit sebanyak 0,025 ml dengan

Kandidat Vaksin Flu ......

20

menggunakan mikropipet. Inkubasikan pada suhu

ruang selama 30 menit, diisi semua lubang dengan

0,05 ml eritrosit ayam 0,5%, kemudian inkubasikan

pada suhu kamar selama 30 menit.

Uji Antigenitas/Immunogenitas

Sesuai dengan Prescreen Haemaglutination

Inhibition Testing Protocol, DIC Prescreen Effort to

Monitor Virus Variant, 1 November 2010 maka

sebelum penelitian antigen harus diinaktifkan lebih

dahulu dengan Formaldehide 37% dengan

konsentrasi akhir 0,2% dalam larutan Allantois yang

berisi virus, kemudian inkubasi 4C semalam. Semua

antigen yang dipergunakan adalah 4 HAU antigen

(antigen yang masih mampu mengaglutinasi eritrosit

pada batas pengenceran 4 kali) dan harus disiapkan

1-2 hari sebelum uji. Antisera yang disiapkan adalah

antisera yang dienceran 4 kali sehingga awal

penelitian dimulai dengan pengenceran 8 kali hal ini

karena syarat minimal untuk seed vaksin adalah

positif pada pengenceran >4 kali. Uji ini dilakukan

dengan urutan kerja sebagai berikut semua lubang

mikroplate diisi dengan 25 ul larutan PBS

menggunakan pipet dropper, kemudian lubang no 1

diisi dengan serum Anti-A/chickenWestJava/SMI-

Hamid/2006 , no . 2 dengan serum Ant i -

A/chicken/Konawe Selatan/BBVM2040/2007, no. 3

denga serumAnti-A/chicken/WestJava/Tasiksol/2006,

n o . 4 d e n g a n s e r u m A n t i -

A/chicken/Indonesia/Wates1/2005. Menggunakan

mikrodiluter 25 ul, dicampur masing-masing

antiserum dengan PBS dengan cara memutar-mutar

mikrodiluter kemudian encerkan dengan cara

memindahkan 25 ul ke lubang baris ke 2. Demikian

seterusnya hingga lubang baris ke 8 dan terakhir

dibuang, kemudian semua lubang mikroplate (no. 1

hingga 4, baris 1 hingga 8) diisi dengan antigen 4

HAU dari antigen yang diperiksa. Kemudian dikocok

dengan shaker selama 10-15 detik dan diinkubasikan

37C selama 30 menit. Ditambah dengan 50 ul 0,5%

eritrosit ayam pada semua lubang mikroplate, ditutup

dan dikocok dengan shaker selama 10-15 detik,

diinkubasi 4C selama 45 – 60 menit.

Buffer AW2. Sentrifus 14000 rpm selama 3

menit dan pindahkan ke tube 1,5 ml, tambahkan 60

μl buffer AVE. Kemudian inkubasi pada suhu ruang 1

menit lalu sentrifus 8000 rpm selama 1 menit.

Ekstraksi RNA

Ekstraksi RNA virus avian influenza

dilakukan dengan menggunakan QIAamp Viral Mini

Kit. Langkah-langkah ekstraksi adalah dengan

memasukkan 560 μl buffer AVL (viral lysis buffer)

yang mengandung carrier RNA dengan perbandingan

: volume buffer AVL 0,56 ml + carrier RNA-AVE 5,6

μl. Kemudian dimasukkan 140 μl sampel dan spin

sebentar, tambahkan 560 μl Ethanol absolut, vortex

15 detik, lalu spin sebentar. Masukkan 630 μl ke

dalam spin column sentrifus 8000 rpm selama 1

menit. Buang cairan dibawah, tambahkan 500 μl

buffer AW1 (washing buffer). Sentrifus 8000 rpm

selama 1 menit. Kemudian pindahkan ke tabung baru

dan tambahkan 500 μl buffer AW2. Sentrifus 14000

rpm selama 3 menit dan pindahkan ke tube 1,5 ml,

tambahkan 60 μl buffer AVE. Kemudian inkubasi

pada suhu ruang 1 menit lalu sentrifus 8000 rpm

selama 1 menit.

RT-PCR (Reverse Transcriptase-Polymerase Chain

Reaction) dan Sequensing

Uji Reverse transcriptase-polymerase chain

reaction (RT-PCR) dilakukan dengan menggunakan TMSuperScript III One-Step RT-PCR system with

Platinum® Taq High Fidelity DNA Polimerase

(Invitrogen).

Pelaksanaan PCR terhadap gen HA virus

a v i a n i n f l u e n z a i n i d i l a k u k a n d e n g a n

mempertimbangkan kebutuhan panjang nukleotida

yang dapat diolah oleh mesin sekuenser nantinya.

Sehingga untuk proses PCR gen HA yang memiliki

kurang lebih 1779 nukleotida, maka digunakan 4

pasang primer spesifik sebagaimana terlihat dalam

tabel 1.

Tabel 1. Primer dan Sekuens Primer

Pelaksanaan One Step PCR dilakukan

dengan cara mencampurkan ke dalam tabung PCR

bahan komponen One Step PCR yang terdiri dari 2X

Reaction Mix 12,5 µl, template RNA (1 pg–1 µg) 2

µl, sense primer (10 µM) 0,5 µl, anti-sense primer

(10 µM) 0,5 µl, SuperScript™ III RT/ Platinum®

Taq High Fidelity Enzyme Mix* 1 µl, lalu tambahkan

autoclaved distilled water sampai 50 µl. Kemudian

tabung PCR tersebut dimasukkan kedalam alat

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

21

Primer Sekuens

P1_F

P1_R

P2_F

P2_R

P3_F

P3_R

P4_F

P4_R

5” GGCCAGTAGCAAAAGCAGGGGT 3”

5” CTTCTCCACTATGTAAGACCATTCCGGTACAT 3”

5” GTTACTGTTACACATGCCCAAGACATACTG 3”

5” AATTGCTGAGTCCCCTTTCTTGACAATTTTGT 3”

5” CCTATATTTCCGTTGGGACATCAACACTAA 3”

5” CATTTTCCATGAGAACCAGAAGTTCAGCA 3”

5” GAGGGAGGATGGCAGGGAATGGTAGATG 3”

5” CCAGTAGAAACAAGGGTGTT 3”

Thermocycler (GeneAmp PCR System 9700) dengan

siklus suhu di program dalam kondisi suhu sintesis o ocDNA 48 C selama 30 Menit, pre-denaturasi 94 C

selama 2 menit. Suhu amplifikasi PCR sebagai oberikut suhu denaturation 94 C selama 30 detik,

o oannealling 50 C selama 40 detik, dan extention 68 C

selama 40 detik yang dilakukan sebanyak 40 siklus. oSuhu untuk final extention adalah 68 C selama 5

menit.

Elektroforesis

Sebanyak 5µl sampel DNA ditambah

dengan 2µl blue juice di- loading pada sumuran gel

agarose 1%. Plat dijalankan dengan 125 V, 70 mA

dalam waktu 30-45 menit. Gel dibaca pada

transluminator UV dan didokumentasi.

Purifikasi Produk PCR

Purifikasi produk PCR dilakukan dengan

Nucleospin II. Dilakukan dengan mencampurkan 1

volume sampel dengan 2 volume Buffer NT.

Kemudian mempersiapkan kolum Nucleospin

Extract II, lalu dimasukkan sampel dan sentrifus

11.000 rpm selama 1 menit. Cuci Silica membran

dengan menambahkan 600 μl Buffer NT dan

sentrifuse 11.000 rpm selama 1 menit. Setelah itu

melakukan pengeringan Silica membran dan lakukan

sentr i fuse 11.000 selama 2 meni t untuk

mengeluarkan NT.

Purifikasi hasil cycle sekuensing dengan Big Dye X

Terminator Purification Kit

Tahap ini dilakukan dengan melakukan

pencampuran menggunakan vortex terlebih dahulu

terhadap Big Dye X terminator sampai homogen,

kemudian dimasukkan SAM sol 4,5 x volume cycle

sequencing ke dalam well. Dimasukkan Big Dye X

Terminator 1 x vulome hasil cycle sequencing, lalu

dicampur mengunakan vortex selama 30 menit dan

sentrifus 1000 g/rcf selama 2 menit pada suhu ruang.

Hasil Dan Pembahasan

Elektroforesis

Menginga t t a rge t RT-PCR ada lah

sekuensing lengkap RNA dari gen HA virus H5N1

yang terdiri dari sekitar 1700 bps nukleotida maka

untuk mendapatkan hasil yang bagus dipergunakan 4

pasang primer.

Isolate Jombang Isolate Pare

Gambar 1. Hasil elektroforesis isolat Jombang dan

Pare

Sekuensing

Hasil mesin sekuenser dengan 4 pasang

primer (masing–masing terlampir) diolah dengan

clone manager dengan hasil pada gambar 2.

Gambar 2. Hasil sekuensing gen HA Avian Influenza

H5N1 asal ayam Buras Pare (=AJP3)

Gambar 3. Hasil sekuensing gen HA Avian Influenza

H5N1 asal ayam Buras Djombang

(=AJP2)

Kandidat Vaksin Flu ......

22

Bila dilakukan homologi antara ayam Buras

asal Djombang dan Pare, hasilnya sebagai berikut

Kes impulannya ada lah , kesamaan

nukleotida gen HA virus H5N1 antara virus asal

ayam Buras Djombang dan Pare adalah 95%.

Dengan cara yang sama dua gen HA diatas

( Ayam Buras Djombang=AJP2; Ayam Buras

Pare=AJP3) bila di homologikan dengan salah satu

gen HA virus yang mempunyai cakupan yang luas

yakni A/chicken/West Java/TASIKSOL/2006 (detail

terlampir) hasilnya adalah sebagai berikut:

Hal ini menunjukkan bahwa kedua

kandidat vaksin diatas secara philogenitik dekat

dengan virus yang mempunyai cakupan luas yaitu

A/chicken/West Java/TASIKSOL/ 2006 sehingga

dapat disimpulkan bahwa kedua kandidat vaksin

diatas juga mempunyai ikatan antigen dengan

cakupan yang luas yang merupakan salah satu

persyaratan kandidat vaksin (Dharmawan, dan

Wahyuningsih, 2010).

Antigenitas

Sesuai dengan hasil carthography antisera

(Workshop OFFLU & AAHL,2009) yang kemudian

ditetapkan menjadi aturan pemerintah, Seed Vaksin

AI harus melalui uji tantang Haemaglutination

Inhibition dengan panel antisera yang telah

ditetapkan (dengan titer >4):

Anti-A/chicken/WestJava/SMI- Hamid / 2006

Anti-A/chicken/KonaweSelatan/ BBVM2004/2007

(detail terlampir):

Tabel.....keterangan tabel ?

Anti-A/chicken/WestJava/Tasiksol/ 2006

Anti-A/chicken/Indonesia/Wates1/ 2005 (Positif

control hiperimun sera clade 2.1.3)

Hasilnya harus positif terhadap antisera

hiperimun yaitu no. 4 serta memiliki cakupan cukup

luas dengan menilai reaksi uji antisera dengan 3

antisera lainnya (no.1,2,3) . Hasil penelitian sebagai

berikut:

Kesimpulan

Antigen virus H5N1 asal ayam Buras asal

Djombang yang diteliti dapat dipergunakan sebagai

seed vaksin H5N1 khususnya yang masuk clade

2.1.3 namun antigen virus H5N1 asal ayam Buras

Pare yang diteliti lebih baik sebagai seed vaksin

H5N1 karena mempunyai cakupan yang lebih luas.

Daftar Pustaka

Barbara LTK. 2008. Avian Influenza Survellance in

Migratory, Resident and Captive Birds in

Java. Lokakarya Nasional Penyusunan

Strategi dan Pedoman Surveiland Avian

Influenza pada Burung Liar, Bogor 14-16

April 2008

Beard CW. 2003. Avian Influenza (Fowl Plaque).

Shouthest Poultry Research Laboratory,

Athens, GA.

Chen H, G. Deng, Z. Li, G. Tiam, Y. Li, P. Jiao, L.

Zhang, Z. Liu, R.G. Webster, and K. Yu.

2004. The evolution of H5N1 influenza

viruses in ducks in Southern China.

Microbiology 101 : 10451-10457.

Dharmawan, R. dan Wahyuningsih, S. 2010.

Penelusuran Perkembangan Virus Avian

Influenza Dengan Metode Antigenic

Cartography, Prosiding Rapat Teknis dan

Pertemuan Ilmiah Kesehatan Hewan Tahun

2010 di Balai Besar Veteriner Wates.

Ernawati, R., A.P.Rahardjo, N.Sianita, j. Rahmahani,

F.A. Rantam, san Suwarno,. 2008, Petunjuk

Praktikum Pemeriksaan Virologik dan

Serologik, Laboratorium Virologi dan

Imunologi, Departemen Mikrobiologi

Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan,

Universitas Airlangga.

Fouchier, R.A.M., V. Munster, A. Wallenstens, T.M.

Bestebroer, S. Hersfst, D. Smith, G.F.

Rimmelzwaan, B. Olsen, and A.D.M.E.

Osterhaus. 2005. Characterization of novel

influenza A virus hemagglutinin subtype

(H16) obtained black-headed gulls. J Virol

79 (5) : 2814-2822.

Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan Vol. 4, No. 1, Februari 2011

Sequences producing significant alignments:

DescriptionMax Total Query E Max

score score coverage value ident

AJP3_Full 2519 2519 97% 0.0 95%

Sequences producing significant alignments:

DescriptionMax Total Query E Max

score score coverage value ident

AJP2_Full 2662 2662 92% 0.0 96%

AJP3_Full 2728 2728 91% 0.0 98%

23

Haryanto, A., M.Purwaningrum, R. Ermawati, K.

Putri, M.H.Wibowo dan C.R., Tabbu 2009.

Studi Penentuan Tipe dan Subtype Virus

Avian Influenza dengan Metode Single

Step Multiplex Reverse Transcriptase Chain

Reaction (RT-PCR). Media Kedokteran

Hewan. Vol.25. No. 1. Januari 2009.

Hasan, M.Z. 2009. Kebijakan Nasional Pengendalian

Penyakit Avian Influenza (Flu Burung) di

Indonesia. Surabaya 21 Januari 2009.

Horimoto, T, and Y. Kawaoka. 2001. Pandemic threat

posed by avian influenza A viruses. Clin

Microbiol Rev. 14 : 129-149.

Jones, Y.L. and D.E. Swayne, 2003. Comparative

P a t h o b i o l o g y o f l o w a n d H i g h

Pathogenecity H7N3 Chilean Avian

Influenza Virus in Chicken. Avian Disease.

48;119-128

Kawaoka, Y. 2009. Avian Influenza In Indonesia

Control, Prevention and Surveillance.

Surabaya, 19 Maret 2009.

Lipatov, A. S., E.A. Govorkova, R.J. Webby, H.

Ozaki, M. Peiris, Y. Guan, L. Poon, and

R.G. Webster. 2004.Influenza : emergence

and control. J Virol 78 : 8951-8959.

Nidom, C.2009. International Symposium. Avian

Influenza In Indonesia Control, Prevention

and Surveillance, Surabaya 19 Maret 2009

Moerad, B. 2004. Kebijakan Pemerintah dan

Penanggulangan Wabah Avian InfluenzaDi

Indonesia. Disampaikan dalam seminar

Menyingkapi Dampak Avian Influenza

Tanggal 14 Februari 2004. Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

OIE. 2009. Highly pathogenic avian influenza. World

Organ iza t ion fo r An ima l Hea l th .

http://www.oie.int/

Poetranto, E. D. 2005, Deteksi Antibodi Avian

Influenza subtype H5 Pada Burung Air Liar

di Pantai Tempat Persinggahan Burung

Migran. Seminar Nasional Dies Natalis

Fakultas Kedokteran Hewan Universitas

Airlangga, Surabaya 15-16 April 2005

Rantam, F.A., 2009. Tehnik Pemeriksaan Imunologi.,

Seminar sehari, Surabaya, 11 Juli 2009

Rantam, F.A., 2005. Virologi, Airlangga University

Press

Rantam, F. A., E. D. Poetranto., A.P.Rahardjo,

Suwarno., N.Sianita, N. R.Ernawati dan J.

Rahmahani. 2007. Kajian Burung Migrasi

Sebagai Sumber Penularan Terhadap

Pencegahan Penyebaran Wabah Flu

Burung. Penelitian Kerjasama Dinas

Peternakan Propinsi Jawa Timur dengan

Lembaga Penelitian dan Pengabdian

Kepada Masyarakat Universitas Airlangga.

Susanti, R, D.S. Retno, I.G.N. Mahardika, I.W.T.

Wibawan dan M.T.Suhartono. 2009. Isolasi

dan Indentifikasi Virus Avian Influenza

Subtipe H5N1 pada Unggas Air Sehat di

Peternakan Skala Rumah Tangga di Jawa

Barat, Media Kedokteran Hewan Vol. 24

No.3, September 2009

Suwarno, Karakteristik Protein N1 Virus Avian

Influenza A/Ck/Bl/Indonesia/2003 sebagai

Antigen Diagnostik pada ELISA Tak

Langsung, Media Kedokteran Hewan Vol.

24. No. 3, September 2009

Steven J., O.Blixt, I.A.Paulson and. IA., Wilson.

Structure and Receptor Specifty Avian Flu

Antigen, ALS News Vol.278, July 25 2007

Ta b b u , C . R . 2 0 0 0 . P e n y a k i t Ay a m d a n

Penanggulangannya Penyakit Bakterial,

Mikal Dan Viral. Yogyakarta; Kanisius,

238-243

WHO. 2009. Pandemic (H1N1) 2009 – update 59. 28

Juli 2009. World Organization for Animal

Health. http://www.who.int/

Wijayanti S. P. M., Karakteristik Molekuler Tapak

perlekatan Reseptor (Receptor binding site)

Virus Avian Influenza H5N1 Isolat burung

Puyuh asal Demak dan Ayam Kampung

asal Purworejo, Thesis S2 Pasca Sarjana

UGM 2007.

You L., C. Kortenweg and W.H.J.Gu. Avian

Influenza Receptor Expression in H5N1

Infected and non Infected Human Tissue,

the Faseb Journal 22: 733-740. 2008.

Kandidat Vaksin Flu ......

24