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Tipps und Tricks zur schnellen LC
Sebastian KraheProduktspezialist LCAgilent Technologies Deutschland & Österreich
LC Forum, Mai 2011
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Agilent 1290 Infinity
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1290 Pumpe
• Binäre Pumpe mit zwei Pumpenköpfen pro Eluent
• Eluentschaltventil für 4 Eluenten
• Eingebauter Degasser• Eingebauter Degasser
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1290 Pumpe - Pflege
• Pause am Wochenende schwierig für jedePumpe
• Vorsicht bei Puffern
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1290 Pumpe - Was ist Prime und Purge??
• Volumen des Degasers:
• => 1,5 mL
• Volumen des Leitungen:
• => 10 mL
• Nach dem Wochenende PURGE:• Nach dem Wochenende PURGE:
• => Spülen der Pumpe unter definierten Fluss, Komposition und Zeitfenster
• PRIME: für schnellen und rapiden Fluss zum Spülen der Pumpe
• Gut gegen Luftblasen in den Leitungen, da maximaler Fluss aller Motoren der Pumpe eingestellt wird
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1290 Pumpe – noch besser als Purge und Prime
• Geringer Fluss für Nacht und Wochenende einstellen, z.B. 10 µL/min
• Eventuelle Schwebeteilchen setzen sich nicht ab
• Pumpenventile bleiben in Bewegung
• Eluent Recykler einsetzen• Eluent Recykler einsetzen
• Isokratischer Fluss im Kreislauf
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1290 Pumpe – Eluenten und Puffer
• Partikel und Bakterien stören das System, daher
• => Wasser filtrieren.
• Puffer mit filtrierten Wasser ansetzen und
• => nochmal filtrieren.
• Organische Lösemittel benötigen i.d.R. keine Filtration
• Aktive Hinterkolbenspülung verhindert, dass Salzkristalle beim Pumpenstillstand sich auf die Kolbenoberflächen legen.
• Was passiert mit Kapillaren, der Detektorzelle, den Säulen?
• Besser: Puffer bei kurzer Systemstilllegung entfernen!
• => Bei TCC mit Ventil: Säule auskoppeln und System über Restriktorkapillare spülen
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Anschlüsse Ventile und Degasser
•Drehmomentschlüssel verwenden
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1290 Infinity Autosampler
•Spülvials – Regelmässig Spülmittel tauschen
•Vial ohne Septum einstellen
•Bei viskosen Probe – Draw Speed und Equilibration Time anpassen – langsamer aufziehen und länger equilibrieren
•Flush Port – Nadelaussenseite wird nach Aufziehen der Probe •Flush Port – Nadelaussenseite wird nach Aufziehen der Probe gespült in a) Spülvial b) Flush port
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Injektionsprinzip: 1) vor Injektion
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2) Probe aufziehen – Ventil auf Bypass geschaltet
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3) Nadelaussenseite spülen
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4) Nadel in Flussweg
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5) Probe injiziert – Fluss auf Mainpass
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Beschleunigung durch Überbrückung
•Nach der Injektion schaltet nach der Injektion auf Bypass –Gradient umgeht den Autosampler
⇒Einstellung über Aktivierung der Automatic Delay Volume Reduction und Sample Flush out Factor
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Overlapped Injection
•Vor Start des neuen Laufes wird die Probe aufgezogen
•Injektion startet durch Umlegen des Ventils sofort
•Zeitgewinn
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Sandwish Injektion
•Problem: schlechte Injektionspräzision
•Eluent wässrig
•Probe in Aceton
•=> Probe hängt an Nadelspitze und verdampft
•Reihenfolge beachten:
•Erst Probe, dann Eluent (dann Luftblase)
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1290 Infinity Inline Filter
Designed for low carryoverDirect connection to the injection valve or the column1200-bar compatibilityDead volume 1.3ulFilter 0.3umRigid or flexible capillaries
Group/Presentation TitleAgilent Restricted
Month ##, 200XPage 18
1290 Infinity Inline Filter (0.3um) 5067-4638
1 Filter cap Non orderable
2 Filter housing Non orderable
3 Fitting insert Non orderable
4 SST capillary rigid 5067-4637
5 SST capillary flexible 5067-4636
6 Filter frits (0.3um) 5023-0271 (5/pk)
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TCC - Säulenofen
•Säulenofen mit zwei Heizzonen und mehreren Heatexchanger (6 µL, 3 µL, 1.6 µL)
•Temperiert bis zu 100°C
•Herausforderung: Temperaturgradient zwischen TCC und Detektor sorgt für unruhige BasislinieDetektor sorgt für unruhige Basislinie
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Lösung
Verwendung der zweiten Heizzone zum Kühlen!
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Edelstahl oder Polymer-Fittings für Agilent Säulen
• Edelstahl ist die beste Wahl(SS) für einezuverlässige Hochdruckdichtung> Agilent benutzt Swagelok Typ Fittings 1/16” mit front and
back ferrules in Edelstahl – erzielt besteVerbindungsergebinsse – für verschiedene LC-Systeme
• PEEK (< 400 bar Systemdruck) ist ideal wenn> Wenn häufig Verbindungen geändert werden
> Fingerfest, kein Werkzeug notwendig
May 30, 2011Confidentiality Label
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> Fingerfest, kein Werkzeug notwendig
• Edelstahl Fitting mit Back Ferrule Edelstahl und Front Ferule PEEK
> wiederverwendbar
> Verwendbar bis 1380 bar p/n 5067-4733
> Für Standard 1.6 mm (1/16”) Edelstahlrohr
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