中間発表 Takada
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分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分 分分 分分 分 （） （ 16619016 ） Fig.2 CPE 分分分 分分分分分分分分 体 CPE 分分分分分 CPE 分分分分 & Cs 分分分分 Soaking Fig.1 CPE 分分分分分分分分分分分 Cs 分分分分分分 分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分 、、 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分 。、 SPring- 8 BL41XU 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分 。、 分分分分分分分分分分分分分分分分。 分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分 分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 、、、。 分分分分分分分分分分分（ Clostridium perfringens enterotoxin : CPE 分 分分分分CPE 分 分分分分 、 319 分分、 分分分分 35 kDa 分分分分分分分、 N 分分分分分分分分分分分 C 分分分分分分分 分分分分分分分分分CPE 分分分分分 分分分分 分分分分 体、 分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分 分分分分分分分分分分 分分分 分分分分分 分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分 、体。体２、 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 、。 CPE 分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分、 4 ℃ 分分分体、 37 ℃ 分分分 分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 体、 分分分分分分分分 分分分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 。、 Glu94 分 Glu110 分 Asp 分 Gly 分分分分分分分体、 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 Asp48 分 Ala 分分分分分分分分分分 分分分分分 分分分分分 体、体 CPE 分分分分分分分 分分分分分分分 分分分 、体 CPE 分分分分分分分分分分分分分 X 分分分分分分分分分 XAFS (X 分分分分分分分 ) 分分分分分分 分分分分分分 、 分分分分分分分分分分分分分分分分分。 nickel-NTA Affinity column chromatography 分分 分分分 (37℃ 、 20hr) 分分分 (OD 600 =0.6 、 1 mM IPTG 、 25℃ 、 18hr) 分分 分分 、 D48A- E94D 分分分分分分分 CPE 分分 分 体 12 mg/ml 分分分分 分分分分分分分分分分分分分分分分 295K 分 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分 分分分分分分分 0.1 M CsCl 分分分分分分分分分分 分分分分分分分 O/N(over night) 分分分分分分 E94D 分分分分分 (E94D,E110D) 0.1M HEPES pH7.0 15% PEG4000 E110D 分分分分分 0.1M Sodium acetate 0.1M HEPES pH7.5 12% PEG4000 D48A 分分分分分 (D48A) 0.1M Sodium acetate 0.1M HEPES pH7.5 12% PEG4000 E94D Fig.5 XAFS 分分分分分 (CPE-E94D) Cs 分分分分分分分分分分分分分分 CPE-E94D( 分分分分分分 ) 分分分分 分分分分分分分分分分分 、 分分分分、 XAFS 分分分分分分分分分分分分 Cs 分分分分分分分分 分分 edge 分分分分 peak 分 remote 分分分分分分分分分分 分分分分、 peak 分分分分分分分分分分分分分分分、 remote 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分Cs 分 分分分分分分。 CPE-E110D( 分分分分分分 ) 分分分分分 Cs 分分分分分分分分分分分分分分分 E94D 分分分分分分 Cs 分分分分分 分分分分分分分分分 分分分 。 Cs 分分分分分分分分分分分 CPE- E94D 分分分分分分分分分分分分分 分分、分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分 体、 分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分分。 Results & Discussion Manufacture of a new cesium ion scavenger using a toxin having molecular switch ability Fig.3 CPE-D48A-E94D 分 Native- PAGE Metho d Introduct ion Conclusi on Acknowledgme nt 66 24 2 48 0 72 0 14 6 MW (kDa ) Asp9 4 Asp9 4 Cs (K 吸吸吸 0.3445 Å) Glu110 Asp9 4 Glu11 0 Glu110 Glu110 Glu110 Glu110 Glu110 Glu11 0 Glu11 0 Fig.4 分分分分分分分分体 CPE 分分分 Fig.6 分分 分分分分分分分分 体 (CPE-E94D) Fig.7 peak 分 分分分分分分分分分分分 分分分分分分分分分分分 Fig.8 remote 分 C s
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Clostridium perfringens enterotoxin E110D Purification and crystallization of Clostridium perfringens enterotoxin mutant E110D
16619016
Fig.2 CPE
CPE
CPE&CsSoaking
Fig.1 CPECs
SPring-8 BL41XU
Clostridium perfringens enterotoxin : CPECPE31935 kDaNCCPECPE4 37 Glu94Glu110AspGlyAsp48AlaCPECPEXXAFS (X)nickel-NTA Affinity column chromatography (3720hr)(OD600=0.61 mM IPTG2518hr)
D48A-E94D
CPE12 mg/ml 295K
0.1 M CsClO/N(over night)
E94D
(E94D,E110D)0.1M HEPES pH7.015% PEG4000E110D
0.1M Sodium acetate0.1M HEPES pH7.512% PEG4000D48A
(D48A)0.1M Sodium acetate0.1M HEPES pH7.512% PEG4000E94DFig.5 XAFS(CPE-E94D)CsCPE-E94D()XAFSCsedgepeakremotepeakremoteCsCPE-E110D()CsE94DCsCsCPE-E94D
Results & DiscussionManufacture of a new cesium ion scavenger using a toxin having molecular switch ability
Fig.3 CPE-D48A-E94DNative-PAGE
MethodIntroduction
ConclusionAcknowledgment66242480720146MW(kDa)Asp94Asp94Cs (K0.3445 ) Glu110Asp94Glu110Glu110Glu110Glu110Glu110Glu110Glu110Glu110
Fig.4 CPEFig.6(CPE-E94D) Fig.7 peakFig.8 remote
Cs
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