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实验九 PCR 扩增检测转基因大豆、玉米. 【 实验目的 】 通过 PCR 扩增方法检测市场常见大豆、玉米产品是否含有转基因成分 培养学生的实验设计能力和创新能力. 【 实验原理 】. 以大豆特异性内源基因大豆凝集素 (Lectin) 基因或者玉米特异性内源基因 IVR 为内参, 花椰菜花叶病毒 35S 启动子 (CaMV35S 启动子 ) 、农杆菌胭脂碱合成酶终止子 (NOS 终止子 ) 及外源基因 5- 烯醇丙酮 - 莽草酸 -3- 磷酸合酶 (CP4-EPSPS) 基因为靶基因检测大豆和玉米中的转基因成分。. - PowerPoint PPT Presentation

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  • PCR

    PCR

  • (Lectin)IVR 35S(CaMV35S)(NOS)5---3-(CP4-EPSPS)

  • DNA --CTAB 0.1g1000L CTAB1.5mL EpEP4L RNaseA653~530min12000r/min10minEp(24: 1)()5min12000r/min10min ()Ep()CTAB1h15000 r/min10min400L 1.2mol/L5615minEP800L -20-201h15000 r/min10min75%4

  • DNA5L95L BiophotometerDNADNAODOD260nm/OD280nmDNA1.7~2.0PCR

  • (Polymerase Chain Reaction, PCR)DNADNA : (Denature) (Anneal)(Extension)DNADNA2535DNA106

  • Taq DNA polymerase 10mMdNTP1mol/L PCR ddH2O

  • PCR PCR

  • PCR

  • 1. 0.2 mL Eppendorff50 L

  • PCR

  • PCR

  • 2. PCR: 1 94 3 min 2 94 1 min 3 54 ( 56 ) 45 sec 4 72 1 min 5 2~4, 29 6 72 10 min 7 End.

  • 3. PCR

    0.8PCR5L1L120V20~30min

  • (CaMV35S) (NOS) (Lectin) ( EPSPS) 12M 1 2 3 4 5 6 7M 1 2 3 4 5 6 7M 1 2 3 4 5 6 71 2 3 4 5 6 7 M1 2 3~7

  • PCR1 2 3

    PCR1 2 3 Taq4 PCR

  • 1 DNAPCR2

  • PCR

  • 1PCR2(Lectin)IVR