ˆ˛ # ˚ ˜ˆ · " ˘ ˇˆ ˙ ˝˛˚˜ ˘ ˇ! 6 5 6’ 7 ˜+ " ˛ " # ˆ 34 ˙ ˛ " ’ ˜˚ ˛!...
Transcript of ˆ˛ # ˚ ˜ˆ · " ˘ ˇˆ ˙ ˝˛˚˜ ˘ ˇ! 6 5 6’ 7 ˜+ " ˛ " # ˆ 34 ˙ ˛ " ’ ˜˚ ˛!...
���
������������ ��������������������������� ������!"��#�$%&'$()��$*+"��
��
��
��
��
��
��
��
��
�������������� ������������������������������������ ������ ��������������
�������� �������� �!������"���#�$%&'� ��������� ������������������������*�� ������ ! �"�#������$�%��
��������
��������������������� ������������������������������ ����� �����!"�#$�%��&��&�'�������(�����'�&'�������'��"�)������*+�'�����&)(!�'��&�,"-�'�.'�/���0�1�2�3�4���� ���������5�'���� �,�6�����'�����7���'�&'�!"�#$���89 ������ ������&���-��
�����&'�3 �::��������������� ������"�,"�!���.'���;�'�����������<������3�'���%'�,�������������%*��,�������)1��&�%����<���=)��>?@A�B,�����C���"�;��-��;<���*�������8�� �D������E��������F������;<��!��G�H��I��-�+J����'&�!<��������K'�)J�
������������!L M�NMIC�O��8�� D�������&���*"'����9��P+���������Q)��E-test�����);�E)("'��-�� �)������)�������D���8)�� �� ���)���� ����� ���*�������!��"��*��'�R�����<�Scanning����!��G��'�K��3�4��&�����-�,�6��&�������8�� ��D������)�� K�7�)�<������&��)��%
�������� ��������������������� <�;�-��� �����������.'������!"�#$����6*9��&'��'�%������3�'������ ������������������,%*������ S�'�<����T���#;��������N���*+)����������)�<�O�TU:�V��%.��WX�V��"&���&���-�������'&<�X@���XA���=�����*��2���3�'���&'�3 �����������N?@/YYOV��������)���)��'&<�Z@���ZA���=)��
�*,���3�'���&'�3 �2��������N?[WAOV���������� ���������� ���ZY�VNU@ (n=�'���)��7��)������)� �����)��*���2��)��'&� �� µg/mL) MIC ?X���>ZO�!9+"�'��*"C���<��� ��P��*#����%�+�WZV�)W>\�(n��*,��2µg/mL) MICW]�>O�#�C� �����'�����)�
��*;'&�-�� �������������&�� :[ZV�NZn=O��'�.'����7���#���<����J��&�&���<�����>YV�)>U\(n����"C������K�� ������*;'&�NAU[AP<O�-�)����<��,�6��&����������&��������'�������'����&'&�%�"���;����7����7���>@�TXW���:Y����������K�� �5,���*;'&�<'�'&�����,)�6��P���
���� ��%.����%+�<������"&���̂ �����X@����������K�� ��!;'&��,�6���"�5_���&'�"�%�"�'��-����� ��������'��`�'�����7��������;�'������ ������'��&����3�4��2��̂ ��!��a��<��"���*"C����!9+<��� ��)�P���)��'���)���'�)��b����%)��&�
!"�#$����'�����2���F������*;'&�'�����<��&��c��&'�3 ���"'� �<���� ������������K�� �����*;'&�'���-�,�6���3�4�����'������2����)��%�)"����&'&�S3��8a�<.'��'�'�2����7�'�'&��,�6�����"&������_,��^��!��a��2<����'&���d����'�������1���*;'&�%�7,-�������������������� ���T��'&�!��a��<�T����!L M��K'�J��G����<�(MIC) T������� T,�6������
��$'� ������,-�.�������/����0����-�.�������1��0����-�.������/��������23�������4��� ������������� �����4����"'��4�����������41�����0��4���4-�.������4���/��4�����
��23������� ������������� ��������*'��������-5��6���-�.���78�� 9�:�;�������<�-�
�&'()*��+� *��,���-,(�.�/��0*1�2��$3�[email protected]� � /�!��0"����3��454�%6�����������������+���78��� /�!��0"����3���464�%6�������������� /�!��9��:13�$*=$>=$*+$�
;�(<1�=/�!����
������������ ��������������� ������������� ���!�"��
��>
���������� �������*���P��!I����e 1������)f�<������) ��.'�
91�3<����!�'�%+"'�D�'�G��5*�&�����������gh���FC��&���7)�"���!��<�&�;�-'�)���2�����"G�'�)����+������)��&����H��)I��&�
�5*�&��'�&'�T��h.���T����������<����)9 ��"'� ������%i� )���)���&�;-��*������ ���������j^�),3�������'�&'�!)"�#$�k)$��������� � ��l��������<�&�;NXT>-O��
��"�G��������5������ ������������ ����Tm��'�� �����m�������� �����%i� �������!)I�����������*+)�%+)"'�e) 1�-
���;���� �������G��%i� ����<��'����$����!���+)������!"�#$�.'���)�����'&'��5*)�&������)��%+)"'�<����);��-��)���*�
�������������� �����)��'�� ���m��)���&��������)3���&'�)�'�2���)�n�C<���� �2����n+�#����������+)J�2�)�<����);��-����)� ���
�5�����'����m���2*"C<���� ��P����"��+)J��)�!+�-��'�)��)��2�'�T&�����"G�'�2���T�+j^�,3����&'�)�'��� ���������o)c��.'��)��'��
���$�&��*+<�3p��������'�)K�/�)�&��)����*+�q�)�<���)&�NWT?O-���&��J>A��� �>U��l����I�&����� ������l������<�
����������*+����&� K��<��������7)"C��,$��r'��&��'�&'�%�;�������'��.C�N�����"��C��)��'�����'����)���&���g���+)�'������2��)�7( �)���
�<�����O�������&�����)� ����� ��������*�)���)5����)���&�)�����<�C���N�ZTUO-��
��_,���� ������.��&�2��5*+����c���4<�� �)#*��<��.'�9K����5"��&������*�����������!)9K'�����)��������H�)��.'�&���%*��,������!��<�&�;�-�c���&����8��M�%*��,�)���91��)3<�"����*������!+������#���E�G�<����������&��)���!)�����&���
����%&�sf�������%'�,%����������%*��,"� �����"�);��7��������!"�#$����'�H��I���'��&����!,+K�2�����&������<�C�)���-��)�
'���G�T&����2�"����������!)"�#$��)�$� �,$���� �������)����"*��,<"�F�+c��,<��"�;N�:TYO-��
����))� ���))��'�� �m�&))(�'�=�t+))���@A��))I�&�!"�#$�������.'�<;"��� ����<�����;�������<�����%'�)�$�����"'�
��!"�#$�P��G��,���&�;�F�+c����-���)5������ �����m��������� ���������G&)�����<��������&�&'�)�'�.'���%*)��,���)����
�����"̂ �)1�!)9K'�����2��'<�������.'���H�)����������)��6*)9��%'�),
���,�������*n����"��&J<�,��<��)���'&�'�����)���$)�&��*+<�3p��Tq�'���<��;"�N�@O-��
!"�#$�����);"�<�.'�������)� ����)��'�� �m�����&�e) M'�����*+��%'�,������&����%*��,�����"C�������"���������);��)I��
��!�'&������<�&�;�-'����!"�#$�2�j^�),3���)�� ���( �8�)��H'7�;7�<�� ,��.'��"��T�.��F�1����"���̂ �)9��7 N�+)�t=��
u��*�'OT���3��v�*�&��������N��h.�!"�#$O������������)a*����,�<���&�;N>>T>A-O��&�3*��H3�4����&���.����� ���������������&��
�))����))���q)) *f���"*))��,<&�'&�&�))�����))� ����� �N�>W]>X�-O'�����%�"�H3�4��2�<�������m�������&����)� �
��'�����&K����&(��������� ����) ��0�4��<���%�*)��'�T������m)� ^��� ����_,���%�������2�����0�4���i����)������!)����)�"��P
���T����_,����"`�������h.�2�<��;�-�'����2���F����������&��)����H��I�����������w�h�� ����m�����!)�'���;�'�-���H)3�4���D�'7G����.��&��*�������������������)���&'&�%�)"���� �����&�� �
��*���=i6����,���va"�<��'��&�����&(������������� ����0�4)������.������<������N>U�-O��'������*�"����� ������������)������
'���*���2�������f ��r'�.'�'��&�h��9<�*"C<���� ��P��)���%�x)���<�,"���-j^�,3������������� �����������������������)��!)��a���
��'&��&�3*���������%�"�&�h�.'�'���<���&�-�_,�����) �2����������&�� ���'��h.�!"�#$��������e9)����)� ����8�� ���;�&(
���*"C�����"C�!��a�<�*n��P���� ����������;�2������)��P),��'���*"'���*���2�����������)h.�y�+)"��&��)�<���)��-��)�_,��2
���������� �������������������� va"�,���<���!)"�#$��&����)����"*��,<���'&���d����E�a��<��'���� ���.�1��)�'�z��=)a*"
�������"�'&���'&����!��a��%iN>Z�-O�������*�������<"*��,������� ���T�������*+�� ������&(�'�����&K��-����<)���� ����������
�������*�)��2)�'��'�)��m"̂ ��������*���2��*,���.'��)�<��F�+c��&�;�N>:T>Y-O
��������������);��)��� �� ���)�������.��&�<��"'�H3�4��%'��'��&������8�� �����������*��G�H��I���� �!�'�-����)��������
%'��,��<*"C�!�Ih�T����������)�"����)�����&'���.'�<S3��� �������x$������������� ��'.���i��QC��"���&�������'��<�G��
������"&'&��'�K��3�4��&����� ����������������������)���"�);��)��*��
�#$��%&��#��'()�%�#�*��+�,-!��.��� ����////� �0��������*�!�#��%�� ��
��5
�������)a"�H'�)*�"�.'�rt���&#*�'T� '���) ��&�2���)�C�2�� �'�* �)���*�'�P��'����EDTA����������k)$��&�'�)��<S3���&���qK� �k$�
���+))�"G�'������2))�'�8))�� �� ���))�������)) �v))�<��&&�G�N>@O-��
����9$�����,c��������������)��z)�ac ��WX�����<���)���)"�,"��������%*)��,���.'���);��*��G��'.���i��QC��"���&�+����)��
�����������������);�06)I'��*� �������!� ��D���.'��&#*�'���%'�� �<�����������3�4�T��"�������7�'�����"&'&�%���)���<)��������
���������������)���);�!)�r�����*+)�� ���)����)��� �����&K���X>W������������ ���)����)��� �%'7)���2��*������'.���i��QC��"���&�+�
�������*�)������"�F{����)��&�'&������<���)��������)3�4���&������&���wf���<��h�NXAO-���&'&����f*�'<����.)�'������WU�
���"�,"MRSA�������Q��'�/*�'�������������)3�4��&��)��'���"C�� ��"&'&��'�K��������"�;����*��U?�V��"�,"�.'��������� ��)��u����)���
������� �)�<����%i��)�J��)"&��(Intracellular Adhesion) ICA��"&���NX>O-����.'�/����3�4����pJ����<��� ��)������)��������� �5�'��,�6������'�����7�����������!)"�#$�)��89 �)����� �����'�&'��&���-����
�������������� !�����"�#���$�%&'�������(����)�� �������*���!��
'��&))���))3�4��2))34a�<))��( ���<�T�&'�))3 ::��))"�,"���������)"�,"�!�)��.'���;�'������ ������)����)����<������%'�),
�3�'�����������N�*+����������<�O�����%*)��,������)���#);�T� S�'<�����T�����%������������������� �.'>?@A������)��� �!)�|��
>?@>�B,����C��;�����-"�,"�����'�&'����������)���'�&'�8)���.'����'�a�>A���� <����*���*�'�/����&����'�&'����B,����C���;��-
,_����"�,"�2������������* )��.'���;�'������)h.�����P),��)����*�'�F'��������U���� <�����)*��)c���8���*)�'�����H��n+)"'�
��&�G��a*���H'��*�'��������.'��3�>��� �X����.C����!$����5�������F���;<�����);7������)"'&�<���.C����)��5����=�)*��
��#<�������&�G��)a*���%����%�h�=a*"'�%�.������)"�-���'�)���"�,"�!������'�&'��T�>[A�< �������������)���)"�,"��)�.'��'�&'��*��
�������������<�")��P)��!�)��8�)c��������*�'�l"���.'��&#*�'
��������mn������&�G�}�a �P�~����*�'������)c��}4)���&����8��������������&�G�vf��!���H�XW���� )���"'��&�!$��?Y�
��'��5"����&���"�;��-��K'�*�'�w�f� �!��<�v��.C����)����&�'�"*�'������<�����!+) ���;�.'����'T�������&��);��<)����
�!���8�c��TSI��������� �T.G����� �TH2ST�SIM����<)������'�����!��J!+ ����MR��VPT�<�������!+) ���l����'��
=��"'��N'����'����.�������"�G���'�� ���m���)5���.'�mO��)��������<� ����;�'�����&�G�E("'���-��
�, <�'�����7������� �����)��;<�������&���);��)c���8� �*n�����.������'���NTSB�O���WA��=��+� G��I�&��a �����}�&�=_f��XA��.C�E("'�!���H��3����h��"�;����-��
��
��++���,��-.�/�01��2��)��(���
+"n�������%���)����<��'�.'����)��7���)������)����)� ����"�H������ �������P��������XAA����������!)L M�.'��)*
CFU/mL >A: x>�*�����������c���8!����������%�*��
�*�'��GC���NOxoid- Hi mediaO��&'&��'�K��;����)����)��P��*�'�F'�������c��}4��E, ��&�������"�;�vf��!���8�-�m�
�a �.'�}T� ���!������H������>U�K&�����&��&��a���"�u '���'�)�5�����+"n����!��1�� ��"�;����%������<��� ��}4���&���f9 �!���
&�;-��'�"����test-E���� �����h'&��&����!��G��'�K�!�-���.'��)3���'�"�2*;'{G�E-test������&��������*"'�����B*"C<���� ��P��)�T
�������������"�G���.'<����� ��}4���&��'�"���G� ��!�����;��-� ��mn��!�������H������'��XW������&�!$)���)�&��?U����)��&�
*"�<��������)K6 ��)c��&�$���&'&��'�K�&'�G<�����������)���'�)"�)���)�%'��$MIC�����;��*��G��L"��&�-����.'��������)� ����&�'�"*)�'��
ATCC 29906���=�*���%'��$����#<���);��&#*)�'��-��)��%'7�+J���!����������)I� ��)�'��)����)� ����!��a�������)��� �CLSI�(Clinical and Laboratory Standards Institute)�)�����<�
�;�NXXO�-.'��)*"C<���� ��)�P��)�������+)�� ���n���2NCfOT��*���+���2NGmO�T����.#)����2NCZOT��+)� �#�����NCEO�T��"��+���2NKOT��C���)�����2NAKOT��*#������%�+)�NCIO����
�#�C� �����NC�O'��&�ac �2��;��&#*�'�z-����
������������������������� �� ����!����� ��������"��
��6
�����" '������� ����3�4���"�#����"����+�5 6'��7���
����~���P�� ��.'<���������)c���)����)� ��������!�)��8� �*n<�����.�������GC�(TSA)��J���>[A���)I�&����7��) G�
���&�G��a*�����&��C�?Y����H������XW�����);�����"'�!$���-�.'� �<����;�����*�����)c���)�����*);'&���~���P��8TSB
�J����������"�F{����a*���7�� G��I�&�P�����=&)3��>[A�������y�)��=�1��&��I�&nmZUA�)L� ����)�&�G���-�)���mn>AA�
����������"�,"�.'��*����������^��Z��.'�)��P)d�� ���&��)��!�� �������*N�'���'7Reader�O'�'&��������@Z�� ��Pd�<���%�*)�'�
�;���p'�-�_,�2�c��.'��8TSB ��� �N��%����F����O���)���#����;�%'��$<���Pd�!���&����;��&#*�'�-����.'�m)�XW�
���'{)G��G�!$������&�?Y����*")���)��&�<��&'�)GT���)*c����Pd�����'�C����<�n�'�����������)��)������>[A���^�)�����H#+)�
�*�����N'�"� �7�P(����������E����7�i������*�'��������U[YpH-���"�;��*+;-���mn�>UA��������������)��)��w�)h�=�")*���*
�������!� ������&�G���p'�Pd�� ������*����H�����>A�K&����a��&��&����9` �!���u '���=� ��!����������'�����q������x*��
d����������n�'�.'�m���3��� J����&����;��&'&��'�K�P����=�")*��������Pd���.'XAA��������������*����=*+������)����)I�&�P
�������p'��"C�������H�����XA�K&�����G��a��'{G���"�;��- ��)��!����'�C<���������l"����p'�/{J�!���C�;�F������);��*+);������
������'��H��(���&�%�;�P�h�.'��3�T��������)��P)d��)�>ZA����������'��*��*�'�����6G�P���=??�������)�����;�s� f���I�&�
�y�))��=�))1UYA�'�8))�� ��*��"))"�))���'7))����N�)) '�v]TecanO�����;���"'�h�Pd���F{��-'�������)�.C�!)�'��<��
�.C���v?�����&�G��'�� ����-���������b�)*"�%�);�wf�)���'�)��'�)*�'�� ������OD CUT OFF���=�)����z)91����9)�c����)��
+# �� ������b�*"��.���"�;��NX?-O
ODc = Ø OD negative control + 3 x SD negative control��OD = Ø OD tested strain – ODc��
OD � ODc�nO Producing Biofilm��ODc < OD � 2 x ODc�weakly biofilm��
2 x ODc < OD � 4 x ODc��Moderately biofilm
4 x ODC < OD��strongly biofilm
ODc = OD cut off
OD = Optical density
� = average OD����
�����8&'����0�� ���9� '�4����� 8"��:8���8��; SEM�<��
�'���������7������ ������������������ ����8)�� ���� ����� ���PSEM����.�D�����'�������&�G�E("'�����-����)���)����
���� ������� ��������������K�� ���<��������);��'�),�����"&��#��<����Ff*"'����.C��������5���������)"��*��'�R<�SEM�
���&����5�"'&<���&�G�=��'���������-��);��:��!$)��T�>Z������!$�XW���*���!$�����c���&���� �8�*n�����.�����'���
����*n�'���1��� �����P���*��!���*�'����J����>A�����) <������)*Q&� � G����X�V�&�G��a*��������&����W���*")�����&�<������)��&'�)G
��H�������'��5"�.����"9;�P���;��-�"�,"�����)�������G��)�����������������");���6)1�H'����""�8�� �����*��G��'�K�R������
�"�;�-���"�,"�.'�mn�������8�� �����)"��*��'�R�)����<��)���KVXA�EHT�����XAAPA������&�P,�������<����# �H��K�����P
.��;��*��G�m�$�&-����
�����!��7�3 =����� !���3���������5 6'��7���)��"�#��
y'�f*�'� DNA,�6������*��P,������� K�7�<�N�XW�O!))��G�E))("'�-��&���,))�6�����))�����.))�'����'�))�
���7�'������ �����T������.�����*��'�=i�.�G'�.'�Y[A����)I�&���;��&#*�'�-W[A����.�G'�E�G�NMerck�O���&UA�< ����������)���)*��
��������������");�e)�K��)h'&��&����);��J�H�'�J�8�� �P" ���'&����;�&������*f���-���=i�!h��.'�m�T�WA�*�������������)J��
DNA ,�6�������Pd����h'&��������1��*f����"G'�����������J�.�����*��'�P" ��h'&��&�=i��XAA��� <������)*�����)��
m�� ]�H'����NpH- 8.0�O!��G��'�K�-����H�)���)��P)" W��������i*�����<���*��'�B9������!$�ZA����;��x*��!����-��.'�m�
��H���2�'�%��T������)�'�C����FC���=i�<������);��&'&���)*+;������R�^�v� �!c UVN260 nm�O�����5*)�&�P),���)�UV��� ���� �'�m"'� ��NUV TECH�O!��G��'�K�<�����&���-
��
�#$��%&��#��'()�%�#�*��+�,-!��.��� ����////� �0��������*�!�#��%�� ��
�?@
���������� ������� ���� �����
#�'��>'�����3�3�0�����
7( � c ������&'&������'7)�'�E�)"�8�� �SPSS 7.5��E)("'�&�G���-�������C�%��.C�.'X��'�����3 ���)�����)�3��s)9 �'�2<���'&
�;��&#*�'�-AU[A� P<�����'�a��%'��$�3�<����)*��G��L"��&��'&�;-
��� ��?��
�����,;�=���>�"'�'���<��*�����������.'���);�'�)����� ������%*��,����%����������&�'��2����G���)����)��<���q) *f������%'�,<1���=��>?@A���%�"��<��&�-��.'::����������)��6*)9���,
����)� ����!"�#$T�WXV�N?Y(n=�������&�)��U:V��NU>n=�O��%.�"&���-'����2�������'&�%'�,��<�Z@]>������*;'&�=�������)��*���2
��))�����))G��))��s�))������))� ������));�'�))���))"�,"<�� �X@]XA��&���=���-��'�.'��3�������)�����)G�2<����)��*�����2�)��%'7
.�'�������������G����s�����<�>@]>A���&�)��=���-��)*,���2�������G<������������G����s������������3�'���<�Z@�]ZA��=��
&��-��'&�,"��>����'�8�� �!"�#$��c�����7��������&���)� �����������%�"�'���&��C�%'�,�<��&-�������),(���&X[@X���)I�&���.'�
����������s�������;�'��������!"�#$����)�����'�&'��5*)�&������"&��NU�A�[AP��O����"h��&�e M'�������&�G���������-'�)��2
������!�'�2�,����p����&��I�xh���������H�)����)G<���)��<c��� ���'�&'��5*�&����"h������);��-��'��&�)���2��)���%Z:[U�
�I�&��"�,"�������!"�#$�.'���� ���������������"�;�'����h.���%'7��.�'�������.'������&�'�����"*��,<�X[X���)I�&���&�)���-
�'��&���3�4��2����*�����2��'�%'7����7������� � ������;�'����)��e�������s�����%*��,���� S�'�<�������NY?OVT�����NXXOVT��#;�
N?V(��";����<N�X�OV�"&���-���.'���%::����������'����;T���)�� �Y������!9`��=��"'�!+ �&�$�N'����7���)��YT�Z:T�>@T�?>T�Y?T�
W?�����:>O��"&����a������#���=��"'��<���*;'&��-'����%�"�2�<���&��'��`�'�������7������"�G����z 3*���)��'�� ����8)a������*+)�m
'�!#��5����"�G����z 3*��^�����7��m�<���;�-������
�@��=AB�1�-)2��3!��%�)(��*#�)�+�,-!����$��('!��+�%��
��!$4�5%���6�%�����������7�����89:;��
��+���3��>�;@��<��3��C'(=n) ���3��
� � � �
+'$��$>� �*)=$$��
$+�'�$>��$%� �>(=$&��
"+'�">��*%� �&&=*+��
*+�'�*>��$"� �*)=$*��
(+'(>��)� �$?=)� �
%+�'�%>��&� �%+=&� �
)+')>��*� �(>=*� �
��D!=�*���!��??��$>>��
��������� Mean ± SD = ��
������
��������
���3 !�AB!�3���%�)(��*#1�%$<�+�,-!���#(���1��$����*#�
'� �5��� �+�%=�>��?4������
������+J���!��a��%'7����'&�!�<)��'����)��7���)������"*)��,<�������&���� ���'�����,;�=�X�����?����!�'���;��&'&�%�"��-%,�����)1
������&�=�'�)���&�)������)�<��&�);T���)��*����!)��a��2������)��s�)����*"C<��� ����*#��P���%�+�NZY�VT�U@�n=�O���*,��������s�)�����"C�2
�*"C���<��� ����#�C� ��P�����NU[WZV�T�W>n=�O&���-��� ������)��'��_,���;����7��2 MIC �*,������)��!9+"��)*"C<��� ��)�P��)��
���+))�� ���n���2�+))� �#������*));'&�-��))��!9+))"�!))��a�*"C<���� ��P����C�� G�����.��� � ��������C�e����2T����*����+��2
��"����+�2�����&����+J����E�a��.'�-����"�.'��*��,<��'�.'�����7������)��*"C<��� ��+� �#��P��"&���E�a���-��
��������
�����
������������ ��������������� ������������� ���!�"��
�?�
�@��=E�B%��@�!���=�!�A��!�=�)�%�)(��*#�) ��$��('!����%����+�,-!�����
�F����' �G��5�H2 ����+�+� I����
��3��C'�����3��3��C'�����3��3��C'�����3��
08�+J�������(&��(>=%*@��"$� �?)="*@��">� �&"=""@��
K�H���������*+��*$=((@��"*� �$*=")@��")� �%(="+@��
K�H���� +=��*%��&&=*+@��$)� �$?=$?@��*&� �>(=(>@��
K���H� ����L����($��%+=()@��$+� �%+="$@��"?� �?$=*$@��
4�H��' J���($��%+=()@��$)� �$?=$?@��*$� �""=*%@��
* H���� J���"+��+%=*"��$+� �%+="$@��(>� �(%=(%@��
K�"�(�J���*>��>+=*(@��$$� �%=$"@��(&� �(>=%*@��
K���8��F��*)��+=(>@��$$� �%=$"@��($� �%+=()@��
A��B��C ��D���E�������15�� �.,-� F�������D���;����D�G/����H�-��I� �
-� F� -��B�D���;����DG����J��5����8 �K��B,�;�����/���-��L�-�����M���G��1�J G/I� �
����/;�G�� C � . 1 x 10 8N����/.C��3�K����O/��/��-�I� �
��
�@��=MB���$55����7��=B�C�?D$@(MIC)�%�)(��*#�+�,-!���) �1��$��('!�����%�����*#���� ��������7���(��
�E�F��� �-������=�>�����������G#���
�F����' �G MIC range��MIC (µg/mL) MIC 50
MIC 90
08�+J�F�����)('�? $) )(
����L��K���H� ('�$ %=> (
K���8��F )('�( $) )(
K�H���� += $)'�( ( $)
K�H������� *"'�? ? *"
4�H��' J� )('�" ? )(
* H���� J� *"'�$) $) *"
K�"�(�J���*"'�( ? *"
MIC50�P�����/..����7��DQ�R�ST�/F,�%>�@ -GJ��B� �
MIC90�P�����/..����7��DQ�R�ST�/F,�+>�@ -GJ��B� �
� �
�#$��%&��#��'()�%�#�*��+�,-!��.��� ����////� �0��������*�!�#��%�� ��
�?�
4�����H�;��3����������&�� ��'�2��'�2����7���������)��&'&�%�)"�:>[Z�V�) �Zn=�O��"C�.'���������, <�� �'�����)"&'�"�����&
�))J<���))�?ZV�N?Xn=�O�))����3))p�� �#<���?@N�V?Un=�O�������4��*��� <��� ����"&'&���-�_,���2>YNV>Un=�O��)������
�K��� ���"&'&��-
'�������!K&����*��&����*�<����%�7,���������!+) �E)("'���#���=�*��<��J��c���8�� ���*n�����m������l)"�����'���
������=*+���������������);��&�)���)��-��)"�,"���)���)�����H��)I ��&�������*�'����;��*;'{G�!��+"'&�=���������"C��*������������5
�#���=�*��<�a����&�G��+���-����;>����H�;���������&�� �)��%'����7����D��������� ����� �����"�'���*�%�<��&-��
����
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
��
� ��N"�� ��O� �P��08)�AB���)!�H-��!���'�I�%!������1�1���*# �J��K���3������
UC�'���3 �C���SF�������L V8��������J?��/7���<��W��D��-�,�������,�*&���-�JX��������1��
0'���3 ��<��W����$)��/7���D��-�,�������,�*&���-�JX��������1�� �
Y'���3 ��<��W����"(-�� ����D��-������� *&���-�JX��������1��
���� ���������������&�� ��������'���)� ���������.'���);��)��7
��%*��,���)�����������D���P),���)��%)�������R�)����"��*��'<� ����������&�����;������;>�������!)�'���);��&'&�%�)"��-
*"�b�����.'��IJ���)"��*��'�R�����<��������)���)��&'&�%�)"�'7�'�����'��5"�%�.�H���v��'����7������� ��}4���&�)���) ��!<�
%�*�'������%'7������� �� ����'7�'���;���v����*��������)1�����)��))��))*,��%'7���))����� ��%))�.�H�))���&�:�!$))��� �
N��;�>]�q�'�O����%�.����!9+">Z�!$���N��;�>]�F�O���%�.�H��XW!$���N���;>]y��O&�G��������-��
����<����,�6��&�����3�4����������&����'�%����7���<����)����� ������������ �<����_,����"&�����̂ ��!��a��2<������)��!9+"�*"C<���� ��P��������%�)"�&�)h�.'��)�<���)"&'&T�������)��&'&�%�)"
'����7����>@T�XW�����:Y���������K�� ��*;'&�����)5,���<�'�'&�����,�6��P�����������)� ��%.����%+�<���������&��)���)"&���^)��
��));�?!))�'���));��&'&�%�))"��-'���))��7>@��))��!9+))"�
������������������������� �� ����!����� ��������"��
�?%
)))*"C<��� �)))�P�)))���)))*���)))�+��2N>ZMIC=O�T��+)�� ���n��2�WMIC =O�*#�T���%�+)�NZW�MIC = O�T
��.#��2N?X MIC =O�C�������2NZWMIC = O�&�)��E�a���-�_,��'�2������7XW�������!9+"�*"C<���� ��P����#�C� ����)��
N?XMIC = O+))� �#��T���NZWMIC = O�*#��T�%�+))�� �NZWMIC =OT���.#)))���2N?XMIC = O�C����)))���2� ��NZW MIC = O����&���E�a�������K�� �"��)��!);'&�7�-�),��2
'�&�����&��5�'�����7:Y"��&�G������7���-��
��,�6��&�����3�4������)���&������X@������)���)�������)K�� ����!;'&��,�6���"�5_��������&'�"�%�"�'���N����;X�-O'�����'�2
��%�"�<������� �%i�^,*J'�����&������)������'��&�� �)��'�2��7���)���.�����<��!)�'��-'�)��'�2����)�_,��)��7�����)��'&��)��2��
))*����))�+�2T+))� �#����T�*#���%�+))�T��.#))������2�C������&���E�a��2-��_,��'�2����7���)��YT�?>�����:�'�'&���
�,�6���"��P����p'�<��� ��%.����<�"&���^��-��
��
� ������������������������������������
��������������������������
�08)EB���'#�%&���$#����)('!��#�*'�-��$� ��$55��3��!���( ��!�A��!���#�+�,-!���) �1��$��('!�����%����#�*������/��
Line 1: �G����!�JC�$+ Line 2: �GJC�����!�"+ Line 3: ��GJC�����!�? Line 4: �G���!�JC�*$ Line 5: �G����!�JC�&
Line 6: �G����!�JC�%& Line 7: �G�����!�JC�"( Line 8: �G����!�JC�%( �
��Q>���
��'�&'��"�������� ���;7��<��&�'�"*)�'����!)�'�����&��)���������%*��,�5"��&�'���������&'��'�.'��'�&'�%&�,"�y�h�������
���&������ <�����"�%&����'�&'�����&K�,<�����&#*�'���;��)�<��&�);�-���G���%'�'����&#*�'<�M����'�'7�<��"������)���'�&'��N�UA���
X>��I�&��O�J��&���*+��2��������&�%�);�������&'�)3 ��&�%*)��,
.�&�����.'������'�k$��!�'�2�,��%'�,��!"�#$�&(����;"�<��&����.'�"��&�;��-��
���*����wf�����2�� ������'�)��89 ����p�$�2�)����� �+)��2'�!))"�#$�&))(�))��'�&'�����"*))��,<��))���))��!))�'�
!"�#$�����89 ������* )�Cathter-Associated urinary tract infection: CAUTIs)O�/��3���"'�-!"�#$�����'�&'���;"�<����"��"���.'�����&������ �)���
�#$��%&��#��'()�%�#�*��+�,-!��.��� ����////� �0��������*�!�#��%�� ��
�?�
"'�'��<�������� ���"C���&��7����̂ �������&x)*K'�����)�_,�����2�����)3���*�'�h�"���'�$�N��*n)�<��,)��<�����*�)���,<�O�.'
,'�.�!�&���"�'&��h���NXZTXU�-O���4���&����pJ��3���"�,"��`�'�������;�'���T�����6*)9��%".�.'�!"�#$��������'�&'����������"&�����*�����2���������&�)���)d�%'�,
����������'&��&�%.���<�X@]XA�����"&���=��NU[A�P��-O����&�)��%'����7����������.'���;�'������ �����%'�,T�>YV�N>U\�nO�� ����������K�� ��&�������J��&�<�����?@V��N?U�n=�O����)�"C�)������
�����8��*�?ZN�V?Xn=�O���)������3)p�� �����*);'&�q-��'��&�)��2����<��� �������������� ���������D���� � ��������)*����<)�����
���8�� ��"��*��'�R�����<�Scanning��� �&��)����)������'�)K��!��G�-*"���������&'&�%�"�b��%�.�!;{G��������H�);����'�)a��
������'7�'�� ���v�<���������1����������&���:����'�)a��=�'�!$����h� <�,��<������������J��&��;��*h��� <������<)1�XW���!$)��
����'�a������'7�'�� ����SJ6����K�v�'�������&�),"�'��-'�)�����)�'�2���'����!�'�2�,����&�2���;��������"�.�<���� ����������)������
��'�� '�8�� ���������N��a�'�&�h�O��������*+QS���.MC�<���);��&��3���J'��������� �� '�H��I�)������&�)f��&�)h���P����E)("'�
�<�����aac��8�� �H3�4���&���&�;��&�2��"��5���7�0�4�����);�!�'�NX:TXY-O���������*);{G�H)3�4��.'�<�����'���������);�
'�*+����������}4����������"�����'���)�<�������) ��&��");����������&�'&�va"�� N�X@O-��
��3�4���&���������������������'�������� ���� ������������������E("'�2�*"'i�C�������&�� �����T��;�������������������� ��
���������������&�)��E�)a��2��+)�� ���n������'&��)��e M'�� �������7"C����������."i���)��%�� ) � G���. �,+�&���+�'������
�������������+�a���&��� ^��}4������'&��h���P�"�*�"6������"&��N?AO-��
�ac ��&��&�z��5����������������� ����� �'��mT���)������ ��&Z@�.'��* ))��YU))���* �����&��))3�4��&��))���%'�)),�&�!��"̂ �1������<&�G�������* ��H������N?>O-���
��&��))))pJ�<))))������.'�))))��%::'����))))��7��"*)))��,<���)))� ���T�ZYN�VU@�n=�O���)))��!9+)))"
)))*"C<��� �)))�P��*#��%�+)))�a��2��*�)))���!)))��� � mg/ml) AU[A±?X]�>ZMIC=O���U[WZN�VW>n=�O��)��!9+"�
)))*"C<��� �)))��#�C� ��P��)))*,���)))��!)))��a��2� ��Nµg/mL:�A�[A�W]>MIC=O���*));'&�'��-��))� ����))��'���))�_,���));��))��7�2�MIC��))*,�����))��!9+))"�
*"C<���� ��P�������+)�� ���n�2µg/mL)AU[A±�W]>MIC=O���+� �#����Nµg/mL:]WMIC= �O���*);'&�-�&�)���!)��a���
�'��*,�����7�����#�C� �������������E�)$����s�����!�'�2�,�����&#*�'��'�.'������ ���H��I������'&�2������&�2���;��%*��,�-��&
*"�����(�F����������)*,���), �����'�)���)���������*);'&���'&�2��*,��!��a���"�����7����&����<�C���-�*"�.'����^��b�)�<���%'�)
�d������)*"C����&���s9�*�'�2<��� ��)����P���+)�� ���n�����2+� �#������<�"'� ����������1���t�r�� ��� $�������!)"�#$�����)��
&'�'��;"�<G��'�K��&#*�'�&�����* ��.'���"��-���&'�3 W[>YV� N>Un= �O'�.'����7��� ��)�����)������)K�� ��
��������'&�!��a���"C�e M'�����"&��<����������'&��)�d��)��!9+"�������1����*;'&�%�7,��-'����������x �2�)�<������� ��)��&�);�)��������,���va"�� <'��&����'&�!��a��&(<��;���*;'&�-��
����&�3�4�'���������������?AA���'�&'��"�,"������.'���%*��,�,h�E�'��<����E("'�%'�� ���;T����*���.'�m�����;'������) ��<T�
�������� ���>>����&������4��*���5<����&����&���=|;'�'������*"������)*"C�.'��)IJ�b<���)�'�G��'�E���)��7���)������)�&'&�%�)"��C����2T�"���+))))��))))�'�P��T�+))))�� ��'�����2���+�� ���n�2�r'�2��*�����'�'&��"&���N�?XO-��
��P����'�����&��3�4�������5����������* )���)`�'��&�� ���)���*;'&�&����������!�fp������ T����c4)��v);���<�������* )��
�_,��� ��7G'��'�a��2<���������������)�3��H��)I<��'&����&�����*���%'�,�,���a���&�P��������+������*�)��%��)��%'�,�,<�
.��� &�!�'�N??O-������&����<������&��pJ���'�%����7����<)���)��� ����<����)�
�� ))����))������ ))�<��))"&��T^))��!))��a��<���))��!9+))"�*"C<��� ������'����;������P���)��7���)��>@��TXW�����:Y����)��
�������K�� ���5,���*;'&�<�'�'&�����,�6��P���������)��%+)����� ��%.�<���"&���^��-�'���������s)9 �'�%)��'�!�'�2�,����'�2
����� �2���������� T����'&�!��a��<���,�6��������������;����)����.C�8�� ��3��H��L"����PCR"� ����� �l�����&�;���-��
������������������������� �� ����!����� ��������"��
�??
References 1. Trautner BW, Darouiche RO. Role of
Biofilm in catheter-associated urinary tract
infection. Am J Infect Control 2004; 32(3):
177-83.
2. Liedl B. Catheter-associated urinary tract
infections. Curr Opin Urol 2001; 11(1):75-9.
3. Krajden S, Fuksa M, Petrea C, Crisp L.G,
Penner JL. Expanded clinical spectrum of
infections scaused by Proteus penneri. J Clin
Microbiol 1987; 25(3): 578-9.
4. Adler JL, Burke JP, Martin DF, Finland M.
Proteus Infections in a General Hospital.
Biochemical Characteristics and Antibiotic
Susceptibility of the Organisms: With Special
reference to Proticine Typing and the Dienes
Phenomenon. Ann Intern Med 1971; 75(4):
517-30.
5. Hola V, Peroutkova T, Ruzicka F. Virulence
factors in Proteus bacteria from biofilm
communities of catheter-associated urinary
tract infections. FEMS Immunol Med
Microbiol 2012; 65(2): 343-9.
6. Mobley HL, Warren JW. Urease-positive
bacteriuria and obstruction of long-term
urinary catheters. J Clin Microbiol 1987;
25(11): 2216-7
7. Johnson DE, Russell RG, Lockatell CV,
Zulty JC, Warren JW, Mobley HL.
Contribution of Proteus mirabilis urease to
persistence, urolithiasis and acute
pyelonephritis in a mouse model of ascending
urinary tract infection. Infect Immun 1993;
61(7): 2748-54
8. Saint S, Chenoweth CE. Biofilms and
catheter-associated urinary tract infections.
Infect Dis Clin North Am 2003; 17(2): 411-
32.
9. Ramsay JW, Garnham AJ, Mulhall AB,
Crow RA, Bryan JM, Eardley I, et al.
Biofilms, bacteria, and bladder catheters: a
clinical study. Br J Urol 1989; 64(4): 395-8.
10. Stickler D, Ganderton L, King J, Nettleton J,
Winters C. Proteus mirabilis biofilms and the
encrustation of urethral catheters. Urol Res
1993; 21(6): 407-11.
11. Sharp PM, Saenz CA, Martin RR. Amikacin
(BB-K8) treatment of multiple-drug-resistant
proteus infections. Antimicrob Agents
Chemother 1974; 5(5):435-8.
12. Matsukawa M, Kunishima Y, Takahashi S,
Takeyama K, Tsukamoto T. Bacterial
colonization on intraluminal surface of
urethral catheter.Urology 2005; 65(3): 440-4.
13. Warren JW. Catheter-associated urinary tract
infections. Infect Dis Clin North Am 1997;
11(3): 609-22.
14. Allison C, Coleman N, Jones PL, Hughes C.
Ability of Proteus mirabilis to invade human
urothelial cells is coupled to motility and
swarming differentiation. Infect Immunl
1992; 60(11): 4740-6.
15. Adegbola RA, Old DC, Senior BW. The
adhesins and fimbriae of Proteus mirabilis
strains associated with high and low affinity
for urinary tract. J Med Microbiol 1983;
16(4):427-31.
16. Ghigo JM. Natural conjugative plasmids
induce bacterial biofilm development.
Nature2001; 412(6845): 442-5.
17. Jacobsen SM, Shirtliff ME. Proteus mirabilis
biofilms and catheter-associated urinary tract
infections. Virulence 2001; 2(5): 460-5
18. Stickler DJ and Morgan SD. Modulation of
crystalline Proteus mirabilis Biofilm
development on urinary catheters. J Med
Microbiol 2006; 55(pt 5): 489-94.
�#$��%&��#��'()�%�#�*��+�,-!��.��� ����////� �0��������*�!�#��%�� ��
�?�
19. Mahdavi M, Jalali M, Kermanshahi K. The
Assessment of Biofilm Formation in Iranian
Meat Processing Environments. Research
Journal of Microbiology 2008; 3: 181-6.
20. Mohammadi M, Abdi A. Biofilm production
in Pseudomonas aeruginosa by Microtiter test
and electron microscope. Medical Journal of
Artesh 2005; 2 (1): 295-9 [Persian].
21. Eftekhar F, Dadaei T. Biofilm formation and
detection of ica AB genes in clinical isolates
of methicillin resistant Staphylococcus
aureus. Iranian Journal of Basic Medical
Sciences 2011; 14(2): 132-6.
22. Clinical and Laboratory Standards Institute�
(CLSI). Performance standards for
antimicrobial susceptibility testing: M100-�
S17, January 2007.
23. Stepanovic S, Vukovic D, Hola V, Di
Bonaventura G, Djukic S, Cirkovic I, Ruzicka
F. Quantification of biofilm in microtiter
plates: overview of testing conditions and
practical recommendations for assessment of
biofilm production by staphylococci. APMIS
2007; 115(8): 891-9.
24. Birnboim HC, Doly J. A rapid alkaline
extraction procedure for screening
recombinant plasmid DNA. Nucleic acids
Research1979; 7(6): 1513-23.
25. Tenke P, Kovacs B, Jackel M, Nagy E. The
role of biofilm infection in urology. World J
Urol 2006; 24(1): 13-20
26. Tambyah PA, Halvorson KT, Maki DJ. A
prospective study of pathogenesis of catheter-
associated urinary tract infections. Mayo Clin
Proc 1999; 74(2): 131-6.
27. Aiassa V, Barnes A. I, Albesa l. Resistance to
ciprofloxacin by enhancement of antioxidant
defenses in biofilm and planktonic Proteus
mirabilis. Biochem Biophys Res Commun
2010; 393(1): 84-8.
28. Jones SM, Yerly J, Hu Y, Ceri H, Martinuzzi
R. Structure of Proteus mirabilis biofilms
grown in artificial urine and standard
laboratory media. FEMS Microbiol Lett
2007; 268(1):16-21.
29. Morris NS, Stickler DJ. Encrustation of
indwelling urethral catheters by Proteus
mirabilis biofilms growingin human urine. J
Hosp Infect 1998; 39(3):227-34.
30. Cox AJ, Hukins DW. Morphology of mineral
deposits on encrusted urinary catheters
investigated by scanning electron
microscopy. J Urol1989; 142(5): 1347-50.
31. Stickler DJ. Bacterial biofilms in patients with
indwelling urinary catheters. Na Clin Pract
Urol 2008; 5(11): 598-608.
32. Dalal MM, Mirshafie A, Zeraati H,
Bakhtiyari R. Plasmid paterrn of Proteus
isolated from urinary tract patients.
Daneshvar 2006; 13(62): 29-34 [Persian].
33. Jones S.M, Ravani P, Hemmelgarn BR,
Muruve D, MacRae JM. Morphometric and
Biological Characterization of Biofilm in
Tunneled Hemodialysis Catheters. Am J
Kidney Dis 2011; 57(3): 449-55.
������������������������� �� ����!����� ��������"��
�?>
Plasmid Pattern of Biofilm Producing Proteus mirabilis and Proteus vulgaris among Clinical
Isolates in Kerman University Hospitals during 2011-2012
������������ ��� ������� ��������� ���� �����
��� ����� ������� ��� �����
�
1. Postgraduate Student of Microbiology, Afzalipour School of Medicine, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran
2. Associate Professor of Microbiology, Afzalipour School of Medicine, Kerman University of Medical Sciences, Kerman, Iran
3. Associate Professor of Pathology, Tehran Blood Transfusion Organization, Tehran, Iran
* Corresponding author; e-mail: [email protected]
��������������� ������ � ����� ��������������
Abstract Background & Aims: Emergence of biofilm producing Proteus strains created a serious problem in the
treatment of catheter-associated urinary tract infections. The aim of this research was to study biofilm
production and plasmid pattern of proteus strains associated with Urinary tract infection.
Methods: A total of 88 strains of Proteus were isolated from samples collected in hospitals of Kerman/ Iran
during 2011-2012. The isolates were identified by routin microbiological tests and antibiotic sensitivity tests
were carried out by disk diffusion and minimum inhibitory concentration (MIC) by E-test methods. Biofilm
production was studied by microtiter plate method and confirmed by Scanning electron microscope.
Plasmids from biofilm producing isolates were detected by alkaline lysis technique.
Results: From 88 patients infected by proteus, 58% were female and 42% were male. The most and the
least frequent age ranges were respectively 20-29 years old (77.39 %) and 60-69 years old. From all isolates,
40.69 % (n=59) showed the highest MIC range (16-32�0.05 µg/mL) to ceftriaxone whereas, 59% [n=41]
exhibited the least MIC range to chloramphenicol (1-4�0.08 µg/mL). Biofilm production was positive for
17% (n=15) of the isolates and 6�(n=6) did not show any biofilm (P� 0.05). Plasmid isolation from biofilm
producing isolates revealed that stains number 87, 24 and 19 that produced strong biofilm all carried similar
high molecular weight (M. Wt) plasmid. While strain 29 that showed strong biofilm did not have any
plasmid.
Conclusion: It can be concluded that the majority of isolates of Proteus were resistant to routine antibiotics
and limited number of them could produce biofilm. Majority of the biofilm producing isolates contained a
similar high M. Wt. plasmid. Keywords: Proteus, Antibiotic resistance, Microbial sensitivity test, Biofilm, Plasmids
Journal of Kerman University of Medical Sciences, 2013; 20(2): 146-157
��