神经母细胞瘤组织 MYCN 扩增水平 与 Ki-67 LI 等生物学指标的关系

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神经母细胞瘤组织 MYCN 扩增水平 与 Ki-67 LI 等生物学指标的关系. 王会娟 王焕民 宫丽平 伏利兵 秦红 吕蓓蓓. 神经母细胞瘤 (NB). 儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤 具有自然消退和快速进展两种截然不 同的生物学特点. N-Myc 基因. N-Myc 基因扩增 主要发生于进展期 NB 中,与肿瘤的侵袭行为和不良预后密切相关 为 NB 危险度的评估、治疗方案的选择、预后的判断提供分子学依据. Ki-67 抗原. 是一种具有代表性的细胞增殖标记, Ki-67 LI 定量地反映肿瘤的增殖情况。 - PowerPoint PPT Presentation

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神经母细胞瘤组织神经母细胞瘤组织 MYCNMYCN 扩增水扩增水平平

与与 Ki-67 LIKi-67 LI 等生物学指标的关系等生物学指标的关系

王会娟 王焕民 宫丽平 伏利兵 秦红 吕蓓蓓

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神经母细胞瘤 (NB)

儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤 具有自然消退和快速进展两种截然不 同的生物学特点

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N-Myc 基因扩增主要发生于进展期NB 中,与肿瘤的侵袭行为和不良预后密切相关

为 NB 危险度的评估、治疗方案的选择、预后的判断提供分子学依据

N-MycN-Myc 基因

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是一种具有代表性的细胞增殖标记,是一种具有代表性的细胞增殖标记, Ki-67 LIKi-67 LI 定量地反映肿瘤的增殖情况。定量地反映肿瘤的增殖情况。 Ki-67Ki-67 标记指数标记指数 ( Labeling Index, LI)( Labeling Index, LI) :: 指肿瘤细胞中指肿瘤细胞中 Ki-67Ki-67 阳性细胞所占的百分比。阳性细胞所占的百分比。

Ki-67Ki-67 抗抗原原

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N-Myc N-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LIKi-67 LI 和和 NBNB 的临床病理的临床病理因因

素间分别有何关系素间分别有何关系?

N-MycN-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LIKi-67 LI

N-Myc N-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LI Ki-67 LI 间有何关间有何关系?系?

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2008.92008.9 至至 2009.32009.3

3030 例石蜡包埋组织标本例石蜡包埋组织标本 神经母细胞瘤(神经母细胞瘤( NBNB )) 节细胞性神经母细胞瘤节细胞性神经母细胞瘤

(GNB)(GNB)

研究对象

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性别:男:性别:男: 1919 例,女:例,女: 1111 例;例; 年龄:年龄: 22 月~月~ 99 岁岁 66 月月 << 1818 个月 个月 1313 例, ≥例, ≥ 1818 个月 个月

1717 例例 原发部位:肾上腺 原发部位:肾上腺 2323 例,例, 非肾上腺 非肾上腺 77 例例

研究对象

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病理分型:病理分型: NBNB : 分化型 : 分化型 88 例,分化差型 例,分化差型 77 例,例, 未分化型 未分化型 11 例,不明确型 例,不明确型 77 例 例 .. GNB: 7GNB: 7 例例 临床参照临床参照 INSSINSS 系统分期:系统分期: 11 期 期 55 例, 例, 22 期 期 44 例, 例, 33 期 期 66 例,例, 44 期 期 1111 例, 例, 4S4S 期 期 44 例例

研究对象

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研究内容

1.1. N-Myc N-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LIKi-67 LI 分别与 分别与 NBNB 的的临床病临床病

理因素理因素 (( 性别 、年龄、原发部位、分期、性别 、年龄、原发部位、分期、分分

型、型、 NSENSE 、、 VMA)VMA) 间的关系。间的关系。

2. N-Myc 2. N-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LI Ki-67 LI 间的关系。间的关系。

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N-Myc 基因的检测: FISH探针:位点特异性 探针:位点特异性 N-myc/CEP2N-myc/CEP2 双色探针双色探针

实验方法

N-Myc 基因 获得:拷贝数 4 ~ 9 个; 扩增:拷贝数≥ 10 个。

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Ki-67 LI:Ki-67 LI: 免疫组化二步法免疫组化二步法 抗体抗体 :: 鼠抗人鼠抗人 Ki-67Ki-67 抗原免疫组化单克隆抗抗原免疫组化单克隆抗

体 体 阳性细胞是指细胞核内出现棕黄色颗粒阳性细胞是指细胞核内出现棕黄色颗粒 <10% <10% (-)(-) 10%10% ~~ 30% ( + )30% ( + )

≥ ≥30% (++)30% (++)

实验方法

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SPSS 11.5 软件 确切概率法。 秩和检验 (Mann-Whitney U test , Kruskal–Wallis test) 。 P < 0.05 认为有统计学意义。

统计学分析

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1.1 1.1 55 例出现扩增(拷贝数≥例出现扩增(拷贝数≥ 1010 个),扩增率为个),扩增率为 16.67%16.67%

FISHFISH 检测检测 N-MycN-Myc 拷贝数的结拷贝数的结果果

1

扩增率扩增率 11 、、 22 、、 4S4S 期 期 15.38%15.38% (( 2/132/13 )) 33 、、 44 期 期 17.65%17.65% (( 3/173/17 ))

PP >> 0.050.05

病理诊断病理诊断 : NB: NB

均为男性,就诊时年龄均>均为男性,就诊时年龄均> 1818 个月个月

33 例为进展期,例为进展期, 22 例为早期分化差型例为早期分化差型

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FISHFISH 检测检测 N-MycN-Myc 拷贝数的拷贝数的结果结果

1

例数 / 诊断

性别 / 年龄

原发部位 INSS分期

病理分型 Ki-67 LI MYCN拷贝数

术前化疗

1/NB M/6 岁4月

左肾上腺 3 分化型 阴性 >25 是

2/NB M/3岁 左肾上腺 3 未分化型 80% >15 是

3/NB M/21月 左肾上腺 1 分化差型 50% >15 否

4/NB M/28月 右肾上腺 3 不明确 80% >50 是

5/NB M/5岁 左肾上腺 2 分化差 80% >15 是

表 1.5 例扩增病例的临床资料

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N-Myc P 值 ≥扩增( 10 ) 获得( 4 ~ 9 ) 无异常

INSS分期 1+2+4S 13 2 5 6 Pa=0.222

3+4 17 3 13 1 Pb=0.021

Pc=0.025

组织学分型NB 23 5 15 3 Pa=0.081

GNB 7 0 3 4 Pb=0.066

Pc=0.033

N-MycN-Myc 拷贝数水平与临床病理因素的关拷贝数水平与临床病理因素的关系系

2

Pa : N-Myc 扩增组和 N-Myc 无异常组之间的 P 值 ;

Pb : N-Myc 获得组和 N-Myc 无异常组之间的 P 值 ;

Pc : N-Myc 增多组(获得组 + 扩增组)与无异常组之间的 P 值。

病例数

表 2.

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2.1 N-MycN-Myc 扩增水平在另外扩增水平在另外 66 组(包括患者性别、组(包括患者性别、年 年

龄、肿瘤原发部位、是否接受化疗以及血清龄、肿瘤原发部位、是否接受化疗以及血清 NSENSE 、、 2424 小时尿小时尿 VMAVMA 水平)中的差异均无统水平)中的差异均无统

计计 学意义(学意义( PP >> 0.050.05 )。)。

N-MycN-Myc 拷贝数水平与拷贝数水平与 NBNB 临床病理因素的关临床病理因素的关系系

2

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N-MycN-Myc 无异常,无异常, 40×10040×100

绿色信号代表绿色信号代表 N-MycN-Myc 基因基因

附图附图

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N-MycN-Myc 扩增 扩增 40x10040x100

绿色信号代表绿色信号代表 N-MycN-Myc 基因基因

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Ki-67 LIKi-67 LI 与 NB 其它临床因素间的关系

3

表 3. Ki-67 标记指数与肿瘤组织学类型之间的关系

例数Ki-67 LI 平均秩次 P 值

― + ++

NB 23 4 5 14 18.13 0.003

GNB 7 5 2 0 6.86

P<0.05,说明两组的 Ki-67 LI有显著差异。由于NB组的平均秩次是 18.13大于GNB组的平均秩次 6.86,故NB组的 Ki-67 LI明显大于GNB组。

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Ki-67 LIKi-67 LI 与 NB 其它临床因素间的关系

3

例数 Ki-67 LI 平均秩次 P 值 ― + ++

病理分型

分化型 8 1 3 4 5.88 0.026

未分化 + 分化差型

7 1 0 7 11.13

P<0.05 ,说明两组的 Ki-67 LI 有显著差异。由于未分化 + 分化差型组的平均秩次是5.88 ,大于组分化型组的平均秩次 11.13 ,故 Ki-67Ki-67 在未分化型和分化差型中的表达在未分化型和分化差型中的表达明显高于分化型明显高于分化型

表 4. Ki-67 LI 与 NB 病理类型之间的关系

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Ki-67 LIKi-67 LI 与 NB 其它临床因素间的关系

3

例数 Ki-67 LI 平均秩次 P值 ― + ++

术前化疗是 13 6 1 6 8.93 0.013

否 10 0 3 7 16

P<0.05 ,说明两组的 Ki-67 LI 有显著差异。由于化疗组的平均秩次是 8.93 ,小于未化疗组的平均秩次 16 ,故化疗组 Ki-67Ki-67 表达低于未接受化疗组。表达低于未接受化疗组。

表 5. Ki-67 LI 与化疗的关系

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Ki-67 LI Ki-67 LI 在年龄、性别、肿瘤的分期各组中的在年龄、性别、肿瘤的分期各组中的 差异无统计学意义差异无统计学意义

Ki-67 LIKi-67 LI 与 NB 其它临床因素间的关系

3

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Ki-67 (-) 4x10

附图

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Ki-67 LI ( + ) 10x10

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Ki-67 LI ( ++ ) 10x10

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Ki-67 LI >50% 10x10

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MYCNMYCN 扩增水平与扩增水平与 Ki-67 LIKi-67 LI 之间的关系

4

例数 Ki-67 LI Mean rank P 值― + ++

MYCN

① 扩增 5 1 0 4 23.00 0.092

获得 18 5 7 6 14.67

无异常 7 3 1 3 12.29

② 扩增 5 1 0 4 23.00 0.036

非扩增 25 8 8 7 14.00

③ 获得 + 扩增

23 6 7 10 16.48 0.267

无异常 7 3 1 3 12.29

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总之,总之, N-MycN-Myc 扩增与扩增与 Ki-67 LIKi-67 LI 在在 NBNB 分期、分期、

分型中的意义并不是完全一致的。分型中的意义并不是完全一致的。

N-MycN-Myc 扩增率仅为扩增率仅为 20-25%20-25% ,而 ,而 Ki-67 LI Ki-67 LI 容容

易受化疗的影响,因此,两者结合分析肿瘤的侵袭易受化疗的影响,因此,两者结合分析肿瘤的侵袭

行为和恶性程度会更加合理。行为和恶性程度会更加合理。

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Ki-67 LIKi-67 LI 在在 NBNB 中明显高于中明显高于 GNBGNB ,在,在 NBNB 分化差型分化差型中的表中的表达明显高于分化型;化疗影响达明显高于分化型;化疗影响 Ki-67Ki-67 的表达。的表达。

2

N-MycN-Myc 基因拷贝数增多在基因拷贝数增多在 NBNB 中较中较 GNBGNB 中多见,在中多见,在进展期(进展期( 33 、、 44 期)期) NBNB 中较早期(中较早期( 11 、、 22 、、 4S4S

期)期) NBNB 中多见中多见。。

1

3 Ki-67 LIKi-67 LI 在在 N-MycN-Myc 基因扩增组明显高于非扩增基因扩增组明显高于非扩增组。组。

结 论

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应该将应该将 N-MycN-Myc 、、 Ki-67 LIKi-67 LI 的检测作为的检测作为 NBNB 的常的常规检查。规检查。

5

N-MycN-Myc 基因拷贝数水平与基因拷贝数水平与 Ki-67 LIKi-67 LI 两者两者结合分析、评估结合分析、评估 NBNB 的侵袭行为和恶性度的侵袭行为和恶性度更加合理。更加合理。

4

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感谢聆听敬请指导