สไลด์�การสาธิตการทำ า Cellulose Acetate Electrophoresis

คณะผู้��จั�ด์ทำ า : 1. รศ. ด์ร. อาภั�สสรา ชู�เทำศะ 2. นายสมหมาย หอมสวาทำ

3. น.ส. อรพรรณ ส�งข์�ส�มฤทำธิ%

ภัาควชูาสร&รวทำยา คณะส�ตวแพทำยศาสตร� มหาวทำยาล�ยเกษตรศาสตร�

1

อ)างแชู)แผู้)น cellulose acetaterack วางแผู้)น cellulose acetate

2

applicator

ชู)องบรรจั+สารต�วอย)าง

ฐานวางแผู้)นcellulose acetate

3

อ)าง electrophoresis power supply

4

กระด์าษกรองหร-อ wick แผู้)น cellulose acetate และบ�ฟเฟอร�

5

ใส)สารละลายบ�ฟเฟอร�ประมาณ 100 ml ในอ)างข์�1วลบ6

ใส)สารละลายบ�ฟเฟอร�ประมาณ 100 ml ในอ)างข์�1วบวก7

ใชู�กระด์าษกรอง (wick) 2 แผู้)นทำ&2ชู+ )มด์�วยบ�ฟเฟอร�มาวางพาด์ตรงทำ&2ก�1นอ)างทำ�1ง 2 โด์ยปลายด์�านหน42งข์องกระด์าษกรองจั+)มอย�)ในบ�ฟเฟอร�ในอ)าง เพ-2อเชู-2อมระหว)างแผู้)น cellulose acetate ก�บบ�ฟเฟอร�ในอ)าง 8

การวางแผู้)น wick ในอ)างข์�1วบวก9

micropipette และสารต�วอย)างด์�ด์สารต�วอย)างใส)ลงในชู)องบรรจั+

10

ชู)องบรรจั+ม&สารต�วอย)างและสารมาตรฐานครบทำ�1ง 8 ชู)อง

ป5ด์ชู)องสารด์�วยแผู้)นสไลด์�เพ-2อป6องก�นการระเหย

11

ต�ด์ม+มหน42งข์องแผู้)น cellulose acetate เพ-2อให�ทำราบต าแหน)งข์องสารต�วอย)างและด์�านข์�1วบวก/ข์�1วลบ น าแผู้)น cellulose acetate มาวางใน rack

12

น าแผู้)น cellulose acetate มาแชู)ในสารละลายบ�ฟเฟอร�ตามเวลาทำ&2ก าหนด์

13

เม-2อครบก าหนด์เวลา น าแผู้)น cellulose acetate มาซั�บให�แห�งโด์ยใชู�กระด์าษกรอง หยด์น 1ากล�2นลงบนฐาน วางแผู้)น cellulose acetate ลงบนฐานน&1 โด์ยให�ด์�านทำ&2ต�ด์ม+มอย�)ตรงเส�น center application หร-อ cathode application (แล�วแต)กรณ&การแยกสาร)

14

กด์ applicator ลงในชู)องบรรจั+สารต�วอย)าง 3-4 คร�1ง น า applicator มากด์ลงบนแผู้)น cellulose acetate นาน 5 วนาทำ&

15

น าแผู้)น cellulose acetate มาวางพาด์ระหว)างอ)างทำ�1ง 2 โด์ยวางคว 2าหน�าใชู�แผู้)นสไลด์�กด์ทำ�บแผู้)น cellulose acetate เพ-2อให�ส�มผู้�สก�บกระด์าษกรอง

16

ป5ด์ฝาอ)าง เป5ด์เคร-2อง power supply ต�1งศ�กย�ไฟฟ6าและเวลาตามทำ&2ก าหนด์17

ส&ย�อม Ponceau S สารละลายล�างส&ย�อม methanolและสารละลาย clearing

18

ย�อมแผู้)น cellulose acetate ด์�วยPonceau S

ล�างส&ย�อมด์�วย acetic acid

19

ล�างส&ย�อมจัน background ไม)ตด์ส&แชู)แผู้)น cellulose acetate ใน methanol

20

แชู)แผู้)น cellulose acetate ในสารละลาย clearing

หล�งอบทำ&2 600C จัะได์�แผู้)นใส น าไปวเคราะห�ผู้ลต)อได์�

21

22

Hb

A

Carbonic anhydrase

A2

S

F

-

+

1 2

This result was run on pH 8.2-8.6 at 350 volts for 25 mins. Lane assingments: lane 1 = AFSA2 Hemo Control of Helena Laboratory, U.S.A. and lane 2 = Hbs of the Thai ridgeback dog from hemolysates

Hemoglobin Phenotype by Cellulose Acetate Electrophoresis

ทำ&2มา : Hemoglobins in Thai Ridgeback Dogs: Chromatographic, Electrophoretic and Mass Spectrometric StudiesJatuporn Noosud, Sittiruk Roytrakul, Chaiwat Boonkaewwan, Apassara Choothesa, KKU Vet J. 20(2) : 133-142, 2010