α-α- 氨基酸含量的测定氨基酸含量的测定（非水滴定法）

064 黄磊

α- 氨基酸的 α 位碳原子上连有氨基和羧基，为两性物质，在水溶液中的 Ka 和 Kb 很小，溶液的酸碱性均不明显（羧基 Ka ＝ 2.5×10－ 10 ，氨基 Kb ＝ 2.2×10 － 12 ），而且会互相干扰，在水溶液中无法被准确滴定，设计一个滴定 α- 氨基酸含量的方法。

• α- 氨基酸在水中的形式为：

C COOH

H

R

NH2

C COO-

H

R

NH3+

方法一：方法一： 在无水冰醋酸中用在无水冰醋酸中用 HClOHClO44 滴定滴定 α-α- 氨基氨基

酸中的氨基酸中的氨基 ::

• 冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都强，给出质子的能力强，相当于 α- 氨基酸中的氨基碱性增强：

• 在水中：

• 在 HAc 中：

• 醋酸的酸性比水强，易给出质子使弱碱质子化，滴定终点突跃较大。

2 3

2 2

NH HAc NH Ac

H Ac Ac HAc

2 3

3 2

NH COOH NH COO

H O COO COOH H O

测定过程：（ 1 ） HClO4 － HAc 滴定剂的配制： 冷至 25°C 的冰醋酸中缓慢加入 72 ％的 HClO4 溶

液，摇匀，再滴加一定量的醋酸酐，摇匀，冷至室温，可用冰醋酸稀释。

（ 2 ） HClO4 － HAc 滴定剂的标定： 准确称取定量的基准物 KHC8H4O4 ，溶于冰醋酸

中，以 0.2% 结晶紫的冰醋酸溶液为指示剂，从紫色滴定至蓝色。取同样量的同一溶剂作空白滴定。

（ 3 ） α- 氨基酸的滴定： 将试样溶于冰醋酸、醋酸酐中，以结晶紫为指示

剂，用上述标定好的滴定剂滴定至出现稳定的蓝色。 取同样量的同一溶剂作空白滴定。

氨基酸的含量＝

方法二：方法二： 在苯－甲醇混合液中用甲醇钠滴定在苯－甲醇混合液中用甲醇钠滴定 α-α-

氨基酸中的羧基：氨基酸中的羧基：

8 4 4KHC H O /( ) /

mM

V V M mV V

滴定 空白 滴定剂 氨基酸 试样

标定 空白 滴定剂（ ）

• 在水中：

• 在苯－甲醇中：

CH3O －碱性比 OH －强，和－ NH3＋反应比 OH －完

全，平衡常数大，滴定较完全，滴定突跃明显。

2 3

3 2 2

NH COOH NH COO

NH OH NH H O

2 3

3 3 2 3

NH COOH NH COO

NH CH O NH CH OH

测定过程：（ 1 ） CH3ONa 的苯－甲醇标准液的配制： 称取定量的纯金属钠，切片用无水甲醇洗净，分别多次

加入冷却的无水甲醇中，溶解后，加入苯稀释。（ 2 ） CH3ONa 的苯－甲醇标准液的标定： 准确称取苯甲酸基准物，溶于二甲基甲酰铵中，用百里

酚蓝为指示剂从黄色滴定至蓝色。（ 3 ） α- 氨基酸的滴定： 试样溶于苯－甲醇中，用百里酚蓝为指示剂，用标准液

滴定至黄色变为蓝色。

氨基酸含量＝6 5 V /C H COOH

mM

M mV

滴定剂（滴定） 氨基酸 试样( )滴定剂 标定

参考书目：参考书目： 杭州大学化学系分析化学教研室，分析化学手册杭州大学化学系分析化学教研室，分析化学手册

（第二版）（第二版） :: 第二分册：分析化学，化学工业出第二分册：分析化学，化学工业出版社，北京，版社，北京， 1997.1997.

武汉大学主编，分析化学（第二版），北京，高武汉大学主编，分析化学（第二版），北京，高等教育出版社，等教育出版社， 1982.1982.