培养基、试剂的配制及培养基、试剂的配制及细菌纯化培养细菌纯化培养

LBLB 培养基 培养基

配制配制 11 升培养基，应在升培养基，应在 950ml950ml 去离子水中加入：去离子水中加入： 细菌培养基用胰化蛋白胨细菌培养基用胰化蛋白胨 (bacto-tryptone) 10g(bacto-tryptone) 10g

细菌培养基用酵母提取物细菌培养基用酵母提取物 (bacto-yeast extract) 5g(bacto-yeast extract) 5g

NaClNaCl 　　 10g10g

摇动容器直至溶质完全溶解，摇动容器直至溶质完全溶解， 5mol/L NaOH(5mol/L NaOH( 约约 0.2ml)0.2ml)

调节调节 pHpH 值至值至 7.0,7.0, 加入去离子水至总体积为加入去离子水至总体积为 1L1L ，， 15 lbf/15 lbf/

inin22(1.034×10(1.034×1055Pa)Pa) 高压下蒸汽灭菌高压下蒸汽灭菌 2020 分钟。分钟。

STESTE

0.1mol/L NaCl0.1mol/L NaCl

10mmol/L Tris·Cl (pH8.0)10mmol/L Tris·Cl (pH8.0)

1mmol/L EDTA(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)

在在 15 lbf/in15 lbf/in22(1.034×10(1.034×1055Pa)Pa) 高压下蒸汽灭菌高压下蒸汽灭菌 2020 分钟。分钟。

溶液 溶液 II backback

50 mmol/L 50 mmol/L 葡萄糖葡萄糖 25 mmol/L Tris·Cl (pH8.0)25 mmol/L Tris·Cl (pH8.0)

10 mmol/L EDTA (pH8.0)10 mmol/L EDTA (pH8.0)

在在 10 lbf/in10 lbf/in22(6.895×10(6.895×1044Pa)Pa) 高压下蒸汽灭菌高压下蒸汽灭菌 1515 分钟，保分钟，保

存于存于 4℃4℃。。

溶液 溶液 IIII backback

0.2 mol/ L NaOH(0.2 mol/ L NaOH( 从从 5mol/L5mol/L 贮存液中现用稀释贮存液中现用稀释 ))

1% SDS1% SDS

溶液 溶液 IIIIII backback

5mol/L 5mol/L 乙酸钾乙酸钾 60ml60ml

冰乙酸冰乙酸 11.5ml11.5ml

水水 28.5ml28.5ml

所配成的溶液重钾的浓度为所配成的溶液重钾的浓度为 3mol/L3mol/L ，乙酸根的浓度为，乙酸根的浓度为 55

mol/Lmol/L 。。

3M3M乙酸钠乙酸钠 (pH5.2(pH5.2 ）） backback

在在 800ml800ml 水中溶解水中溶解 408.1g408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pp

HH 值至值至 5.25.2 ，加水定容到，加水定容到 1L1L ，分装后高压灭菌。，分装后高压灭菌。

0.5 mol/L EDTA (pH8.0)0.5 mol/L EDTA (pH8.0)

在在 800ml 800ml 水中加入 水中加入 186.1g EDTA-Na·2H186.1g EDTA-Na·2H22OO ，在磁力搅拌器，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用上剧烈搅拌，用 NaOHNaOH 调节溶液的调节溶液的 pHpH 值至值至 8.0 (8.0 ( 约约 20g NaO20g NaOHH 颗粒颗粒 )) ，然后定容至，然后定容至 1 L1 L ，分装后高压灭菌。，分装后高压灭菌。

1 mol/L Tris1 mol/L Tris··ClCl (pH8.0) (pH8.0) 在在 800ml 800ml 水中加入 水中加入 121.1g Tris-base121.1g Tris-base ，溶解后加浓，溶解后加浓

盐酸调节溶液的盐酸调节溶液的 pHpH 值至值至 8.0 8.0 ，定容至，定容至 1 L1 L ，分装后高，分装后高压灭菌。压灭菌。

TE(pH8.0)TE(pH8.0) backback

10 mmol/L Tris·Cl (pH8.0)10 mmol/L Tris·Cl (pH8.0)

1 mmol/L EDTA (pH8.0)1 mmol/L EDTA (pH8.0)

5050××TAETAE

242g Tris 242g Tris 碱碱 57.1 57.1 冰乙酸冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA (pH 8.0100ml 0.5mol/L EDTA (pH 8.0))

11××TAETAE 0.04 mol/L Tris-0.04 mol/L Tris- 乙酸乙酸 0.001 mol/L EDTA (pH 8.00.001 mol/L EDTA (pH 8.0))

器材器材 1. 1. 恒温摇床恒温摇床 2. 2. 超净工作台超净工作台 3. 3. 离心机离心机 4. 4. 电泳仪和电泳槽电泳仪和电泳槽 5. 5. 玻璃器皿与耗材 玻璃器皿与耗材

量筒、三角瓶、平皿量筒、三角瓶、平皿 ; ;

EPEP 管管 (1.5ml, 0.5ml); (1.5ml, 0.5ml);

枪头枪头 (1ml, 0.2ml, 10(1ml, 0.2ml, 10μlμl); );

牛皮纸、纱布、牙签等牛皮纸、纱布、牙签等

培养细菌： 将带有质粒的大肠杆菌接种到 1.5-3ml含有相应抗生素的液体培养基， 37℃培养 12～ 16小时（过夜） ;