《 医学遗传学 》 网络课程
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《医学遗传学》网络课程
主讲人:郭奕斌
中山医学院医学遗传学教研室
第十一章、遗传病的诊断
23/4/20 **** 《医学遗传学》 CAI 教学 **** 2
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第五节、基因诊断 基因诊断又称分子诊断,是运用分子生物学技术方法(如连
锁分析、分子杂交、 PCR 或 DNA 测序等 ) ,测定特定基因的存在与否或是否有缺陷或表达水平的变化情况,从而对被检者的状态或疾病做出诊断。和传统诊断不同,基因诊断是直接从基因型推断表型,即越过产物(酶和蛋白质)直接检测基因结构而做出诊断,改变了传统的表型诊断方式,故又称逆向诊断。它不仅可对患者做出直接诊断,还可在发病前做出症状前诊断,也可对有发病风险的胎儿做出产前基因诊断。
一、基因诊断的特点
1 、可越过蛋白质 / 酶直接检查基因的突变;
2 、了解遗传异质性,有效检出携带者;
3 、不受基因表达的时空限制;
4 、不受取材细胞类型和发病年龄的限制;
5 、针对性强,特异性高,灵敏度高,适应性强。
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二、基因诊断的条件:
1 、待测基因已被定位;
2 、基因的结构顺序已经弄清;
3 、基因的突变性质已经阐明;
4 、致病基因与遗传标记的连锁关系已经确定;
三、基因诊断材料: DNA 、 RNA 和蛋白质。 DNA 用于分
析基因的结构, RNA 和蛋白质用于分析基因的功能。
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四、基因诊断的途径
( 一 ) 直接诊断:直接检测特定基因是否存在结构异常。通常
使用基因内探针或紧密连锁的探针,或通过 PCR 扩增等,以
检测特定基因有无缺失、插入、碱基置换等突变。
1 、适用于已知基因异常的疾病诊断。
2 、常用方法:基因内探针杂交, PCR , ARMS , PCR-RE ,
PCR-ASO , PCR-SSCP , PCR-DHPLC ,测序。
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23/4/20 **** 省妇幼产前诊断提高班讲座 ****
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DHPLC 仪器设备
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DHPLC 筛检—示突变双峰峰形
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DHPLC 筛检—示正常单峰峰形
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DHPLCDHPLC 结果结果
① 父亲(正常);②母亲(携带者);③先证者
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插入 TT 的正向测序结果
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Exon9比对( F)
正 常正 常
杂合子杂合子
先证者先证者
女 胎女 胎
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( 二 ) 间接诊断:与致病基因连锁 / 紧密连锁的遗传标记一般
会与该基因一起传递。可通过家系分析待检者是否获得该
遗传标记,从而判断其是否获得致病基因。
1 、用于未知基因或未知基因突变。
2 、 常 用 方 法 有 : RFLP , STR , SNP , Amp-
FLP , PCR-SSCP , PCR-DHPLC 。
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3 、连锁分析时应注意的事项:
① 基因与标记物之间可能发生重组;
② 所选遗传标记在人群中的杂合度的高低;
③ 最好进行单倍型分析。
单倍型( haplotype )是指一条染色体上两个或两个以上多
态位点的状态组合,它有助于区分两条同源染色体并追踪致病
基因的分离情况。
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遗传病的基因诊断方法
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酶切分析或 VNTR分析示意图
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酶切鉴定结果
M. 100bp ladder
1. 野生型 COMP E10 的 PCR 产物( 284bp/284bp 纯合子)
2. 酶切野生型 COMP E10 的 PCR 产物( 100bp 和 184bp )
3. 患者 COMP E10 的 PCR 产物( 254bp/284bp 杂合子)
4. 酶切患者 COMP E10 的 PCR 产物( 100bp 、 184bp 、 254bp )
184
254
284300
200
100
M 31 2 4bp bp
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针对 c.262del 5 突变采用的普通引物及特异引物扩增产物的酶切电泳图
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图 50 D16S3121 多态性①父亲;②母亲;③先证者
STRs 连锁分析图
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