: נתנאל הפרויקט מבצעימנבר וזוהר מאיר

, המנחים: , דורית" פיזם צביה גולדויי מרטין ר דציון, בן איילת מגלי

: מנחה מפעל" אתרוג"

: המחקר הרכב המצע בצלחות הסלקציה למיון המושבות נושאהדרושות

במחקר החדרנו גן לתוך פלסמיד.

βאת הגן החדרנו לפלסמיד באזור שמקודד לגלקטוזידז.לכן בחיידקים שקלטו פלסמיד משובט

גלקטוזידז . β)שחדר אליו הגן( לא יווצר

גלקטוזידז הוא אנזים המפרק לקטוז לגלוקוז βהוגלקטוז, בניסוי הוספנו למצע חומר שהוא אנלוג

ובעת פירוקו נוצר צבע כחול.על ידי X-GALללקטוז –חומר זה נוכל להבדיל בין החיידקים שקלטו פלסמיד

גלקטוזידז לאלה שקלטו βלא משובט ויכולים לייצר פלסמיד משובט.

זרענו את החיידקים על צלחות הסלקציה עם הרכב מצעים שונה:

.LB מכילה–1קבוצה .LB+IPTG מכילה – אמפיצילין +2 קבוצה -LB+IPTG+X מכילה אמפיצילין+3 קבוצה

GAL. 370Cהמתנו לגדילת המושבות בטמפרטורה של

שעות.18למשך

. IPTGבנוסף הוספנו גם חומר שנקרא גלקטוזידז על β מאפשר את יצירת ה IPTGה

ידי החיידק מפני שהוא מחליף את המשרן באופרון הלקטוז, ומאפשר את סינטזת ה

mRNA של β.גלקטוזיזדז

: המחקר במיון שאלת מסייע המצע הרכב כיצדהדרושות ?המושבות

, LBרק בצלחות המכילות :השערה ניתן יהיה X-GAL ו IPTGאמפיצילין,

להבחין בין המושבות המשובטות ללא משובטות.

: תלוי הלבנות משתנה המושבות מספר , צלחת כל גבי על שגדלו אופן והכחולות

ידנית ספירה הוא . מדידתן

-החומרים שהוספו משתנים בלתי תלוייםלצלחות:

IPTG ו- X-GALאמפיצילין,

אינקובטור צלחות סלקציה

ממוצע מספר ממוצע מספר מושבות לבנותמושבות לבנות

ממוצע מספר ממוצע מספר מושבות כחולות מושבות כחולות

הרכב הרכב המצע המצע

00LBLBמרבד מרבד

0000LB+LB+אמפיצאמפיצIPTG+IPTG+יליןילין

1.51.51.751.75

LB+LB+אמפיצאמפיציליןילין+IPTG+X-+IPTG+X-GALGAL

ממוצע מספר מושבות כתלות בהרכב המצע

על פי הטבלה ניתן לראות שבצלחות ללא

אמפיצילין היה מרבד מושבות לבנות, ובאחת

אמפיצילין- +LB הצלחות שהכילו

IPTG+X-GALהיו מושבות בודדות בצבע

לבן וכחול בשאר הצלחות לא היו כלל מושבות. .

על פי הטבלה ניתן לראות שבצלחות ללא אמפיצילין היה על פי הטבלה ניתן לראות שבצלחות ללא אמפיצילין היה מרבד מושבות לבנות, ובאחת הצלחות שהכילו מרבד מושבות לבנות, ובאחת הצלחות שהכילו

LBLB++ -אמפיצילין- אמפיציליןIPTG+X-GALIPTG+X-GAL היו מושבות בודדות, בשאר היו מושבות בודדות, בשאר הצלחות לא היו כלל מושבות. הצלחות לא היו כלל מושבות.

ניתן לשער שהתוצאות המשובשות נגרמו כתוצאה מכך ניתן לשער שהתוצאות המשובשות נגרמו כתוצאה מכך שלא חלה כמעט טרנספורמציה. הסבה לכך כנראה היתה שלא חלה כמעט טרנספורמציה. הסבה לכך כנראה היתה

שהחיידקים הקומפנטנטים לא נשמרו בטמפרטורה שהחיידקים הקומפנטנטים לא נשמרו בטמפרטורה מתאימה. ובמעבר לביה"ס עברו שינויי טמפרטורה רבים. מתאימה. ובמעבר לביה"ס עברו שינויי טמפרטורה רבים.

ניתן ניתן IPTG+X-GALIPTG+X-GAL+ אמפיצילין- + אמפיצילין- LBLBבצלחת שהכילה בצלחת שהכילה לראות שגדלו מושבות לבנות סמוך לכחולות, מושבות אלה לראות שגדלו מושבות לבנות סמוך לכחולות, מושבות אלה

שעות לאחר הופעת המושבות הכחולות, מכך שעות לאחר הופעת המושבות הכחולות, מכך 2424גדלו כ – גדלו כ – ניתן להסיק שהמושבות הכחולות פירקו את האמפיצילין ניתן להסיק שהמושבות הכחולות פירקו את האמפיצילין

בסביבתם ולכן יכלו לגדול מושבות של חיידקים אשר אינם בסביבתם ולכן יכלו לגדול מושבות של חיידקים אשר אינם עמידים לאמפיצילין.עמידים לאמפיצילין.

על פי הספרות:על פי הספרות: הוא מצע אשר מתאים הוא מצע אשר מתאים LBLBבלבד-בלבד- LBLBמצעים המכילים מצעים המכילים בב

לתנאים שלהם זקוקים החיידקים, ניתן לשער שבצלחות לתנאים שלהם זקוקים החיידקים, ניתן לשער שבצלחות ללא אמפיצילין יגדלו מרבדי מושבות לבנות ללא פלסמיד ללא אמפיצילין יגדלו מרבדי מושבות לבנות ללא פלסמיד

כלל.כלל.

-נצפה לראות -נצפה לראות IPTGIPTG+אמפיצילין++אמפיצילין+ LBLBמצעים המכיליםמצעים המכיליםבבמושבות לבנות שעל פי המצופה כולן בעלות פלסמיד אך לא מושבות לבנות שעל פי המצופה כולן בעלות פלסמיד אך לא

ידוע אם הוא משובט או לא.ידוע אם הוא משובט או לא.

- -IPTGIPTG++X-GALX-GAL+אמפיצילין++אמפיצילין+ LBLBמצעים המכילים מצעים המכילים בבנצפה לראות מושבות כחולות ומושבות לבנות. הלבנות הן נצפה לראות מושבות כחולות ומושבות לבנות. הלבנות הן

המשובטות והכחולות לאהמשובטות והכחולות לא

הצעות לשיפור:הצעות לשיפור:על מנת שניסוי זה יצליח בעתיד אנו ממליצים להקפיד על מנת שניסוי זה יצליח בעתיד אנו ממליצים להקפיד

לשמור את החיידקים הקומפנטנטים בטמפ' מתאימה להם. לשמור את החיידקים הקומפנטנטים בטמפ' מתאימה להם. בנוסף אנו ממליצים לעשות מספר חזרות גדול יותר כדי בנוסף אנו ממליצים לעשות מספר חזרות גדול יותר כדי

שהתוצאות יהיו מדויקות ואמינות יותר.שהתוצאות יהיו מדויקות ואמינות יותר.

:// .http www hs. .ph biu. .ac il/ /prokaryotes backgroun

.dshtmlhttp://www.amalnet.k12.il/sites/genetic/

default.asp