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Instituto Politécnico de Leiria Escola Superior de Tecnologia do Mar
Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia
Docente: Clélia Afonso Trabalho elaborado por: Dora Silva Márcia Santos Maria Santos
Peniche, 17 de Junho de 2008
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Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia
Objectivo
Este trabalho tem como objectivo, observar e discutir a evolução do perfil
de fermentação de um composto com actividade antimicrobiano produzido por
Bacillus, utilizando uma técnica de doseamento de antibióticos e fazer a
apreciação lógica da mesma.
Resultados e Discussão
No decorrer de 8h de crescimento, foram-se retirando amostras
(sobrenadante) e congeladas a ≈ -20ºC, estando o resultado das respectivas
absorvâncias representadas na seguinte tabela:
Tabela 1 - Densidade óptica, ao longo do tempo do tempo de crescimento dos Bacillus. Tempo em
horas (h)
Densidade óptica da
cultura ( λ=260nm)
Diferença entre a densidade óptica
da cultura ao longo do crescimento
e a densidade óptica base (nm)
0 0,071 -----------
2 0,090 0,019
3:30 0,194 0,123
5 0,243 0,172
6 0,393 0,278
7 0,679 0,608
8 0,719 0,768
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Biotecnologia Farmacêutica Ano Lectivo 2007/2008 Biologia Marinha e Biotecnologia – ramo Biotecnologia
Através destes dados foi possível traçar uma recta que representaria a
relação do crescimento ao longo do tempo (produção de antimicrobiano) e
respectiva absorvância.
Figura 1 - Gráfico representativo da variação da absorvância ao longo do tempo, tendo em conta a diferença registada entre a absorvância inicial e as seguintes. Como se pode verificar pelas rectas, o crescimento dos bacilos vai
aumentando ao longo do tempo de forma exponencial. Sendo assim, pode-se
extrapolar que à medida que o tempo vai passando, e com este
aumento/crescimento de células, que a produção de compostos
antimicrobianos também deveria aumentar na mesma proporção.
Figura 2 - Fase preparatória das placas de petri e colocação dos discos (à direita) embebidos com os diferentes sobrenadantes.
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As imagens seguintes demonstram os resultados obtidos, para os meios
com E.coli e com leveduras, respectivamente, sendo que cada uma foi
incubada durante 24 horas.
Legenda: C) situação de controlo com água desmineralizada; 1) 2:00h
depois; 2) 3:30h depois; 3) 5:00h depois; 4) 6:00h depois; 5) 7:00h depois; 6)
8:00h depois e finalmente, 7) 24:00h depois.
Figura 3 - Placas de Petri, em meio NA, com E.coli após 24 horas de crescimento a 37ºC.
Figura 4 - Placas de Petri, em meio NA, com levedura (Saccharomyces cerevisiae) após 24 horas de crescimento a 27ºC.
Pode-se observar que não ocorreu inibição tanto na E.coli, como na
levedura por parte dos bacilos, havendo crescimento de colónias de bacilos na
4 e no 7, sendo neste, com maior diâmetro (em E.coli) e na levedura, colónias
em 1, 2, 4 e 7. Isto pode ter acontecido por múltiplos factores:
� A estirpe de bacilos encomendada ter vindo contaminada por agentes
microbianos, impossibilitando assim, a expressão da sua característica
antimicrobiana;
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� Produção de compostos, mas estes não apresentarem propriedades
antimicrobianas;
� Ter produzido algum composto antimicrobiano, mas tanto a E.coli como
a levedura ser resistente ao mesmo;
� Ou então, os bacilos não terem produzido qualquer substância com
capacidade terapêutica.
Uma possível justificação para o aparecimento das colónias verificadas
tanto para E.coli como para as leveduras, pode ser por erro do próprio
operador. Isto porque após cada centrifugação, era retirado o sobrenadante,
rejeitando-se de seguida o pellet, podendo ter ocorrido arrastamento de
algumas células de bacilos do pellet, induzindo assim um crescimento de
colónias na placa.
Conclusão
Sendo assim, não se conseguiu alcançar com sucesso o objectivo desta
actividade experimental, não se verificando a efeito antimicrobiano produzido
por bacilos.
No entanto, pode-se mencionar o que na teoria poderia ter dado como
resultado práticos:
• À medida que o tempo passava, e como foi possível verificar no
gráfico, com o aumento do número de células, a produção de
compostos antimicrobianos iria aumentar;
• Nas placas de petri, independentemente da presença no meio de
E.coli ou levedura, verificar-se-ia halos de inibição de forma
crescente desde o 1 até ao 7, sendo que o controlo não iria
apresentar halo de inibição.
• Verificar-se-ia que esta estirpe de bacilos produzia compostos
antimicrobianos que poderiam ser utilizados na indústria
farmacológica.
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Bibliografia
• Afonso C., Apontamentos das aulas teóricas 2007/2008
• http://pt.wikipedia.org/wiki/Bacilo
• www.frilabo.pt