Mикроскопски препарати,

хранителни среди

и някои практически тестове

по микробиология

Практически атлас

за студенти по медицина,

дентална медицина и фармация

Доц. д-р Мариана Мурджева, дм

Д-р Мария Атанасова, гл.ас.Катедра Микробиология и Имунология

Медицински Университет – Пловдив

2009г.

Съдържание

I. Микроскопски препарати с бактерии

1.1. Стафилококи (Грам)1.2. Стрептококи (Грам)1.3. Клостридии (Грам)1.4. Тетаничен бацил (Грам)1.4. Кандида (Грам)1.5.Чревни бактерии (Грам)1.6. Смесена култура (Грам)1.7. Кокобактерии (Грам)1.8. Чумен бактерий (Грам) 1.9. Холерен вибрион (Грам)1.10. Волутинови включения на дифтерийни бактерии (Найсер)1.11. Спори на антраксен бацил (Мьолер) 1.12. Спори на ботулинов бацил (Мьолер) 1.13. Храчка с туберкулозни бактерии (Цил-Нилсен)1.14. Кръвна натривка с пневмококи (Клет)1.15. Антраксен бацил с капсула (Клет) 1.16. Уретрален секрет с гонококи (метиленово синьо)1.17 Ликвор с менингококи (метиленово синьо)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

II. Хранителни среди с бактериални култури:1. Твърди среди

1.1.Кръвен агар със Staphylococcus aureus1.2. Кръвен агар със стрептококи1.3. Кръвен агар с Proteus1.4. Дезоксихолат агар с лактозо-положителни и лактозо-отрицателни колонии на чревни

бактерии

1.5. Левин с лактозо-положителни колонии на чревни бактерии1.6. Среда на Финлейсън с туберкулозни бактерии1.7. Шоколадов агар и Левинтал за менингококи и гонококи1.8. Сабуро с Candida1.9. Обикновен агар с аеробни бацили от род Bacillus1.10. Обикновен агар с Pseudomonas aeruginosa

2. Течни среди:2.1. Глюкозов бульон2.2.Тиогликолатна среда2.3. Селенитов бульон

III. По-важни тестове за идентификация на бактерии:1. Доказване на плазмокоагулаза2. Бацитрацинов тест3. САМР тест4. Оптохинов тест5. Оксидазен тест6. Среда на Клиглер7. IMVUC

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

I. Микроскопски препарати

на бактерии

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Стафилококиоцв. Грам, 100 х

(Грам /+/ пол. коки на групи)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Стрептококиоцв. Грам, 100 х

(Грам /+/ пол. коки във верижки)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Клостридииоцв. Грам, 100 х

(едри, груби Грам /+/ пол. пръчки)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Тетаничен бацилоцв. Грам, 100 х

(Грам /+/ пол пръчки с терминална кръгла или овална спора)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Кандидаоцв. Грам, 100 х

(едри овални Грам /+/ микроорганизми)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Чревни бактерииоцв. Грам, 100 х

(Грам /-/ отр. средни пръчки – характерна морфология за E.coli, Klebsiella, Proteus, Shigella, Salmonella)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Смесена култураоцв. Грам, 100 х

Грам /-/ отр. розово-червени пръчици (чревни бактерии) и Грам /+/ синьо-виолетовоо коки на групи (стафилококи)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Кокобактерииоцв. Грам, 100 х

(Грам /-/ отр. дребни пръчици – характерна морфология закоклюшни бактерии, хемофили, бруцели)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Чумен бактерийоцв. Грам, 100 х

(овоидни, дребни, биполярни Грам /-/ отр.пръчкикато “безопасни игли”)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Чумен бактерийоцв. Wayson, 100 х

(овоидни, дребни, биполярни сини пръчки

като “безопасни игли”)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Холерен вибрионоцв. Грам, 100 х

(запетайковидни или S-образни Грам /-/ отр. пръчкис една извивка – вибриони)

Дифтерийни бактерииоцв. Найсер за волутинови включения, 100 х

(средни пръчки, като гирички, разпръснати като карфици, с жълто-зелена цитоплазма и тъмносини волутинови включения)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Спори на антраксен бацилоцв. Мьолер, 100 х

(едри сини пръчковидни бактерии във верижки с централно-разположени недеформиращи червени спори)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Ботулинов бацилоцв. Мьолер за спори, 100 х

(едри пръчковидни бактерии със субтерминални деформиращиспори)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Храчка

с туберкулозни бактерииоцв.Цил-Нилсен, 100 х

(рубинено-червени средни пръчици сред синьо-оцветени клетки инормалната киселинно-неустойчива микрофлора)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Кръвна натривка с пневмококиоцв. Клет за капсула, 100 х

(диплококи с ланцетовидна форма и светло хало /капсула/ средкръвните клетки. Бактериите са с извънклетъчно разположение)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Препарат от слезка с антраксни

бацилиОцв. Клет за капсули, 100 х

(пръчковидните бактерии, оцветени в синьо, са разположени въвверижки, обвити с общ розов ореол - капсулата)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Уретрален секрет с гонококиоцв.метиленово синьо, 100 х

(хиперхромни тъмносини диплококи с бъбрековидна форма, локализирани вътреклетъчно в неутрофилните левкоцити при остра

форма на гонорея)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Ликвор с менингококиоцв.метиленово синьо, 100 х

(хиперхромни тъмносини диплококи с бъбрековидна форма, локализирани вътреклетъчно в неутрофилните левкоцити)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

II. Хранителни среди

с бактериални култури

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Кръвен агарс култури на: А. S. aureus (гладки кремави /златисти/ колонии,

понякога с бета-хемолиза) и Б.S. epidermidis (бели, нехемолитичниколонии)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

А Б

Кръвен агарс култури на: алфа- и бета- хемолитични стрептококи

А. дребни росовидни колонии с алфа /зеленееща/ или Б.бета /пълна, прозрачна/ зона на хемолиза

А БКръвен агар

Кръвен агарс култура на Proteus

(дъхов, пълзящ растеж)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Дезоксихолат агарс лактозо-положителни и лактозо-отрицателни колонии на

чревни бактерии

лактозо-положителните бактерии /E.coli, Klebsiella/ образуватрозови колонии (3), а лактозо–отрицателните /Salmonella,Shigella/ -

безцветни. Салмонелните колонии са с черен център отобразувания сяроводород (1), а шигелните – само безцветни (2)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Левинс лактозо-положителни колонии на чревни бактерии

лактозо-положителните бактерии /E.coli, Klebsiella/ образуватмастилено-сини колонии (А), а лактозо–отрицателните /Salmonella,

Shigella/ - безцветни или розови като средата

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

А

Среда на Финлейсънс туберкулозни бактерии

(R-колонии, като трохи, пигментирани, бавно-растящи)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Шоколадов агар(твърда среда с топлинно лизирана кръв;

за култивиране на хемофили, менингококи и гонококи)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Сабурос култура на Candida

(кремообразни колонии)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Обикновен агар

с култура на аеробни бацили от род Bacillus - груби R-колонии

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Обикновен агарс култура на Pseudomonas aeruginosa

(синьозелен пигмент)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Глюкозов бульон1. с посявка на стафилококи (дифузна мътнина)

2. незасят (бистър)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Тиогликолатен бульонА. Незасят (бистър)

Б. Посявка с анаероби (придънен растеж с мътнина)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

А Б

Селенитов бульон(за култивиране на салмонели)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

1. Посявка със салмонели – средата се променя в

червено

2. Незасята (бистра) среда

1 2

III. По-важни тестове

за идентификация на бактерии

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Доказване на плазмокоагулаза -главен патогенен фактор на Staphylococcus aureus. При култивиране

на изолата в цитратна заешка плазма след 2 до 6ч. на 37 Сотделеният ензим коагулира плазмата

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

1. Отрицателна проба–

при накланяне на

епруветката със

стафилококи плазмата е

течна

2. Положителна проба–

епруветката е с

коагулирала плазма

1 2

Бацитрацинов тестза ориентировъчна идентификация на Streptococcus pyogenes; чувствителен на бацитрацин при култивиране в кръвен агар с

бацитрацинов диск (А); около зоната на диска липсва растеж

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

САМР тестза идентификация на бета-хемолитични стрептококи от гр. В

(напр. S. agalactiae) – при култивирането им със S. aureus накръвен агар, се усилва зоната на бета-хемолиза на стафилокока

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Оптохинов тестза идентификация на пневмококи; чувствителни на оптохин прикултивирането им в кръвен агар - около диска с оптохин няма

характерният растеж с алфа-хемолитични колонии

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

S. pneumoniae,

Оптохин /+/

Оксидазен тестза идентификация на найсерии (гонококи, менингококи) и

псевдомонас – образуваният ензим оксидаза се доказва по чернотооцветяване на културата при накапване със съответен реактив

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

Среда на Клиглертвърда среда за биохимична идентификация на Грам /-/ чревни бактерии –

E.coli, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shigella.Показва способността на бактерия за ферментация на глюкоза

(в правия стълбец), ферментация на лактоза (в полегатия стълбец), образуване на сяроводород (черно оцветяване) или друг газ (въздушен

мехур)

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

1. Неферментиращ бактерий - гл/-/, лак/-/,

H2S/-/, газ /-/

2. Протеус – гл/+/, лак/-/, H2S/+/, газ /-/

3. Klebsiella – гл/+/, лак/-/, H2S/-/, газ /-/

4. E.coli - гл/+/, лак/+/, H2S/-/, газ /+/

IMVUC тестза идентификация на чревни бактерии

Катедра Микробиология и Имунология, МУ – Пловдив

I - Индол /+/ при E. coli; /-/ при K. pneumoniae

M – Метил-рот /+/ при E. coli; /-/ при K. pneumoniae

V – Фогес-Проскауер /+/ при K. pneumoniae; /-/ при E. coli

U – Урея /+/ при K. pneumoniae, Proteus;

/-/ при E. coli, Salmonella, Shigella

C – Цитрат /+/ при K. pneumoniae, Proteus;

/-/ при E. coli, Salmonella, Shigella

Urea +Urea -