Post on 18-Jun-2015
Pewarnaan bakteriBacteria staining
SHERWIN ARMANDA, S.Si.
LABORATORIUM MIKROBIOLOGIFAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS HASANUDDIN
Prinsip Pewarnaan/Pengecatan
• Bakteri bermuatan negatif (kandungan NH4-). Salah
satu mekanisme pewarnaan yaitu ionisasi. Zat pewarna terbagi menjadi dua:
• 1. Basa, bila zat warna yang digunakan memiliki muatan pada bagian kationnya. Contoh: kristal violet, metilen biru, karbol fuksin, fuksin basa.
• 2. Asam, bila zat warna yang digunakan memiliki muatan pada bagian anionnya. Contoh: Eosin, merah kongo, Sudan III, Sudan IV
Pembagian Pengecatan1. Morfologi
- Pengecatan sederhana- Pengecatan negatif
2. Diferensial- Pengecatan Gram- Pengecatan Tahan Asam
3. Khusus- Pengecatan Kapsul - Pengecatan Flagel- Pengecatan Spora
Morfologi…
1. Pengecatan SederhanaHanya menggunakan 1 pewarna saja.
Contoh: Kristal violet, Metilen biru, Karbol fuksin,
2. Pengecatan NegatifProses pewarnaan bukan terhadap sel namun lingkungan disekitaran sel mikroorganisme
Teteskan nigrosin di ujung objek gelas
Masukkan inokulan dari ose
Objek gelas lain diletakkan disebelah luar nigrosin dengan posisi miring (300)
Geser perlahan hingga membentuk lapisan tipis
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
Negatif
1 ose suspensi biakan bakteriRatakan diatas gelas objek
Fiksasi
Tetesi metilen biru 1-2 tetesBiarkan 1-2 menit
Cuci dengan air mmengalir
(Sisa air dikeringkan dengan tisu)
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
Sederhana
Diferensial…
• Pengecatan Gram.Untuk membedakan Gram positif dan
negatif. Ada 4 proses pewarnaan yaitu pewarna utama, penguatan pewarna, dekolorisasi, pewarna penutup.
• Pengecatan Tahan AsamDisebut dengan pewarnaan Ziehl-
Neelsen. Membedakan mycobacterium dan Nocardia yang memiliki kandungan asam mikolat dalam lipidnya. Prinsipnya hampir sama dengan Gram, namun tidak ada proses penguatan pewarna.
Preparat olesan
+ Gram A (kristal violet)
Fiksasi
+ Gram C (Etil alkohol)
+ Gram B (Larutan Iodin)
Biarkan 20 detik, cuci 2 detik
Biarkan10 - 20 detik, cuci 2 detik
+ Gram D (Safranin)
Keringkan dengan kertas saring/tisu
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 40
Preparat olesan
+ Karbol Fuksin
Fiksasi
+ Metilen biru
+ Alkohol asam
Panaskan 1-2 menit, dan bilas dengan air mengalir
Biarkan10 - 20 detik, cuci 2 detik
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
bilas dengan air mengalir
Khusus…
1. Pengecatan SporaSpora merupakan bentuk pertahanan
bakteri dari pengaruh panas dan bahan kimia. Contoh bakteri yang memiliki spora: Bacillus, Clostridium, Sporasarcina. Dua metode pewarnaan spora yaitu Schaeffer-Fulton dan Dorner
Preparat olesan
+ Hijau Malakit
+ Safranin
Panaskan 5 menit, dan diamkan 1 menit.
Lepaskan kertas saring, Cuci air mengalir
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
Diamkan 1-2 menit, bilas dengan air mengalir
Tutup dengan kertas saring
Schaeffer-Fulton
Dorner
Oleskan Preparat
+ 5 tetes karbol fuksin
Lakukan seperti pengecatan negatif
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
Suspensi m.o
Tabung reaksi yang berisi 0,5 ml air steril
Panaskan dengan bekker yang berisi air mendidih
2. Pewarnaan KapsulKapsul merupakan lapisan polipeptida
atau polisakarida yang melekat diluar sel. Proses pewarnaan kapsul tidak semudah pewarnaan sederhana, pemanasan berlebihan menyebabkan kapsul pecah dan tidak adanya pemanasan menyebabkan kapsul akan tercuci.
Preparat olesan bakteriRatakan diatas gelas objek
Fiksasi
+ kristal violetBiarkan 1-2 menit
Panaskan diatas penangas air selama 1 menit
Amati dibawah mikroskop dengan perbesaran 10 x 100
Bilas dengan CuSO4
Keringkan dengan kertas saring
REFERENSI
1. Benson. Microbiology Applications Laboratory Manual in General Microbiology eigth edition. McGraw-Hill Companies. 2001.
2. Prescott M Lansing, Herley, Klein. Microbiology 5th . McGraw-Hill Companies. 2002.
3. Lay, W Bibiana.Analisis Mikroba di Laboratorium. PT. Raja Grafindo Persada. Jakarta. 1994
BAT ASAN MATERI
1. Morfologi bakteri2. Perbedaan Gram Positif dan Gram Negatif3. Jenis-jenis zat pewarna berdasarkan sifat
kimia4. Mekanisme Pewarnaan Bakteri.
TERIMA KASIH