Post on 14-Jan-2016
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Óxido Nítrico Sintetase
E o seu papel na inflamação
OXIDO NITRICO SINTASE ENDOTELIAL
INFLAMACAO - defesa do organismo comum em muitas patologias aparentemente distintas.
PROCESSO INFLAMATORIO - eh iniciado por complexas series de eventos, sendo os passos prévios fundamentais mudanças vasculares que começam imediatamente e se desenvolvem nas primeiras horas.
eNOS (oxido nítrico sintase endotelial) e NO (oxido nítrico) ligados a permeabilidade vascular envolvidos na inflamação
Mediadores envolvidos em mudanças na permeabilidade vascular
Histamina 5-HT Bradicinina Prostaglandinas Óxido nítrico (NO)
Citocininas inflamatórias
Fatores de crescimento
Mediadores iniciais
Histamina
liberados rapidamente
armazenados nas células
5 – HT
Fator de necrose tumoral induz
iNOS produz
óxido nítrico (NO)
aumenta a permeabilidade vascular
Tipos de óxido nítrico sintetase
Óxido nítrico sintetase neural (nNOS) Óxido nítrico sintetase endotelial (eNOS) Óxido nítrico sintetase indutível (iNOS)
Óxido Nítrico Sintetases - NOS
NO é gerado pelo metabolismo da Arginina
Arginine + Ca2+ + Nitric Oxide Synthase
Nitric Oxide
Óxido Nítrico Sintetases - NOS
3 Formas: Neural (n-NOS)
Endotelial (e-NOS)
Indutível (i-NOS)
Óxido Nítrico Sintetases - NOS
i-NOS
- Contolada por mediadores inflamatórios e citocinicas
- Produz quantidades (desreguladas) de NO
e-n-NOS
- Produzem quantidades
Características desta enzimas Estrutura tridimensional e-n-NOS contém sítios autoinibitório que é
regulador da sensibilidade de Ca++ Possui um N-terminal que corresponde ao sítio de
ligação para vários grupos, como: heme, arginina e hidrobiopterina (BH4). Estes grupos são ligados através de seu carbono terminal ao N-terminal e tal ligação é regulada por calmodulina.
eNOS: Uma Enzima de Indução
Aumento da concentração de eNOS em células endoteliais humanas:
Fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF);
Modulador de receptor de estrógeno seletivo; Exercícios físico (aumenta a expressão de RNAm
que codifica eNOS; Neurite autoimune (células endoteliais e de
Schwann nos nervos ciáticos).
Reguladores de eNOS:
Dinâmicos alvos subcelulares; Interações de proteína-proteína; Fosforilações; Estimulação de Ca2+ dependente-independente; Autocóides (danos no tecido e mudança do fluxo
sanguíneo).
Reguladores da atividade de eNOS CAV-1- Forma um inibidor fisiológico de e-NOS. É uma
proteína que regula respostas vascvulares a NO. CaM e CaM co-imunoprecipates HSP90 (Heat shock protein 90) –
Liga ao NO e NOS o ativa. Aumenta a sua atividade e a liberação de NO.
Influencia a fosforilação e a junção de e-NOS ao HSP 90 e CaM
Fosforilação proteíca
e-NOS é primariamente fosforilada em resíduos de serina, tirosina treonina. A serina cinase B fosforila diretamente e-NOS na 1177 Ser (e-NOS humano) que aumenta a atividade de e-NOS.
Funções do e-NOS na Inflamação
e-NOS é fonte dinâmica de NO, abastecem as células constantemente
i-NOS produz grande quantidade de NO
Produz os efeitos Patológicos do NO
Os 2 principais linhas de pesquisa
1- in vitro ou admistração in vivo de NO exogénos 2- Utilizando inibidores de NOS
Pontos fracos
Formas de Investigação
Usando e-NOS, i-NOS, n-NOS “inválidas” em camundongos
Microsópio intravital
O nº de Rolagem de Leucócito = iNOS Microscopia de Contraste
Se há estimulação há de rolagem:
i-NOS (2x) e eNOS (6x)
Ferramentas farmacológicas
Falta de seletividade dos inibidores para as isoformas;
nNOs, eNOs e iNOs.
Ação variável: local e tempo de ação
Falta de estudos na regulação e modulação de Nos
eNOs Cav 1
HPS 90 e calmodulina (CaM) fosforilação de eNOs
eNOs fosforilado forma ativa
Ap-Cav (derivado Cav-1) liga-se ao eNOs
-anti-inflamatório inibindo o NO
Drogas: Geldanamicina & Radicicol(efeito semelhante)
Wortmannin & LY294002(efeito contrário) -inibe a fosforilação de eNOs fosfatidilinositol 3-
cinase
Síntese de eNOs(Cav 1) síntese de Ap-Cav
Inibe os efeitos: hemorragias,vasodilatação, edema, etc.
Mecanismo de modulação
-modificação estrutural da proteína, via Ap-Cav- inibição da fosforilação (fosfatidilinositol 3-cinase)
pelas drogas(Wortmannin e LY294002).
Considerações Finais