Post on 29-Jun-2015
NORTHERN BLOT
PLANT DE TRAVAIL
Introduction
1-Historiqu
e
2-Définitio
n
3-Utilisation
4-Principe
5-Protocol
6-Avantage
s et inconvén
ients
INTRODUCTION
Nos connaissances actuelles sur les événements
biologiques qui se produisent dans les cellules des
organismes vivants peut être attribuée à l'existence de
beaucoup techniques de laboratoire utilisées dans
l'étude de ces processus.
Parmi ces techniques est la technique
’’Northern blot’’ est très utile dans l'analyse de l'ARN .
La plupart des informations disponibles qui sont
connaissons aujourd'hui sur l'expression des gènes et
les fonctions d’ARN peuvent être attribués à ce
technique.
1-HISTORIQUE
Northern blot est une technique d'ARN blot qui a
été développé en par Alwine, Kemp, et Stark en
1977 à l'Université Stanford .
Il a été nommé d'après le Southern blot technique
qui détecte pour l'ADN, inventé par Edwin M.
Southern en 1975.
Western blot , une méthode pour des protéines est
également une pièce de théâtre sur la
dénomination Southern blot et a été nommé en
1981
2-DÉFINITION
Une méthode de laboratoire utilisée pour
détecter des molécules d'ARN spécifiques au
sein d'un mélange d'ARN.
Northern blot peut être utilisé pour analyser
un échantillon d'ARN à partir d'un tissu ou
un type particulier de cellule afin de mesurer
l'expression de gènes d'ARN spécifiques.
3-UTILISATION
la recherche en biologie moléculaire : l'étude directe de l'expression des gènes au
niveau de l'ARNm détection de la taille de transcription ARNm étudier la dégradation des ARN étudier épissage de l'ARN peut détecter des
transcrits d'épissage alternatif étude la demi-vie de ARN IRES étude (site d'entrée interne des ribosomes)
Pour supprimer la possibilité de la digestion d'ARN
souvent utilisé pour confirmer et de vérifier transgéniques
4-PRINCIPE
1. Séparation des ARN sur gel par électrophorèse
2. Transfert des ARN sur membrane (capillarité)
3. Hybridation de la membrane avec une sonde spécifique du gène d’intérêt
5-PROTOCOL
6-AVANTAGES ET INCONVINIENS
AVANTAGES : la détection de la taille d'ARN. l'observation des produits d'épissage
alternatifs d’ARN. l'utilisation de sondes ayant une
homologie partielle. la qualité et la quantité d'ARN peut être
mesurée sur le gel avant buvard, et les membranes peuvent être stockées et sondé pendant des années après buvard.
L’expression des marqueurs tumoraux spécifique par hybridation ARN –ADN
INCOVINIENTS:
La dégradation de l'échantillon par ARNases qui
peuvent être évitées par une bonne stérilisation de la
verrerie et l'utilisation des inhibiteurs de RNase comme
DEPC
( diéthylpyrocarbonate).
Les produits chimiques utilisé dans la plupart des
taches du Northern peut être un risque pour le
chercheur, comme le formaldéhyde, les matières
radioactives, le bromure d'éthidium, DEPC, et la lumière
UV sont tous nuisibles dans certaines expositions.
CONCLUSION
Northern blot, même si une technique relativement
ancienne est encore aujourd'hui utile dans l'étude et
l'analyse de l'ARN. Cette situation est attribuable à sa
flexibilité ,simplicité.
Il exige essentiellement que l'ARN extrait est soumis à un
gel électrophorèse, qui est ensuite blotter à une membrane
solide
, puis hybridé avec la sonde appropriée qui aide à la
l'identification et l'analyse de la molécule d'ARN.
La technique s'est avérée utile et indispensable dans
létude
et l'analyse de molécules d'ARN dans les cellules de la vie
organismes. L'application de cette technique dans l'ARN lié
demandes de renseignements devrait se poursuivre dans
plusieurs décennies à venir.
MERCIE POUR VOTER ATTENTION