DYNAMIC MITHOCONDRIA

ESTUDI EN LLEVATS

INTRODUCCIÓ

• Què és un llevat?

• El seu metabolisme:

- Fermentació

- Respiració

- Efecte Crabtree

OBJECTIUS DE LA INVESTIGACIÓ

• Demostrar que el metabolisme energètic dels llevats influeix en els canvis de forma i/o en la distribució dels seus orgànuls, en aquest cas el seu mitocondrioma.

• Verificar l’existència de l’efecte Crabtree.

PART PRÀCTICA:

Per què s’ha treballat amb la cèl·lula de llevat Saccharomyces cerevisiae?

• És fàcilment manipulable en el laboratori.

• És un organisme no patogen i pot ser manipulat sense precaucions especials.

• Creix ràpidament en medis de cultiu relativament poc complexos i econòmics.

• Comparteix molts dels processos cel·lulars d’organismes més complexos.

PART PRÀCTICA:

PROTOCOL DE L’EXPERIMENT

Què es va fer ?

• Es va estudiar el comportament de les cèl.lules de llevat en diferents condicions (concentració de sucres i presència d’oxigen). Per tal de verificar o falsejar les hipótesis planteadas.

Com es va fer?

• Rehidratació dels llevats i preparació dels quatre cultius en les diferents condicons.

• Extracció, tinció i observació de les mostres.

• Es pesen els llevats (secs).

• Es rehidraten els llevats amb aigua destil·lada.

• Es posen a la incubadora a 37 ̊̊��C durant 30 minuts.

• Es preparen els quatre cultius en les diferents condicions.

• S'inoculen els llevats rehidratats en els diferents cultius.

• Taula dels diferents cultius:

   CULTIU

   [ ] GLUCOSA

   OXIGEN

 1r

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Alta

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊No

 2n

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Baixa

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Sí

 3r

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Baixa

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊No

 4t

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Alta

  ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊ ̊̊Sí

• Per últim es disposen els cultius en la incubadora de nou a una temperatura de 28 ̊̊��C.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 100

1

2

3

4

5

6

g llevats/ ml solució

[ ̊̊] ̊̊llevats ̊̊en ̊̊el ̊̊medi

Temps ̊̊(h)

[ ̊̊] ̊̊de ̊̊llevats ̊̊en ̊̊el ̊̊medi

• S’extreuen mostres de cada cultiu.

• Es preparen les mostres per tal d’observar-les amb més precisió.

• Es tenyeixen les mostres amb el tint Fluorocrom DIOC.

• S’observen les mostres al microscopi de fluorescència.

• En el primer cultiu, els llevats es troben amb una alta concentració de glucosa i sense oxigen.

OBSERVACIÓ EN EL MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA

• En el segon cultiu, les cèl·lules es troben amb una baixa concentració de glucosa i amb la presència d’oxigen.

• En el tercer cultiu, les cèl·lules de llevats es troben amb una baixa concentració de glucosa i sense presència d’oxigen.

• En el quart cultiu, les cèl·lules dels llevats estan amb una alta concentració de glucosa i amb la presència d’oxigen.

CONCLUSIONS

El metabolisme energètic dels llevats condiciona la disposició del mitocondrioma en el citoplasma.  

S’ha comprovat que existeix l’efecte Crabtree en les cèl·lules que, tot i que tenen presència d’oxigen, estan en un medi amb una alta concentració de sucres.

 

GRÀCIES PER LA SEVA ATENCIÓ.