Licda. Yarisel Rodríguez

Mgtra. Dalis Mojica

ICGES/LCRSP

PROGRAMA DE EVALUACIÓN

EXTERNA DE LA CALIDAD

SUPERVISIONES PRUEBAS DE

PROFICIENCIA

CONTROL DE CALIDAD

INDIRECTO

RED NACIONAL DE DENGUE

No hay laboratorios de la red

Evaluación de los Kits comerciales para diagnóstico que

ingresen a Panamá (Decreto 148 del 9 de agosto de 1999 (gaceta oficial 23868)

Guzman et al., Nature Rev, 2011

ACCESIBILIDAD

CONFIABILIDAD

MÉTODOS DIRECTOS MÉTODOS INDIRECTOS

Aislamiento

Viral

Detección del

genoma

Detección de

antígeno

Serología

IgM

Serología

IgG

MUESTRAS: Suero

Momento de recolección:

- 5 a 21 días

CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C)

DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológia: (Fecha de inicio de los síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.)

CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD

IMPORTANTE EVITAR CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO

DE LAS MUESTRAS

MUESTRAS: Suero (1ml) o sangre completa (sin aditivos o con gel)

Momento de recolección:

> 9 días de inicios de síntomas hasta 45 días

CADENA DE FRÍO: Muestras < 4 días (4-8ºC) y > 4 días (-20º C)

DATOS COMPLETOS : Formulario único de vigilancia epidemiológica (Fecha de inicio de síntomas, Fecha toma de muestra, Historia de viajes, etc.)

CONDICIONES DE BIOSEGURIDAD

Transmisión de CHIKV: Por picaduras de artrópodos infectados.

Protegerse: ropa, mosquitero impregnado, repelente e insecticida

CHIKV es un agente de bioriesgo de nivel 3, La viremia es más alta y

se transmite más facilmente que el dengue (sangre-piel). Se considera que se pueden transmitir por el contacto con animales infectados, sangre, suero, plasma y tejidos

Durante toma de muestra y manipulación: Equipo de protecciónpersonal: guantes, bata, mascarilla, lentes protectores o mascara protectora

de rostro. Diagnóstico molecular o de serología: BSL2, aislamiento BSL2* o BSL3

Las muestras deben enviadas como material potencialmenteinfeccioso, utilizar guantes cuando se manipulan

Toda muestra sospechosa o todo instrumento en contacto con esas muestras:

descartar en basuras de bioriesgo

IgG

IgMViremia Viremia

Signos y síntomas Signos y síntomas

Vaughn, 2005

ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE DENGUE EN LA RED NACIONAL DE DENGUE

LABORATORIO DE LA RED NACIONAL DE DENGUE

RECIBE PACIENTE CON FORMULARIO COMPLETO

CLASIFICA MUESTRAS

5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS

DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS IgM/IgG

PRUEBA DE ELISA

*Los casos con sospecha de Dengue Grave deben ser enviados inmediatamente al ICGES previa notificación aEpidemiología local y al ICGES.

NEGATIVO

DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO-Detección del AgNS1 - Pacientes hospitalizados - Vigilancia del serotipo circulante-Enviar muestra al ICGES

POSITIVO

REPORTAR

CITAR AL PACIENTE PARA II MUESTRA

EN FASE CONVALESCIENTE

ENVIAR 10% DE MUESTRAS PARA CONTROL DE CALIDAD Y

VIGILANCIA VIROLÓGICA AL ICGES*

ENVIAR 10% DE MUESTRAS PARA

CONTROL DE CALIDAD AL ICGES

4 DÍAS DE SÍNTOMAS*

NEGATIVOPOSITIVO

REPORTAR REPORTAR

NO TOMAR MUESTRA Y CITAR AL PACIENTE PARA TOMARLA DEL DÍA 5 AL 21 DE INICIO DE

SÍNTOMAS

0-3 DÍAS DE SÍNTOMAS

MUESTRAS ENVIADAS POR LOS LABORATORIOS DE LA RED NACIONAL DE DENGUE AL INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD

CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS

0-4 DÍAS DE SÍNTOMAS

CASO CONFIRMADO

5-21 DÍAS DE SÍNTOMAS

POSITIVO

CASO CONFIRMADO

NOTA: Los Laboratorios de la Red enviarán el 10% de muestras Negativas y Positivas para detección de anticuerpos IgM e IgG y Antígeno NS1, además las muestras agudas para vigilancia virológica de acuerdo a lo establecido en los lineamientos para la temporada baja y de brote de casos de dengue.

NEGATIVO

PRUEBAS SEROLÓGICAS

NEGATIVO POSITIVO

REPORTAR

RT-PCR TIEMPO REAL *

REPORTAR REPORTAR

* En caso de agotarse los reactivos para RT-PCR Tiempo Real, las muestras serán analizadas mediante cultivocelular, del cual se obtienen resultados entre los 14 a 30 días.

REPORTAR

Versión 2013

ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE CHIKUNGUNYA EN EL ICGES

MUESTRAS ENVIADAS POR LAS INSTALACIONES DE SALUD A NIVEL NACIONAL AL INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD

CLASIFICACIÓN DE MUESTRAS

0-8 DÍAS DE SÍNTOMAS

CASO CONFIRMADO

Mayor o igual a 9 DÍAS DE SÍNTOMAS (PRIMERA MUESTRA)

POSITIVO

CASO CONFIRMADO

NEGATIVO

ELISA IgM CASERA PARA CHIKV O COMERCIAL CON R.S

NEGATIVO POSITIVO

REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*

RT-PCR TIEMPO REAL CHIK V *

REPORTAR REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*

* LA SEGUNDA MUESTRA DEBE OBTENERSE DOS SEMANAS DESPUÉS DE TOMADA LA PRIMERA MUESTRA.

POSITIVO

SOSPECHOSO

POSITIVO

SOSPECHOSO

REQUIERE SEGUNDA MUESTRA*

NEGATIVO

REPORTAR

NEGATIVO

INDETERMINADO

Versión 2014

SencillaGran cantidad de suerosDiagnóstico de rutinaAmpliamente distribuídaDiagnóstico rápidoELISA (formato más común)Infección reciente

Standard test: Detección de IgM e IgG

Serum

Saliva

Filter paper

MUESTRAS

La prueba de ELISA de captura contra Acs IgM para Dengue utilizada en la red no distingue entre Infección primaria o secundaria.

IgM

La prueba de ELISA de captura contra Acs IgG para Dengue utilizada en la red sólo es positiva en casos de Infección Secundaria.

Ig G

• MUESTRAS DEL DÍA 4 NO SE DEBEN PROCESAR EXCEPTO CASOS FATALES , GRAVES UHOSPITALIZADOS.

• LOS LINEAMIENTOS DE LABORATORIO SOLO APLICAN PARA LAS MUESTRAS NO PARAMANEJO CLÍNICO.

• CONTROL DE CALIDAD (ENVIAR AL ICGES):– 10% DE MUESTRAS POSITIVAS Y NEGATIVAS EN EL DX DE ACS– 10% DE POSITIVAS Y 10% DE NEGATIVAS EN EL DX DE NS1

• VIGILANCIA VIROLÓGICA (ENVIAR AL ICGES):– EN TEMPORADA BAJA: TODAS LAS MUESTRAS AGUDAS (O-3 DÍAS DE SÍNTOMAS)– EN BROTE O EPIDEMIA: SÓLO EL % DE MUESTRAS QUE ESTIPULE EPIDEMIOLOGÍA.

• ES OBLIGATORIO EL USO DEL FORMULARIO UNICO PUES CONTIENE VARIABLESNECESARIAS PARA LA TOMA DE DECISIONES EN LA REALIZACIÓN DE LAS PRUEBAS DELABORATORIO.

• SE REQUIERE UNA COMUNICACIÓN Y COORDINACIÓN PERMANENTE ENTRELABORATORIO, EPIDEMIOLOGÍA Y CLÍNICOS PARA EL ADECUADO USO DE LAS PRUEBASY RECURSOS DE LA INSTALACIÓN.

ELISA IgM DE CAPTURA -ELISA Casera (Protocolo del CDC)

ELISAs COMERCIALES (IgM, IgG)-En proceso de registro sanitario

HRPHRP

1. Coat With Goat anti-Human IgM

4°Overnight

2. Add Patient Serum @ 1:400

37°@ 1 Hour

3. Add Antigen4° Overnight

4. Add HRP anti-group McAb

37° 1 Hour

• Reacción cruzada posible con otros alfavirus (Mayaro, EEEV)

• Confirmar muestras positivas con 2nda muestra (y neutralización en placas)

No neutralization

Neutralization

CHIK IgM Capture ELISA (P/N)

CHIK VEE MAY EEE

12.3 0.89 1.9 1.2

10.6 1.1 1.9 1.3

14.5 1.1 3.1 0.89

20.4 1.5 7.1 1.8

26.6 2.2 1.7 1.5

21.2 2.2 1.2 1.6

15.3 1.6 1.9 2.2

31.3 1.7 2.9 1.8

22 1.8 1.4 1.4

18.8 1.2 1.5 1.1

34.3 1.6 2.8 9.1

Cortesía, Dr. Robert Lanciotii, DVBID, CDC-USA

Colaboración con el CDC

Cada 15 días se realiza genérico de alfavirus para muestras con sospecha de dengue que resulten

negativas. Identificación de CHIK

-RT-PCR en tiempo final genérico para Alfavirus (Sanchez-Seco

MP, J Virol Methods 2001;95:153-61)

-Secuenciación y comparación por BLAST

Diagnóstico diferencial sólo clínicamente indicado

La confirmación etiológica específica de CHICK sólo es posible por técnicas de laboratorio.

Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirán la detección y vigilancia de CHICK.

Los laboratorios deben implementar y fortalecer la capacidad básica para la detección viral (limitaciones de ensayos serológicos)

La detección de IgM en una sola muestra es presuntiva.

Una vez demostrada la circulación autóctona, no será necesario confirmar el 100% de los casos.

PAHO/OMS