Post on 24-Jan-2020
DOLOČANJE SHIZOCITOV V SKLADU
S PRIPOROČILI IN UPORABNOST
PARAMETRA FRAGMENTIRANI
ERITROCITI (FRC)
Lidija Pušnik
UVOD
• Shizocite v periferni krvi najdemo pri različnih bolezenskih stanjih
• Zlati standard za določitev deleža shizocitov je mikroskopski pregled razmaza
• Mednarodni svet za standardizacijo v hematologiji (The International Council for Standardization in Haematoloy –ICSH) je izdal strokovna priporočila za določanje shizocitov v krvnem razmazu (l. 2012)
• Na tržišču obstajajo analizatorji, ki omogočajo kvantitativno določitev fragmentiranih eritrocitov (parameter FRC)- namenjen v raziskovalne namene
Vzrok pojava SHIZOCITOV
Motnje v eritropoezi
Intravaskularne mehanske poškodbe (TTP)
Pridobljene in prirojene napake v membrani eritrocitov
Opeklinska stanja
Fiziološko
TROMBOTIČNA TROMBOCITOPENIČNA PURPURA (TTP) IN HEMOLITIČNO UREMIČNI SINDROM (HUS)
• Urgentno stanje zahteva takojšnje zdravljenje
• Za potrditev TTP ni specifičnega diagnostičnega testa
• Najdba shizocitov v razmazu krvi je ključna za postavitev diagnoze TTP
• Pri najdbi shizocitov v razmazu krvi je potrebno določati delež shizocitov več dni zapored
SHIZOCITI Določitev deleža v krvnem razmazu
PARAMETER FRC Določitev na analizatorju
KLJUČNE ZAHTEVE ZA DOLOČITEV DELEŽA SHIZOCITOV V SKLADU S PRIPOROČILI ICSH
• Potrebno je upoštevati natančna morfološka merila za opredelitev shizocitov
• Za določitev shizocitov je potrebno pod 1000x povečavo prešteti 1000 eritrocitov in rezultate podati v odstotkih
• Ob prisotnosti trombocitopenije in shizocitov v razmazu krvi lahko pomislimo na TTP
• Pomemben diagnostični kriterij za potrditev TTP je delež shizocitov višji od 1%
• Določitev parametra FRC na hematološkem analizatorju ima visoko negativno napovedno vrednost in je lahko v pomoč pri odločitvi za mikroskopsko določitev deleža shizocitov
MORFOLOŠKA OPREDELITEV SHIZOCITOV
• Do izdaje smernic po priporočilih ICSH morfološka merila niso bila natančno opredeljena
• V literaturi najdemo različne izraze za morfološko opredelitev shizocitov (nepravilno ukrivljeni eritrociti, atipični hipokromni eritrociti, eritrocitne sence)
• Pomembno je, da je debelina razmaza ustrezna in da so eritrociti enakomerno razporejeni ter se ne prekrivajo. V repu razmaza namreč najdemo shizocite ter mikrosferocite kot artefakt
Eritrociti morajo biti enakomerno razporejeni in se ne prekrivajo
Pri 100x povečavi poiščemo vidno polje, ter ocenimo kakovost preparata. S 600x povečavo izberemo ustrezno področje za štetje shizocitov.
Vrednotenje shizocitov ni
mogoče
Za oceno deleža shizocitov mora biti tehnično ustrezen preparat
Tehnično neustrezen preparat, vzrok v
sami izdelavi ter postopku barvanja razmaza.
Napaka v predanalitski fazi pri postopku odvzema krvi.
Med shizocite vključimo odtrgane dele eritrocitov, majhne delce različnih oblik, včasih z ostrimi koti (trikotniki).
• Pozorni moramo biti na shizocite v obliki polmeseca, ki jih moramo razlikovati od drepanocitov (te najdemo pri srpasto celični anemiji).
Upoštevamo tudi poškodovane eritrocite, ki so večji od majhnih fragmentov s konkavnim segmentom, imenovane keratociti (celice z rogovi).
Med shizocite štejemo tudi t.i.mikrosferocite, ki so manjši od 5 µm ter intenzivno obarvani
Diagnostično je smiselno določanje shizocitov le takrat, kadar le ti prevladujejo v razmazu krvi in ni prisotne poikilocitoze
NAMEN DELA
• Uskladiti mikroskopsko določitev shizocitov po priporočili ICSH, ki bi nadomestila rutinsko metodo
• Primerjati delež shizocitov določen z rutinsko in novo metodo z vrednostjo parametra določenega na hematološkem analizatorju
• Ugotoviti diagnostično občutljivost in specifičnost za parameter FRC določen na analizatorju
VZORCI
N=272
33; 12%
60; 22%
179; 66%
Otroci
Novorojenčki
Bolniki s krvnimiboleznimi
PRIMERJAVA MIKROSKOPSKE DOLOČITVE SHIZOCITOV Z RUTINSKO IN METODO SKLADNO S SMERNICAMI • Povezava med obema
metodama je odlična
• Ugotovili smo, da so vrednosti shizocitov določene z novo metodo višje od vrednosti določenimi z rutinsko metodo
PARAMETER FRC HEMATOLOŠKEGA ANALIZATORJA
Opozorilo »Fragments« Rutinska metoda
Resnično negativni 80 (34,3%)
Lažno negativni 4 (1,7%)
Resnično pozitivni 89 (38,2%)
Lažno pozitivni 60 (25,7%)
Občutljivost 95,7%
Specifičnost 57,1%
Pozitivna napovedna vrednost 59,7%
Negativna napovedna vrednost 95,2%
PRIMERJAVA VREDNOSTI PARAMETRA FRC Z MIKROSKOPSKO DOLOČITVIJO SHIZOCITOV
• Delež FRC je bil za 0,6% večji od deleža določenega z mikroskopskim štetjem
• Razlika med deležem shizocitov določenim z novo metodo in parametrom FRC je manjša kot pri mikroskopski določitvi deleža shizocitov z rutinsko metodo
• Shizocite smo potrdili pri 119-ih vzorcih
PRIMERJAVA DOLOČITVE PARAMETRA FRC IN SHIZOCITOV DOLOČENIMI Z NOVO METODO, KJER JE DELEŽ SHIZOCITOV MED 0,5-1,5%
• N=69
• Pri 17-ih bolnikih, kjer je bil delež shizocitov >3%
DOLOČANJE SHIZOCITOV PRI SKUPINI BOLNIKOV S TTP
• V raziskavo so bili vključeni štirje pacienti s potrjeno diagnozo TTP
• Dnevno smo spremljali delež shizocitov
BOLNIKI S TTP PO ZDRAVLJENJU S PLAZMAFEREZO
ZAKLJUČEK
• Za določanje deleža shizocitov smo uvedli metodo v skladu s priporočili ICSH
• Z novo metodo lahko bolj natančno določimo delež shizocitov, hkrati pa je bolj primerna za spremljanje deleža shizocitov med samim zdravljenjem pri bolnikih s TTP
• Parameter FRC je uporaben v presejalne namene zaradi visoke negativne napovedne vrednosti
ZAHVALA
Helena Podgornik
Nada Snoj
Alenka Trampuš Bakija
Karmen Dežman
Natalija Hozjan Komac
Alenka Babnik
Ivanka Nerad
Katarina Zorko
Tadej Furlan
Hermina Čibej
Špela Orešnik
ZAHVALJUJEM SE ZA VAŠO POZORNOST