Post on 05-Sep-2020
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”
Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
(Development of Triphala Niosomes)1, 1, วนัด ีรงัสวีจิติรประภา1*
บทคดัยอ่
บทนํา: ตรผีลาประกอบดว้ยผลไม้ 3 ชนิด คอื Terminalia chebula, Terminalia bellirica และ Phyllathus emblica ในอตัราส่วน1:1:1
จงึ พฒันาสตูรตํารบั ในการนําส่งสารสกดัตรผีลาสมนุไพรส่วนใหญ่มปีรมิาณจาํกดั การพฒันาสตูรตํารบันีโอโซมจงึมคีวามจาํเป็น
วสัดแุละวิธีการ : นําผลไม้ 3 ชนิด อบใหแ้หง้ สกดัดว้ย 95 %ethyl alcohol โดยวธิกีาร maceration 3 รอบ รอบละ 3 วนั ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator ไดส้ารสกดัหยาบ 3 ชนิดมาผสมกนัในอตัราส่วน 1:1:1 สกดัดว้ย95 % ethyl alcohol กรองดว้ยกระดาษกรอง 0.22 mm ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporatorเตรยีมเป็นตํารบันีโอโซม วดัขนาด วดัค่า polydispersity index (PDI) วดัค่า zeta potential คํานวณค่า % entrapmentefficiency (%EE) ผลการศึกษา : span20, total lipid 50 mM,cholesterol 15% และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั164.89± 0.47 mm และรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 47.65± 1.56 และค่า zeta potential มากกว่า 30 mV, ค่า PDI น้อยกว่า 1 อวเิคราะห์ดว้ยโปรแกรมสําเรจ็รูปResponse Surface Methodology (RSM) หาปจัจยัประกอบดว้ย total lipid 50 mM, cholesterol 10 % และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั 188.10±16.34 nmและรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 46.43±4.20 % สรปุผลการศึกษา : ส่วนประกอบของสูตรตํารบันีโอโซมบรรจุสารสกดัตรผีลา ประกอบดว้ย total lipid 50 mM, cholesterol 10% และ plant extract 0.1%เหมาะสม รอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัสงูสุด
คาํสาํคญั: ตรผีลา การพฒันาสตูร สมของตรผีลา
1Department of Pharmaceutical Chemistry and Technology, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubon Ratchathani University,Ubon Ratchathani 34190, Thailand Corresponding author
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”
Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
Development of Triphala NiosomesThanissa Ramrit 1, Bancha Yingngam1, Wandee Rungseevijitprapa 1,*
Introduction: Triphala is formulation of three dried fruits of Terminalia chebula, Terminalia bellirica, and Phyllathusemblica in equal proportions. This formulation is the most popular Ayurvedic medicines. In present study, we want todeveloped niosomes formulation for loaded Triphala because plant extracts had less amount, the good deliverysystem for deliver plant extract to target action, increase therapeutic and decrease toxicity. Materials and Method:95% Ethyl alcohol extraction of Triphala, filtrated , filtered through 0.22 mm, get rid of 95% ethanol with rotaryevaporator. Developed niosomes formulation for Triphala, determined size, PDI, zeta potential and %entrapmentefficiency (%EE) Results: Factors for developed niosome’s formulation for loaded Triphala component span20, totallipid 50 mM, cholesterol 15% and plant extract 0.1%, this formula had size 164.89± 0.47 mm and %entrapmentefficiency 47.65± 1.56, zeta potential more than 30 mV, PDI less than 1. Optimize formulation with Response SurfaceMethodology (RSM) had component total lipid 50 mM, cholesterol 10% and plant extract 0.1% had size 188.10±16.34nm and %entrapment efficiency 46.43±4.20 % Conclusion : Optimize of formulation niosomes for loaded Triphalacomponent total lipid, cholesterol and plant extract had size and maximum %entrapment efficiency and Triphalaniosomes should storage at room temperature.
Keywords: Triphala, Optimize niosomes for loaded Triphala
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
บทนํา
มากในตํารบัยาอายุรเวทของอนิเดยี ประกอบดว้ยผลไมแ้หง้3 ชนิด คอื Terminalia chebula, Terminalia bellirica และPhyllathus emblica ในอตัราส่วน 1:1:1ว่าเป็นยาอายุวฒันะ ทําให้ชีวิตยืนยาว กระตุ้นระบบการทํางานของร่างกาย ระบบภูมคิุ้มกนั (Sandhyaa et al.,2006)
วัณโรค ปอดบวม เอดส์ ท้องผูก ตรีผลาเป็นแหล่งของVitamin C, ellagic acid, gallic acid, chebulinic acid,bellericanin, ß-sitosterol และ flavanoids (Jagetia etal.,2002) anti-inflammatory,anti-mutagenic,antioxidant, cytoprotective,gastroprotective, myocardial necrosis, hepatoprotective,anti-bacterial และ anti-cancer activity (Mukherjee et al.,2006) T. chebula, T.bellirica และ P. emblica 5α-reductase II(Kumar et al., 2011, 2012)
ชใ้นการนําส่งสารสกดัตรผีลาวิธีการดาํเนินการวิจยั1.อปุกรณ์และสารเคมี
ethanol, span20, cholesterol, methanol,gallicacid,follin-Ciocalteu’s ,Na2CO3,Dimethylsulphoxide,particle size analysis,UV spectrophotometer, dialysisbag, syring2. การเตรียมสารสกดัพืช
สารสกดัพชืแต่ละชนิดไดจ้ากมหาวทิยาลยัเชยีงใหม่นําผลไม้ 3 95 % ethylalcohol โดยวธิกีาร maceration 3 รอบ รอบละ 3 วนั ระเหยตวัทําละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator ไดส้ารสกดัหยาบ กรณีหยาบ 3 ชนิดมาผสมกนัในอตัราส่วน 1:1:1สกดัดว้ย 95 % ethyl alcohol กรองดว้ยกระดาษกรอง 0.22mm ระเหยตวัทาํละลายใหแ้หง้โดยใช้ Rotary evaporator3. การพฒันาสตูรตาํรบันีโอโซม3.1 การเตรียมตาํรบันีโอโซม
การเตรียมตํารับนีโอโซมcholesterol และ non-ionic surfactant ละลายดว้ย ethanol
ผ่านเขม็เบอร์ 2120 ml 60 500 rpm
30 นาท ีลดขนาดของนีโอhigh pressure homogenizer
3.21) Non-ionic surfactant
เตรยีมตํารบันีโอโซม โดยกําหนดให้ cholesterolและ plant extract non-ionic surfactantคอื span 20,60, และ 80 เตรยีมเสรจ็ ลดขนาด วดัขนาดวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency2) Total lipid
เตรียมตํารับนีโอโซม โดยกําหนดให้ plantextract คํานวณระบบ total lipid cholesterolและ non-ionic surfactant เตรยีมเสรจ็ ลดขนาด วดัขนาดวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency3) Cholesterol
เตรียมตํารับนี โอโซม โดยกําหนดให้ p lantextract และ non-ionic surfactant รอ้ยละของcholesterolขนาด วดั PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency4) Plant extract
เตรยีมตํารบันีโอโซม โดยกําหนดให้ cholesterolและ non-ionic surfactant ศึกษาร้อยละของ plantextractวัด PDI ค่า zeta potential และหาค่า %entrapmentefficiency4. วิเคราะห์ ResponseSurface Methodology (RSM)
ให้คอื total lipid, cholesterol และ plant
extract เขา้สู่โปรแกรม Response Surface Methodology(RSM)5. การวดัขนาดของนีโอโซม ค่า PDI ค่า zeta potential
ใชน้ีโอโซม 100 µl 900 µl วดัขนาด
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
ของนีโอโซม วดัค่า PDI วดัค่า zeta potentialparticle size analysis 36. การวิเคราะหห์าร้อยละการกกัเกบ็สารสกดัพืชในนีโอโซม (% entapment efficiency,EE)
การวเิคราะห์ร้อยละการกกัเก็บสารสกดัพชืในนีโอโซมใชว้ธิี direct method ประกอบดว้ย 2 ส่วน คอื ส่วน
บในนีโอโซม โดยปิเปตนีโอโซม1000 µl ใส่ใน dialysis bag เตมิ release media 18
100 µl เติมdimethylsulphoxide 900 µlหาปรมิาณสารประกอบฟลนีอลกิ โดยเทยีบกบัสารมาตรฐานgallic acid 2 คอื การหา
100 µl เติม dimethylsulphoxide900 µl นําไปหาปรมิาณสารประกอบฟลนีอลกิ โดยเทยีบกบัสารมาตรฐาน gallic acid คํานวณหารอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในนีโอโซม%EE = x100
7. การทดสอบความคงตวัของตาํรบั
อุณหภมูิ 4, 25 and 45 ° C วดัขนาด วดัค่า PDI วดัค่าzeta potential หาค่า % entrapment efficiency (EE) ใน
1, 7, 15, 30, 60 90 วนัการวิเคราะหท์างสถิติ
แสดงผลเป็นค่า mean ± SD และโปรแกรมสาํเรจ็รปู Response Surface Methodology (RSM)ผลการศึกษาวิจยั
non - ionic surfactant เหมาะสมในการเตรยีมตํารบันีโอโซม คอื span 20, total lipid 50 mM, cholesterol15% และ plant extract 0.1 % ไดข้นาดของนีโอโซมเท่ากบั164.89± 0.47 mm ค่า zeta potential มากกว่า 30 mV ค่าPDI น้อยกว่า 1 และร้อยละการกกัเก็บสารสกดัเท่ากบั47.65± 1.56 ( 1- 4) ( 2)
รู 1 size, zeta potential ของ non-ionic surfactant
2 size, zeta potential ของ Total lipid
3 size, zeta potential ของ % cholesterol
4 size, zeta potential ของ % plant extract
1 รอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในนีโอโซมจากการศกึษาปจัจยัต่างๆFactors %Entrapment efficiencynon-surfactant span 20 14.91 ± 1.14
span 60 10.23 ± 0.22span 80 14.32 ± 0.56
Total lipid 50mM 17.22 ± 0.7030mM 14.91± 1.1425mM 10.21± 0.5810mM 9.56 ± 0.801mM 10.15 ± 0.070.5mM 9.55 ± 0.37
% Cholesterol 0 24.16 ± 0.1315 25.27 ± 2.04330 16.33 ± 0.7945 8.40 ± 0.4780 8.56 ± 0.67
% plant extract 1 10.34 ± 0.310.5 14.60 ± 0.480.25 27.91 ± 0.820.1 47.65 ± 1.560.01 37.43 ± 2.97
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
2 size, PDI zeta potential และ %EE
ค่ารอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัในแต่ละปจัจยัspan 20 กกัเกบ็ไดส้งูสุดท่ากบัรอ้ยละ 14.91
± 1.14 ปรมิาณ Total lipid 50 mM กกัเกบ็สงูสุดเท่ากบัรอ้ยละ 17.22 ± 0.70 ปรมิาณ cholesterol 15% กกัเก็บสูงสุดเท่ากับร้อยละ 25.27±2.043 และปริมาณสารสกัด0.1 % กกัเกบ็สงูสุดเท่ากบัรอ้ยละ 47.65±1.56 ( 1)
ใช้โปรแกรม RSM พบว่า Total lipid เท่ากบั 50 mM,Cholesterol เท่ากบั 10%, Plant extract เท่ากบั 0.1 % มีขนาดของนีโอโซมเท่ากบั 188.10±16.34 nm และร้อยละการกกัเกบ็เท่ากบั 46.43 +- 4.20 %
5 จากโปรแกรม RSM
90
25 องศา ( 3)
ตารา 3 ความคงตวัของตํารบันีโอโซม
DayPhysicalstability
4°C 25°C 45°C
1 size 166.22±2.84 166.22±2.84 166.22±2.84PDI 0.202±0.04 0.202±0.04 0.202±0.04zeta potential 34.41±0.26 34.41±0.26 34.41±0.26
7 size 170.07±2.15 174.41±2.07 168.85±3.43PDI 0.19±0.03 0.251±0.02 0.214±0.02zeta potential 36.6±1.64 36.51±0.91 36.25±1.16
15 size 173.48±3.86 178.19±2.06 164.11±2.58PDI 0.18±0.02 0.232±0.03 0.172±0.02zeta potential 35±0.97 35.2±1.64 35.97±0.99
30 size 172.89±3.42 168.07±2.41 161.52±2.90PDI 0.186±0.03 0.235±0.02 0.168±0.04zeta potential 37.36±1.10 36.07±1.36 32.21±1.75
60 size 178.63±2.81 168.37±2.84 158.37±2.87PDI 0.229±0.02 0.216±0.03 0.151±0.04zeta potential 35.11±2.32 37.62±1.310 33.8±1.45
90 size 200.93±6.21 170.19±3.36 166.78±2.73PDI 0.301±0.03 0.218±0.11 0.107±.04zeta potential 36.18±2.56 37.71±0.79 35.24±1.54
สรปุผลการศึกษา
RSM ทําใหไ้ด้span 20, total lipid 50
mM, cholesterol 10 % และ plant extract 0.1% ไดข้นาดของนีโอโซม 188.10±16.34 nm และรอ้ยละการกกัเกบ็สารสกดัเท่ากบั 46.43 +- 4.20 %
กิตติกรรมประกาศขอขอบพระคุณทุนวจิยัมหาบณัฑติ สกว. สาขา
Factors Size PDI Zeta potential %EENon-ionic surfactant (span20) 195.56 ±1.52 0.07± 0.03 38.47± 0.98 14.91± 1.14
Total lipid (50mM) 194.89± 1.70 0.08± 0.02 40.68 ±0.25 17.22± 0.70
Cholesterol(15%) 194.33 ±2.54 0.19 ±0.03 38.13± 0.76 25.27 ±2.04Plant extract (0.1%) 164.89± 0.47 0.200 ±0.01 36.68± 0.70 47.65± 1.56
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design points above predicted valueDesign points below predicted value245.78
126
X1 = A: AX2 = B: B
Actual FactorC: C = 0.20
1016
2228
3440
15 22
29 36
43 50
120140160
180200220
240
Y1
(nm
)
X1 (mM) X2 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design points above predicted valueDesign points below predicted value245.78
126
X1 = A: AX2 = C: C
Actual FactorB: B = 25.00
0.100.15
0.200.25
0.30
15 22
29 36
43 50
120
140
160180
200
220
240
Y
1 (
nm
)
X1 (mM) X3 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design points above predicted valueDesign points below predicted value245.78
126
X1 = B: BX2 = C: C
Actual FactorA: A = 32.50
0.100.15
0.200.25
0.30
10 16
22 28
34 40
120
140
160
180
200
220240
Y
1 (
nm
)
X2 (%) X3 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design points above predicted valueDesign points below predicted value47.54
9.36
X1 = A: AX2 = B: B
Actual FactorC: C = 0.20
101622
2834
40
15 22
29 36
43 50
0
10
20
30
40
Y
2 (
%)
X1 (mM) X2 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design points above predicted valueDesign points below predicted value47.54
9.36
X1 = A: AX2 = C: C
Actual FactorB: B = 25.00
0.100.15
0.200.25
0.30
15 22
29 36
43 50
0
10
20
30
40
Y
2 (
%)
X1 (mM) X3 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design points above predicted valueDesign points below predicted value47.54
9.36
X1 = B: BX2 = C: C
Actual FactorA: A = 32.50
0.100.15
0.200.25
0.30
10 16
22 28
34 40
0
10
20
30
40
Y2
(%)
X2 (%) X3 (%)
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design Points245.78
126
X1 = A: AX2 = B: B
Actual FactorC: C = 0.20
15 22 29 36 43 50
10
16
22
28
34
40 Y1 (nm)
X1 (mM)
X2
(%)
160
180 2006
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design Points245.78
126
X1 = A: AX2 = C: C
Actual FactorB: B = 25.00
15 22 29 36 43 50
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30 Y1 (nm)
X1 (mM)
X3
(%)
160
180200
220
6
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR1
Design Points245.78
126
X1 = B: BX2 = C: C
Actual FactorA: A = 32.50
10 16 22 28 34 40
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30 Y1 (nm)
X2 (%)
X3
(%)
170
180
180
190
200
210
6
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design Points47.54
9.36
X1 = A: AX2 = B: B
Actual FactorC: C = 0.20
15 22 29 36 43 50
10
16
22
28
34
40 Y2 (%)
X1 (mM)
X2
(%)
20
30
6
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design Points47.54
9.36
X1 = A: AX2 = C: C
Actual FactorB: B = 25.00
15 22 29 36 43 50
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30 Y2 (%)
X1 (mM)
X3
(%)
10
20
30
6
Design-Expert® SoftwareFactor Coding: ActualR2
Design Points47.54
9.36
X1 = B: BX2 = C: C
Actual FactorA: A = 32.50
10 16 22 28 34 40
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30 Y2 (%)
X2 (%)
X3
(%)
15
20
25
6
February 1-2, 2014 The 6th Annual Northeast Pharmacy Research Conference of 2014“A Celebration of 100 years of Thai Pharmacy and 20 Years of UBU Pharmacy”Faculty of Pharmaceutical Sciences, Ubonratchathani University, Thailand
เอกสารอ้างอิงJagetia G, Baliga S, Malagi K, et al. The evaluation of
the radioprotective effect of Triphala (anayurvedic rejuvenating drug) in the miceexposed to γ-radiation. Phytomedicine.2002; 9, 99–108.
Kumar T, Rungseevijitprapa W, Chaiyarut C, et al.Screening of steroid 5α-reductase inhibitoryactivity and total phenolic content of Thaiplants. Journal of Medicinal Plants Research.2011. 5(7), pp. 1265-1271
Kumar T, Rungseevijitprapa W, Chaiyarut C, et al. 5α-reductase inhibition and hair growthpromotion of some Thai plants traditionallyused for hair treatment. Journal ofEthnopharmacology. 2012;139, 765–771
Mukherjee P, Rai, Sujay, et al. Clinical study ofTriphala-A well known phytomedicine fromIndia. Iranian J. Pharmacol. Ther. 2006; 5,51–54.
Sandhyaa T, Lathikaa, K, Pandeyb, et al. Potential oftraditional ayurvedic formulation, Triphala, asa novel anticancer drug. Cancer Lett. 2006;231 (2), 206–214.