Post on 12-Oct-2015
r-'10
j\d(~i)()\'i;-USUf'l pnt~?rOVirq~~l,.nll\!riS} .. \I'\~-"us (~oxsdckfe A2.tl:.;1 t;nt(.-:-roV'lrus 70Infecii ale tractusului digestiv I/'.d{-:,n()v!nJ'-.lur~ ( c~O.'41), astrcvrr.rsuri. calicivirusut f(virusul l"J();-wclk i i1tjE:nii r~on\(alk-!ike! farni!!(=} ueovinoee,rjt-TlU\ Rctsviruc , Caloi"ia\j;rU~~i..jrii(~\/irU';lln!e h~pcltitlce A. i EInfecii ale tractusutui urina .f,ci(~no ...uusurt (serottpun }.1! 21).!"t'ecr[ ale rr actu sulul genital
LYj
VIRUSOLOGIE GENERAtA
296Motto: "Infecia (boale mozaicului
297 tutunului) nu este produs de microbi, ci de un
principiu infecios ftuid."297
( Beijennck) .
298\/HS2! f;1r \!tiSlInfecii virale cu tr an srrut ere parenter al imanifestare sistemiclnfe{~~~ cu HIV/S'tD/\Vir:j.:.;uri hepatltice cu transuutere predorninant parenterat(\.1'18: VHD; VH(~; Vi'(;; TT\!J \llru:-u! S,r.,,!~j/;{)r1(\!'1ur:.h::clza inf~~(tio(:S2 (VEG)f fi! ~;~~i~l Ci i \'1:-1 L:,)\.i1Oi;)f'Qi311r\/Iru';,::.!riie f!;-h;clor nemoraoice
Scurt Istoric299300
-,r n")_.1\,'.;
In raport cu aparitia vieii pe pmnt i dovezile indirecte
acumulate, se poate afirma c virusul rabiei era cunoscut nc din
antichitate (r'.rlstotel i Cornelius Celsius). Variola ar fi fost cunoscutnc dm ChilVI antic (2500 .e.n.). iar un basoreuer eC)iptean datat
1500 i.e.n., l reprezint pe preotul Ral1ma, cu pIciorul drept nequinu, o imagine tipic pentru un caz ele poliomielit.
De~;i dovezi ale leztunilor varloloase apar la mumiile eCJiptene i n
documentele strvechi chinezeti, nici vlrusul variolei, niCi cel al
rujeolei nu par a fi fost cunoscute ele Hipoerat ('-1CiO-377). Totui,
apariia oreionulut i a virusulul gripei Dare (l fi iocaliza.t5 n acea
perioada, n insula Thosai.
-;04~05
IV. ;~"~etode tie diagnost~c 'i'n i!1fecdfe vir alef1i(;O~;~~UP!delectr'onicS~.)~t:Pct('H:';.a~~enonHJluiviral1?ol';11't3'd virusurlior.Di,3UflU'-tlcui seroloqic in infeciile viraleTf~hni('l (je difuzie ~n qeiP~-:'clctia de fi>~an::3 C' (r,~f:C;::~!:l:1~:U~;d~:: inhdj!~e .~ henlag!utin2fi! (R1H)! f (Ii !(!(ltiu~)reS(endr~t-"""1(~~ij de-,pcuL: dZdr-e (Ri\J)'u";~(i~ de a'Ji~,ltinr.i-2 ind~recr;)n{:,,-~\ __:t:J ra.nc.munotoorcer!."!l!ij(; :r:-Jl;r;cenZIf"i)aUee n d1ognosticu! ....-irusotoqtc
."3093}]31231633J3323~~53603'703763863f>7388
Pe de alt pa/te, rspandirea 'lariolei- i a gripei n Imperiul Roman
a contribuit, probabil, la declinui acestuia; aceleai boii ar fi afectat
Imperiut Aztec i Inca n America de Sud, dup ce au circlIl.Jllli Europa.
Primeie ncercri de oreventie a boltlot viralc (\
",1""1,,, """"",\,1 (1(, Vi1CClII(I"f' pellt.1U \@l"iO!i) 1n 1721. Unii copii ali
!)III 1', ,1", 11',11'" Il.lIc,,', ilii ,If!l'i'.\vicl;IJit.
,.",,:',1,' 1>1,11111;,.1devenit: mai rspndit din 1740, cnd copiii
" ,i ", I.d,' .: 11111111"1,III rosi, vaccillai cu succes, Dup moartea lui
\ "~'li', ,!I, 'J 1,'", !f,' Vdll(l!:I, '11\1774, tratamentul cu pustule varioloase
, 1'>',1 ,'jI (,'pL'11 '..111111',111\:;1,in!' n SUA, George Wasllingtofl a inslituit
"., 1,1"'1'''"' .1, 1111)( uldle fi soldaulor (1.776),
1', 1i:;I, (Ii Ion d(~ ilni inaintea descoperirii naturii virusurilor,
,1 ",.i " ""I' I fi ol):;(:II/;,ll di persoanele care au fcut "boala
" ,!!I 11;i,II' 1" r ' '111.1(.1 o rOl"ln~j medie ele variol, fiind protejai fati de
'1",'11\ 1 il 11111111)1 ,1','.llurlj'JC, I\ceste observatu au dus la vacc.narea cu." ,.i "".!,," illil,lliiil dlll Hcllielul pustulelor determillalc de JCC'jtill '" \11,>1\1I'"."! IIl,lIl sirnptome 1
"2 Originea virusurilor 3 ilStructura vtrusur llor i anatomie funcional
F.ste' evident c virusurile sunt mkroorqanisme tonrte avoluate
care continu s evalueze i n prezent,
Ci1 rrucroorqanisrne obliqator parazite intracetular, dei au lIll
(jerlO!l1 ele rmo dimensiuni, ele fac parte dintre cele mai eficiente forme
ele via,
) teOI"j(! PVnltltlc'i n.:oresive -" presupune [3 vi"ruslJrilc ar fOI Iormc
Conceptul de virus
Virusurile reprezinta o categorie specific, diferit de alti ageni
infecioi. Mult timp au fost caractenzati prin caractere cum ar fi:
filtralJIIitatea, dimensiunile foarte mici, paraziusmul obligatoriu
mtracelular. inacnvarea prin cldur; aceste criterii nu erau definitorii
i, deci, rlediscrimmatorii n raport cu alti agen~i infecioi (in special
bacteriile),
Definiii
Lwoff (1957): "Virusurile sunt entiti potenial patoqene care au
o fazinfe.cioils, posed un singur tip de acid nuclelc. multiplic sub
form de material genetic, nu cresc. nu se divid i sunt lipsite de
sistem t.ipprnanu."
'"
Hi'ljol itdl!:?d cercettoi ilor admit di originea vlrusunlor coincide
cu
"!,-""
:\'I
,1-1 ,
Iili 1!Il,ItICII' ,1111111:11 vu louul, ('i i !\RNl\ ~i proleinele virale care pot lipsI
II! lil\,11 tllll ';\II!' 1111',1 vn iouulul
:']e1l1(.d,ltl1", ',i' rlr',llll(j vlrusurt in,'
l'lIIII,i rit' ulilllli ti St1U bastona: riqid sau flexibil (ex, vrvlT sau1:1(111 I d, II 1 li'l \1C1:,I);it '1 ;111 ',11'1 iC,d (rzornetnc):f'lllll.! ,,{, '1 n:rI,di1: virusul qripat, aclenovirusurile;fllllllJ rnonocatenar poate
servi ca ARN mesager, Virusurile cu polaritate (-): pentru a servi ca
ARNm, trebuie sintetizat o caten complementar cu ajutorul unei
transrriptaze.
(3) Compoziia n baze a qenornului este variabil:
_ ia virusurile ARN, variaz ntre 36% pentru guanin i citozln
(poxvirusuri) i 7Q% (herpesvirusuri),
(4) 1'-1oleculele ele legare: unele ADN virusuri (ex. poxvirusurt) au
legturi ntre cele dou catene ("cross-liking") i mult: acizi nucleici
(ex. picornavirusuri) sunt legai covalent.
In ansarnb!u. putem descr-ie:
(a) pentru virusurile ADN - 7 tipuri principale ele structuri: de
interes pentru patologia uman sunt virusurile cu genom:
* monocatenar linear (parvovirusuri);
I1;"iiI
\Ijfldld 'Plld)C'l,:I;
l' ) 1,\1 pllll' 1~)lsCIVi1le direct (form, aspect structural):
111,1lI,' 1.11\1;, \\ .. 11>1dlllK'II';llIlli v
,.,
, qeuorn ciublu-cateuar (d.c.jrepetttiv terminal (adeiloviruslll-i);
, qellorn d.c.. circular, Inch,is covalent, care duce la formarea unei
:"ilo:cc:ule,super-rsuclte (ex. polvomavirusuri S,iU slmlanvirus - ~:)V40);
(l)) vi rusuru !\RN pot fi de mai multe tipuri, dar ele interes
medical sunt:
" virUSII! ile eli qenom segmentat mvxovirusurl (8 segmente) si
reovrrusurilo (10 ~,C91\\ente),
l.i; rill1rJlll 101, virusurtte cu genorn segmentat pot fi ele 2 tipuri:
la) virusuri In Gm:. CnpSida virnl2i inveteste mai multe segmenle ce
;\[
c,illd!lp' d,'l(~n,'illlrJnUi antigerllci fat, de care qazda vertebrat\1,,'( i.!i:i prin rspuns imun, inclusiv formare de !~c
',i;I~('j!;(,li 1;llL: 'r'n cazul \!inJsLJ!~i!o!- nenvclitc (nude) au rol protector;!" [: r('d' I,iiic /\U'-/\c, folosind seruri imune cunoscute, se poate face;fi, 'III illlrC
Wiblli... M~m.iMi..AiiW#44A@ -Gi~~~~~~}~h .,fi,"5:~~~~~~~~;n~72,?~;":~"!.~v,'.r'.~.~~~,;",.\ .---..,.~
h~g~tlJ(ie\Jaf8ctoz~1 ~ acid N - acetilneuraminic i
f'[:~~~f!!~i:!;j~;~7~l~~~~~i;:1~,~f~i{)Jg(na ha rid lce:ci n iilllbera rea virionifor din celula care i-a format." AHN dependent, numit transcriptaz revers
.. 1{l)i o regsHn la retrovirusuri (transcrie ARNm.c.
(\I)N -LI! transcris se integreaz n genomul celulei
Taxonomie viral 4 11lii!,1
~
.!/'
~il;H:i(Hmi: infecios parazit obligatoriu intracelular.)~"r;'.t;/,FC.ICllJ lnf~ctlos care include o faz n care agentul este,c;'t~~~:;1Jn~sau mai multe particule inerte (virtonul sau
;)~j~~d!.n una sau mai multe molecule de acid nuctek: De:..~; '..
iC~l(~fitcfe un nveli alctuit din una sau mai multe
,_.: .:-,"IJ"'V~~Jn_r,I't}'fJJit-;Ullel~ cazurt, de o membran care contine lipide i
~~l!{.~~~.k~;.::~:::n~,"tefi transmis unu: ga,dereceptive')r:;;,~:{t:VkK1jCIYm~t;tiJ:,6f;tI'f.tlr;iCI vutonutu: este stocat fie n molecula de ARN,
AOI,j; '1'1 interiorul celulei gazd, genomul viral
'F
/CIT\! a publicat 6 rapoarte privind "The CJassification and
Nomencleture of Viruses" ncepnd cu anul 1970 de la reuniunea de la
Mexico City din 1970,
AI aselea raport, publicat n 1995 considera un singur ordin
respectivt-tononeaeviretes '(care reunete familii asemntoare,
virusuri ARN, cu genom negativ); i ulterior ci fost validat de ordinulNtdovlretes (care reunete virusurile nenvelite sau nude), Primul ordin
deja definit reuneste 71 de familii, 11 subfami!ii, 164 genuri, inclusiv
multe genuri "flotante" i peste 4000 de virusuri, Desigur, sute de
virusuri, sunt 'nc neclasificate datorit lipsei datelor.CITV cuprinde apte subcomitete care se ocup de virusurile
vertebratelor, nevertebratelor, plantelor, bacteriilor,
subcorrutetut pentru proprieti i date despre virusuri noi i
fungi/or,
subcorrutetut de coordonare.
R.ecomandarea iniial, valabil nc, consider virionul ca
element de baz al oricrei taxonornu.
Urmtoarele criterii, ftztco-chtrruce ale vinonllor stau la baza
clasificE!rii vi;usuriior n famil;'i:
natura chimic el acidu/ui nuc/eic;
simetria capsidei;
prezena sau absena nveliulul pericapsidar;
dia metrul capsidei pentru virusurile cu simetrie helical i
numrul de capsomere pentru cele cu simetrie icosaedric.
Pe baza naturii chimice a genomului viral, phvtum vira se mparte n 2
subohvte: dezoxtvirz i ritiovirs pentru virusurile ADN respectiv, ARN.
In funcie' de simetria capsidei, virusurile se grupeaz n clase:
aezoxmettce i dezoxtcabice, respectiv ribohefica i rtbocubtce-
In continuare, clasificarea actual se limiteaz numai la definirea
familiilor, genurilor i speciilor cu respectarea urmtoarelor reguli de
';:-;:-~-:.r:.,:~~~.:;:.:~.~:~;.:::;':~'{-;;-:.r;(:":"'-:;
,_. -,-, "",-,y_.; , "i.':j'!?:':..\'~:;';"""c":!.:1,:";~:,.~l.I;";:,)),,- ,(;~!(f'.";;?~~l}~"~.\~;.;~,-;!t({~~'~'~'Xi;;~SZt~~'F:if~~~~!~~~1:~~:~~~;:~g....
'"
Tabel 3: Virusuri ADN 'mplicate n infecii umaneTabel 3: Virusuri ARN implicate n infectii umane
Picomavirjdile-'TEnte"oY;;~OIiOVIrUS' '---1-3Itp,;rl: meningit iI I aseptic, pollorulelit I-.--.---.-.--...-----j-- ..-------.----~EcHOViru5--------- To..a:ii~~.~;meni.n9it-li---j
r
. .' .-- --------------.- .. - 2?~Fl!~..!E.~.:.. iVirusui Coxsackie 30 tipuri; men,,'git. I
F--------------Hei)ato\Xius----1 :i~~hepatltic(ie-t4)-A-' ~~~~fk;9~~~;~~------1______ _ . ~~p.~'!!r:'e_~S.2!:~.ral)"_!Rl1inovirLis Rhinovirusuri umane > 115 tip,lI"l; rceal II
Comun. .~=~t;.afCiviridae __ ;=: Callclvlrus __ ~l!.?ul N~'.~ Boal 9.astro inlQ..s.!!Di'J.!I__.!
paramy;wviridae p,ramVXOVlrUS-+:lrUSUI gnpal 1 tipuri: rcealA Il comun, brontollr..______________________ __ ~_umonle -------1I Rubulavirus Vlrusul urlien , Oreion; parotidit, II meningit aseptlc (rar,...-------- 1~ -----t------------2L!llt,eJ- encefalite ). .J1
' ~1orblilvinl5 Vlrusul rujeolei RUJco!',; febr, rest: I(el'cefclllt PESS) j
-------:--- pnell!1)O\ll(US-
jVlrusu! 7esplratcr ----- -l.R-ce~"G-'~;;-;-;-I-l~j----SIIlCl~ral (dClull), Olonloht, I
I-----------i--------- i )neum~>.'.~~Jr~(J"p'_'I!,,).'__-jOrthoniixoviridee. Vlrusul Gripal A i Virusul gripal A Febr;i, n1ialg,,~, tuse, i
.pncu~onie .--1virusul gripal 8 Virusul gri pal 8 Febr, mialgie, tuse, I
1-_. I.---------r,-c J).!2.~~rnoni.:::e.,-_.....,._-,-_R/r"bdoviridae Lyssavirus Vlrusul rabie RaIJ;e:incubaie IUr19~j
I ~ afeetare nervoas, .
Im~~
M_ Fllov;ridaf: ~o~lrus virusul Ebola i virusut r:eb";;-"j:lemoraglct'\: . !1--iJo;;;a,,;;idae - --B~)r~avir~5-'---~~;~,;Sfrus--..----_l!ii;~~7;r:,egatdc--- ../II schizofrenie la unele
1- I?etroviridae t- Deltaret~o;,;:us Vlrusul--u,'-an~forfoplc -f~:Y.f~i';;adull:ul,i/Cu""l
l de tip 1 cctule T, parapareza d___________ +_--::__ ' .. ~e!E:~~sric~. _____________ ~[fI~?. Virusui SDl/mOS l'!>!_~...c:".!2.0SC boli __1, . t.ermvrrus Vlrusul .rnunodeftclener ln[(:Cle HIV, SIDA, I..,__ . umane tip 1 1!.2 ._~I~f9!:.~~.!'..?~~ J
l roaevtriaoe I Rublvin~s Virusul rubeolm, Exantem, boli J___ . .,.... +--__ ---,,.- ...,.,,....,..-~1.ill'~1~---____ _ _~havlrlls, Virusuri(WEE EEE VEE) En
\.
~~f;~~~~)f~~~~Y,~~~2'~~'.;')fiVm~~~~Je7~Wp~,~~}~~;~~~.q(~::~M~1~fi)fi'liWrG~~~r$~I"~~";'~-'~'~~~"1'~-''''~'''-~~''-'''.
:~~
..\._~.-- . ,~...o,#_-~-~'-f~_4./ > 5 ~,II-' ",V~'\r::--
,-:;;.:.
1.Ata~afe2. Penetrare3. Decapsldare4. Transcriere I/sau
translale5. Rep!fc~re genom6. Asamblare7. Eliberare
:."1';9. 7: etapele repficrfl unui virus
Penetra ma;Virusurile nude (rar cele nvelite) ptrund prin pinocitoz
(receptoroependent), cu includerea virionilor n endozorni. .) .
Picornavirusurile i papovavirusurile pot intra prin translocarea
direct amembranei citoplasmatice (viropexie). Virusurile "nveute
ptrund prin fuziune i eliberarea NC direct n citoplasm. Virusurile
nvelit;; pot penetra i prin endocitoz, fenomen nsoit de decapsidare.. .' -.
Decapsida,ea
Are loc sub actiunea enzimelor lizozornale sau direct n~ .' .~,citoplasm. Genornu}."ajunge .Ia sediul repticru pentru a deveniaccesibil transcripttet.
2~25
'"",
f"'~;:;;t;;~1-:;-'1
-t. iJl\C(h',ltc,'... Lg P~CCOl'.:'t~mAn:N ' ".._-..-.,..,-,,~
')~
"l/\i!;"t.n:-_:;:~-;;U!t,ry:~~~
Ci:l'" Il: ADN 111,Y;iWil!~\k..,
iiHitlcrtJj'fJ.la IJlriollului. Virusurtle nude sunt eliberate cel mai
"ffC("\/f:it!: l'u'Jnllt.a celulr~i gazd, Virusurile cu nveli sunt eliberate
.. rjn;jql't!~iYi nudeocapsidele nrnuquresc prin zone ale membrane!
(.t~IJiff.1j;(! '\'n ctH;e au fost rnserate glicoproteine vtrale, Enzirne virale,t~UJ'11 lt~to rH';!lIrm:nnidaza virusului gripal, particip la aceast etap,
Vlrll~urHe, care inmuquresc la nivelul membranelor intra-
dti:'I)I{1!~ln,'ltlce pot fi eliberate prin exocitoz dar i prin liz, Virusurile
r'!~\f:,1(1t,(,\ in medtut extracetular sunt responsabile de iniierea unor noi
lfl(e~crll. U;1ele herpesvirusuri, retrovirusuri i paramixovirusuri pot
Ul!i,K&lla',lfli!.@~~~1:f';!\'I;::"''fv.;;:-~'P,>'l1~2;r.:"~R;id,g,;."P',"'c.+,;,::"",,,~,~o,::,,,;,,,~,=:?,V;""~"~"'__-
-nveli heli~al
Fig. 9: Reprezentarea schematic a unui bacteriofag
"
Ciclul de multiplicare.
Adsorbia: fagul se fixeaz pe receptorii bacterieni specifici, mai
nti reverslbil, prin fibrele cozii, apoi ireversibil, prin croetele plcii
bazale; receptorii bacterieni pot fi prezeni pe peretele bacterian, pe
f!ageli sau pe pili sexuali.
Penetrarea: enzirna muralltlc fagic depohmerizeaz
mucocomplexul peretelui, ceea ce determin scderea rezistenei
peretelui; prin ,contracia manonulul, canalul axial a! cozii traverseaz
peretele alterat i se oprete la nivelul membranei cltoplasrnattce. ADN
fagic este injectat in celul prin canalul axial, n timp ce nveliul fagic
rmne n afara celulei.
n continuare, exista dou posibiltti:
- ADN fagic posed gene veetetive, prin care controleazreplica rea -acizilor nucleici proprii, sinteza proteinelor de nveli i
morfogeneza a numeroase copil de vlrtoru maturi care sunt eliberai
prin liza celulei, i reprezint fagii viruleni. Ulterior, are loc biosinteza
'fl , 1
~11 Principii ale diagnosticuiui viruSOlogic
Scopul diagnosticuiui virusologic: datele anamnestice,
simptomatologia i "sezonalitatea" evolutiei unei afeciuni nu ofer, de
cele mai multe ori date patognOmOnice; diagnosticul de laborator prindatele sale, mai ales cele Sj1ecificeofer:
un diagnostic de acuratee;indic terapia adecvat n funcie de etiologia bectenan sau virala;ajut la formularea prognosticului. '
Tabel 8: Produse patologice pentru diilgnosticui virusoiogic (W!z i C.'I'- IV)------------------.--~--------- ----------1---------------,--- ".---.,IVirsurile cel mai frecvent I Produse patologice Comlpoate fi eVlder.\lill I,'/ VCM '--------L-------------.-
r3!..l aS'Ii1pto",alic~ !I 1nfectll oCUla re I
I Cl Adeno- Io Raclat conJlIIlct,val sau Ruc/ujtll cor 0"0i, :i o VHS . corneean Impune o t0!1r"cilalTipuri de laboratoal"e destinate diagnosticului virusologic:
laborator clinic;
laborator al unui Institut de Sntate Public; Laborator deCercetare, etc.
t~ategii de diagnostic;
izolarea i identificarea virusului considerat agent etiologie sauprecizarea "statutului" izolatului (ex. purttor sntos, convalescent,etc.),evidentierea de proteine vira le;
}" evidenierea aclzilor nucleici virali;." citologie i microscopie electronic;: diagnostic indirect, serologie.
Etapele diagnosticului viruso!ogic:
COoperarea clinician/ epiderniolog - medic de laborator;alegerea celui mai potrivit test i'n funcie de contextul clinico-epidemiologic;produse patologice :
tipul, n functie de momentul bolii (tabel 8);Oportllnitatea prelevrii; .
alegerea metodei de recoltare i asigurrii conditiilor optime detransport.
6'1
65
_., kll)!J!$iQl tU i4",::;;+_~~=":''"'''''~':''''''~''C"''-"'C
4
HE~,;ot)f::lilE {)'lf,GNOSTIC sunt detaliate in capitolul m. Detectarea avizi lor nucleici:;... Hibridizarea acizi lor nucleici nearnplificai;};- Reacia de amplificare genic (PCR polymerase cnein Reaction);j_ "Branarea" ADN (branched DNA)._t~oh;l'"'1fii idontifk"rea virusurilor (t,:ItJel 9)
.;..t1f!fb'lile"i!li'lbiHt'te semnificaiei izolatului;i.!~ij\'~Lnlf;'ltQ{lj standard, de referin;; ,- p\l:!'t"i1lI:t1 lilU@ de rez.isten ale tulpinilorfa de antiviralele
.uHlHrmeidll(;t~ la descoperirea ele noi virusuri;f'OIQ$61t~ca sisteme de diagnostic:v, ,[iqlfriJ~l p~ anlrnale de laborator sensibile;{,(l4iUv/H'ea pe embrioni, 'in dezvoltare;
-._ i-o. _".---- .. _~--------\ -------- nscut .._:1Y'J)~lWVl!.~__".jl-..L-I-L---.- ....I....!.----.-.---i-2- + \ -- ~--------;'1, t, .It, .!. , l- 1+ I --- I --- --- I". -)'~_'"""v -1-""- _ .. -----' .--.-----, -~------ --------;(,"~."HJkfQ A , - - , --- ' --- + + -+ I1Jf1Jti':I. i;\'hT:,' j -'1 ----- ----h----------:+ ++---+-=----- ..~-.:-;:-----.!Ivr~'" "'~-I-i..-"-"..(I.{MDT;:-+"+----i+7-- ---~~--- --I-I-':-------i\ ... , .. !~M;'!LU" \ ! IHA 1~~~~~1}?4~t--~E~~t~=~-\! VWi ! + / - 1 ++ + \ ++ I ++ . ++ + ;_\!._~. -,.,~-,.t.,-...---_.-.---+__:;--, \=: . __ LiP.0cksun) \1
'1\1:. _ ..... , :1..0'-_ __ ". __ o \ .:.'~.:.Ll-3.ll-" -----------.\-~=------- -~-----I V'"f'\ ,... 1--1- l!.:l 5\ ,--- I --- -- - .. (;;\lO;j~f!f-t~i'G;;nFm\":-"e;-;-lagh.lini1r~H~\D " hemadsorbie, s - sptmni, ECP-'Lin~t:tt.ltopatJC
Microscopie electronic:~ coloraie negativ;e imunelectronomicroscopie,
Citologie:-/ de regul realizat n laboratoare de anatomie patologic;-/ evideniaz modificrile histologice;,/ evidenierea de ineluzii vlrale (ex. corpusculii Babe-Negri din
turbare, corpusculi tip Cowdry A n infecia cu VHS sau VVZ);-/ metode imunohistochimice,
Diagnosticul serologie: detectarea anticcirpilor specifici cu
interpretarea rezultatelor n funcie de criteriile de semnificaie clinic
(vezi 3.).
1. Reeoltarea, transportul i conservarea produselorpatologice la laboratorul de virusologie
De regul, fiecare laborator i formuleaz propriile reguli de
recoltare i prelucrare pentru produsele patologice destinate izolrii i
Identificrii virusurilor elabornd procedurile de recolta re pentru fiecare
produs n parte. In suspicillnea unei etiologii virale trebuie luat
legtura cu laboratorul specializat pentru acest diagnostiC i trebuie
avut n vedere parazitismul strict intracelular al virusuri lor deci se
caut creterea anselor izolrii prin scortarea timpului Intre recolta rea
produsului patologiC i tnoculare pe qazde vii, receptive,
Temperatura de stocare:_ probele nu trebuie menjnute la temperatura camerei;
de regul exist un interval de cteva zile ntre recolta re iinocula re i de aceea prezervarea probei la temperal-uri de - 70C
este obligatorie;r'Jidontl';1I'lYi de an\:lqene - cel mai frecvent prin'.1 11' "
'f1l\~!J;!~}(ag:I~ltinar(~
67
66
\'.\t.~i\ 1 '.'i\ \; i, .> \.p.11,Illl
ILi, li\\11,1,~ :1
II~
lil\"u .;,i I 1~~i! ;,1i )'! ~ iF'l'1,1;0 l'H':I~.;l!!I~;~~::\';!I\1 \1itli ;;\::
iililUi~l;i~;1
\[\:1\, "
1 li!
-multe virusuri i pierd' infectivitateala - 15"C - 20CC i de aceea nuse pstreaz niciodat astfel de probe n c:ongelatorul frigiderelorobinuite ci numai n congelatoare destinate special acestui scop;
- dac un virus este sensibil la congelare se va resuspenda produsulpatologic n solutie de sucroz, la pH neutru.
jVledii de transport- destinate prezervrii viabilitii virusuri lorsunt furnizate de ctre laborator mpreun cu detaliile de recolta re,prezervare i transport.
2. !;;::o~areavirusurtlor
2.:ll.. Culturi de celule: presupun utilizarea diferitelor tipuri de celule:
;,.. cutturt primare obinute direct din organul prelevat de la
animale sau om, cu variate surse (vezi capitolul III).
Descriere: celule embrionare dau adulte, de tip fibroblastic sau
epitelial care pstreaz cariotipul celulei normale i prezint fenomenul
inhlbiiei de contact, multrolicarea lor nceteaz cnd filmul celular estecomplet.
Exemple: culturi de rinichi de maimu.
:,;..(,;~..dturi discontlnue:
Descriere: obinute prin subcultivarea limitat (aproximativ 50
de ori) a culturilor primare; prezint caracterele culturilor primare.
Exemple: culturi diploide de celule renale de embrion uman.
> cu.Htl,.wi continui sau linii permanente.Descriere: se obin utiliznd celule neoplaztce sau celule diploide
iniia! normele la care transformarea de tip neoplazie este spontan sau
Indus (prin tratarea cu virusuri transformante, ageni cancerigeni).
E;{emple: Hela, vero, Hep2, LLC-MK2, tIjDCK.
Efectele cultivrii vlrusurllor pe Ce:
.. pentru unele virusuri, se noteaz apariia efectului citopatic
(ECP), consecina mllltipllcrii virusulul, tradus prin modificri ale
morfologiel celulelor cu variate evolutn, pn la desprinderea filmului
celular de pe suport;
of!
~-., ...~::e
,--'.-:--c--~--~-"":.---~~y"~~:"e:~,."';~~?!_"-~-~~_'''':'?~~:~f.~;;3':~9.~;'~~9J~~~~~:J~~.$~*;~*;;t\ti~~
~
13~ Profilaxia specific antivirar
i3. 1. IProfilaxia activ prin vaccina re.
vaccmunle antivirale utilizate n practic stimuleaz producerea
de Ac IgA, IgM sau IgG, primele dou clase fiind mai abundente n
secreiile respiratorii i intestinale, iar IgG n cantitate mai mare n
circulaie, De asemenea, pot fi stimulate limfocitele T care sunt
suportul rspunsului imun celular. Pentru a realiza un vaccin eficient,
trebuie cunoscute unele particulariti ale infeqiei respective, una
dintre acestea fiind poarta de intrare:
- infeciile de la nivelul tractusului respirator sau intestrnal:
- infeciI ale suprafeei mucoaselor, urmate de rspndirea
Dezavantaje:
a) rnutale.a reversiei virulenei (major);
b) nu pot fi admintstrate la irnunodepresatl:
e) rspndire posibil la contact (poate constitui un avantaj pentru
colectivitate) ;
d) dificulti de transport n zonele calde.
2, Vaccinurile inactivate sunt obinute prin tratament fizic
(c!dur, iradiere cu UV) sau chimic (formal, beta-propiolacton) al
preparatelor de virus slbatic. Inactivarea urmrete etirninarea
infectivitii cu conservarea imunogenitii.
Avantaje:
a) tmunitate umoral eficient dup rapeluri;
b) nu are risc de reversie ii virulenei;
c) pot fi utilizate la rmunodepresatt:
el) nu pun probleme de conservare legate de ternperaturile ridicate.
Dezavantaje:
a) multe nu determin un rspuns imun eficient;
b) sunt necesare admtntstrn repetate;e) nu stimuleaz imunitatea local (important);
d) pret tie cost ridicat.
3. Vaccinuri recombinate, obinute prin inginerie genetic:
sunt exprimate cu ajutorul unui vector (ex. fungi, E.coli) acele fraciuniantigenice ce induc Ac neutrallzant.
4. Peptide sintetice, care sunt mult mai mici dect proteinele
virale originale, stimuleaz IgG, dar nu la Un nivel eficient.
Efecte adverse secundare vaccinrii
Reaciile adverse post-vaccinale (RAP) sunt manifestrile care
survin secundar unei vaccinri. Accidentele vaccina le propriu-zise sunt
rare i sunt mai ales determinata de vaccinuri antibacteriene.
sisternic pe cale sangvin sau nervoas spre organe tint;
- infecii prin nepturi sau prin injecii.
IgA mediaz imunitatea local, eficient n primele dou situatii.
Exist un mic exces prin Ac circulani dac virusul se i'C'plic la
nivelul mucoasei respiratorii, cncJ r: secretori au roi primordial.iepuri de vaccinuri
1. Vaccinurble vii atenuate sunt obinute prin pasaj pe gazde
strine (ex. ou embrionate sau culturi de celule). Dintre numeroi
rnutani (n special /l.RN), unii vor fi selectai n noua gazd (au capacitatea
de a crete mai bine n gazda strin), dar au o virulent mai sczut
pentru gazda natural (ex. virusul Sabin, prin pasaje rapide pe culturi de
riniclli de mairnuil CI devenit un nou virus, care nu mai crete n Si'lC).Avantaje:
a) activeaz toate fazele rspunsului imun;
b) induc o durdl? mal mare a imunitii;
c) pot ~Iirlii,v; ('WClliil~iavlrusutu' slbatic n comunitate;
d) pre de COSlIQCJLJS,
8l
',:
S:S::"'. iii";:::o:;s::tie;c;:;:::as;:~!:&.:::see!.A!Qtf41'i:::;as. __ . =.-~~----__.
i>
E~en~laI Il mducerea RAr' este natura vaccin ului. Din acestpunct; de vedere, vaccinurile au fost claslficate in "anodine" (vaccin
Ilntipolio) i "Cl\jresive" (rnajorttatea sunt ra~d de bacterii).
Manifesthrile HAP depind i 'de reactivitatea gazdei.
RAI' secundar administrrii \IVA sunt, n general, de natur
infecioas i survin mai trziu comparativ cu reaciile dup VAO
(Vin:ln Cli agenti omortl), care sunt imediate i au la baz
!Tlt?f,jinisrne de hipersensibiltzare, fiind frecvent de natur toxic.
. nf.WC\;iileadverse pot fi:
Tabel 10: Reacii minore i moderate secundare vaccinrilorr=----- -------.----:------r:------------------------.-q[ Reac~~~~~~~e :~uO1od~ra>t~~cconuri implicate (\ti~ale i bacterienc)I Episoade febrile II . precoce: (pnmele 1-3 zile) I o anatoxtne (DT), vaccin anti- II tuse convulsiv, anti-febr II ,tifoic1a corpuscular, I! tardive (5-11 zile) ! VRantiVH~: !. VVV: rlljeola ---1~on~UISij (hiperterrnice la copil) .~~ntirU}~OI~-_-_-.~ ..-.--.- ..-.iI Exantem I .' _. II alergic (precoce) I vaccm cu ageni omorau I1_ infe9!Q~Jtar:.~ vaccin.ani-,,-,!j~.!~ __ .-----l, Artralgii (aduli) I Vaccin anti.-ubeolos, antiVHB IL-.- I
minere (episoade febrile precoce sau tardive, 1
~-----..--..,- ---_._-----
',,,,,,,111: Reacii majore nregistrate dup diferitele tip ud de vaccinurl.-----------'-----------I Vaccin anti- I NaotUl'''' reaciilor advarseI ----..L _D! P + ant!poIig l' fenomene anafilacticeI dar i DTPI anti tuse convulsiv oc anafllacttc, encefalopatii,I oc, convulsii,febr, disconfort,II complicatii acute, sechele,decesrRujeQ!. -- fenomene anafilacticeRubeoii oc anafilactic
J-Iidentificarea i anQli~area difl ItV~-1 v , liprogramului, urmate d 1 ICU a,1ar aparute In ap icarea
Eficiena preveni _ e remedierea acestora.
epidemiologice i imunol el .Prin vaccinare se poate aprecia prin testeOg'Ce.
Pe lng testele d
produs biologic, se fac tes:elaborator obligatorii legate de vaccin ca
raport de ,rspunsul imu pentru verificarea eficienei vaccinrilor nnOlo '
scop, se folosete n ey glc provocat la gazda uman, In acest, Clllln
epidemiologic. Pentru St ' le populaionale, testul sau indicatorulobllire
laturi/grupuri de persoan a acestui indicator se seiecttoneaz
I . e SUfiCient d ' v v "expunerea CI Infecii ct ' '1 e man, asemanatoare, atat pnnI Pri '
ar putea influena rSPllh n varst sau particulariti fiziologice care',sUI'
, ImUnologie.la nivelul populaiei (
n general, prin studiul generale, eficiena Imunizrii se apreciaz,t11Otb'd' v
experimental i la lotUl I Itaii, comparnd rezultatele la grupastatistic a datelor. Se Cal martor dup prelucrarea matematic i
, d' CUleaz - d' I d f" v , vraportul Intre propori::. In rce e e e lcien, care reprezinta" de '
Preparatui vaccinal SUPll IrnbOlnviri la vaccina i i la nevaccinatl.S test" ,
valoarea acestui raport est arlt va fi cu att mai eficient cu cte mai Oar
Studiul curbei morbid' v e.evaluri! n timp ,i spaiu Itaii post-vaccina le ofer posibilitatea
enctentet programelor de CI tendinelor unor boli transmisibile i aVacr--
~~ifAii,4l@,...W _~_,"".._ .~#:;g;. _!W .>.,-.-~~,,:r~;;,~.OA---:-""
1il'' .
..,
Eficienta vacctnrtt se poate aprecia i prin punerea n eviden a
IllOdifiCdlor- irnunoloqice specifice, respectiv evidentierea titrului AC
inr:lu50 de un anumit vaccin. In acest scop, se titreaz Ac din serul
persoanelor vaccrnate i rezultatele se analizeaz n comparaie cu cele
lnreqistrate anterior aciunii de vaccina re sau se fac studii cornparattve
pe toturt de vaconati i nevaccinatt.
VIRUSOlOGIE SPECIAL - principalele familii II
impficate n patologia uman
VIRUSUfU ARN
Evaluarea sero-epiderniologic a eficienei unui program de
vaccmare este important pentru elaborarea i adaptarea calendarului
vacctnrtlor, alegerea preparatutut vaccinal, stabilirea asocierii
vnccinunlor i asigurarea unei protecii specifice pe termen lung.
Familia Picornaviridae 14~.'itil,.t;IiIli:j.'
;:1
l1'!
13. 2. Profilaxia pasiv
Preparatele de Imunoolobuune (Ig) reprezint seroprontaxta i,
ocazlonal, seroterapra. Profilaxia pasiv este indicat n urmtoarele
t.ltuaii:
) dind a avut loc expunerea viral sau este de ateptat c va avea loc
kl(jlte curnd, iar perioada scurt de incubaie nu permite vaccinarea:
b) cnd nu exist vaccin;
ci cnd o afectiune asociat nu permite un rspuns satisfctor lavaccmare
Picornavirusurile sunt mici virusuri ARN, nenvellte, cu simetrie
icosaedric i genom pozitiv.
Clasificare - de interes pentru patologia uman sunt genurile:
r. Enterovirusu. RhinovtrusUl. neoernevtrus: gen separat pentru virusul hepatitei A (VHA).
Vezi capitolul 22.
Seroprofilaxia poate folosi seruri heterotoqe: ns n ultunn ani,
',e folosesc mai ales produse de provenien uman: Ig standard, care
'I(;nt arnestecurt de Ig provenite de la sute de donator; (conin AC fattir! un numar de virusuri mai frecvente) i 19 specifice, care provin de
la rtonatort care au un tttru n Ac ridicat fa de anumite virusuri, dup
ununtzarea cu un anumit vaccin.
(a) .Enterovirusurile: virusuri acid-rezistente ce ptrund pe
cale dtqestiv, replicndu-se cel mai bine n condiii de pH sczut, la
37 C. In acest fel depesc bariera acid gastric.
Fiind virusuri nenvellte, deci mai rezistente, nu sunt afectate de
aciune srurtlor biliare.
Principalul mod de transmitere: fecal oral (impticati! mai ales
privind mecanismul patogenetic i prevenia). Pentru fiecare gen au
fost descrtse mai multe tipuri:
1. Poliovirusurile: tipurile 1, 2, i 3.2. Virusurile Coxsackie A (cu 24 serotipuri) i B (6 serotlpuri).3. ECHO virusurile (enteric cvtooetiioaenic human orohen -
virusuri izolate de la om, ce determinau pe culturi de celuleefect cttopattc, dar fr legtur, iniial cu vreo afectiune):inibal 34 serotipuri, n prezent 30 serotipurt.
4. Enterovirusuri noi: 68- 72 (72 este VHA care a fost recentclasificat ca Heparnavirus).
8G R7