ANÁLISE DE ÁGUA

Amostra de água da Lagoa Amostra de água da Lagoa da Pampulhada Pampulha

Objetivos

• Verificar se há a presença de bactérias Verificar se há a presença de bactérias heterotróficas e de coliformes totais e fecais heterotróficas e de coliformes totais e fecais na amostra de água coletadana amostra de água coletada

• Observar se o local da amostra pode servir Observar se o local da amostra pode servir para a utilização geral e se a água está em para a utilização geral e se a água está em condições de consumo.condições de consumo.

Introdução

Importância da análise de águaImportância da análise de água

• Adequar a legislação específica de cada uso Adequar a legislação específica de cada uso requeridorequerido

• Prevenir danos à saúde humanaPrevenir danos à saúde humana

• Prevenir danos ao meio ambiente. Prevenir danos ao meio ambiente.

Lagos

Distribuição dos microrganismos no ambiente Distribuição dos microrganismos no ambiente aquáticoaquático

• Zona litorâneaZona litorânea

• Zona limnéticaZona limnética

• Zona profundaZona profunda

• Zona bênticaZona bêntica

Coleta de amostra de água

• Frasco coletor de plásticoFrasco coletor de plástico

• Transporte da amostra: 4ºC a 10ºCTransporte da amostra: 4ºC a 10ºC

• Tempo ideal para início da análise: 6 horas Tempo ideal para início da análise: 6 horas (máximo 24 horas)(máximo 24 horas)

Normas técnicas e limites para avaliação da qualidade da água

Definições:Definições:• Água potávelÁgua potável

• Sistema de abastecimento de água para Sistema de abastecimento de água para consumo humanoconsumo humano

• Solução alternativa de abastecimento de Solução alternativa de abastecimento de água para consumo humanoágua para consumo humano

• Controle da qualidade da água para Controle da qualidade da água para consumo humanoconsumo humano

• Coliformes totaisColiformes totais

• Coliformes termotolerantesColiformes termotolerantes

• Escherichia coliEscherichia coli

• Contagem de bactérias heterotróficasContagem de bactérias heterotróficas

Padrão de PotabilidadePadrão de PotabilidadePadrão microbiológico de potabilidade da água para consumo humano

PARÂMETRO VMP(1)

Água para consumo humano(2)

Escherichia coli ou coliformes

termotolerantes(3)

Ausência em 100ml

Água na saída do tratamento

Coliformes totais Ausência em 100ml

Água tratada no sistema de distribuição (reservatórios e rede)

Escherichia coli ou coliformes

termotolerantes(3)

Ausência em 100ml

Coliformes totais Sistemas que analisam 40 ou mais amostras por mês: Ausência em 100ml em 95% das amostras examinadas no mês;Sistemas que analisam menos de 40 amostras por mês: Apenas uma amostra poderá apresentar mensalmente Resultado positivo em 100ml

NOTAS: (1) valor máximo permitido. (2) água para consumo humano em toda e qualquer situação, incluindo fontes individuais como poços, minas, nascentes,dentre outras. (3) a detecção de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada.

Padrão de Balneabilidade

Balneabilidade é a qualidade das águas Balneabilidade é a qualidade das águas destinadas à recreação de contato primário, destinadas à recreação de contato primário,

sendo este entendido como um contato sendo este entendido como um contato direto e prolongado com a água (natação, direto e prolongado com a água (natação,

mergulho, esqui-aquático, etc), onde a mergulho, esqui-aquático, etc), onde a possibilidade de ingerir quantidades possibilidade de ingerir quantidades

apreciáveis de água é elevada. apreciáveis de água é elevada.

Águas doces são classificadas em:Águas doces são classificadas em:

1.1. Classe especialClasse especial

2.2. Classe 1Classe 1

3.3. Classe 2Classe 2

4.4. Classe 3Classe 3

5.5. Classe 4Classe 4

Categorias de BalneabilidadeAs águas, sejam doces, salobras ou salinas, As águas, sejam doces, salobras ou salinas, podem ser classificadas como: PRÓPRIAS e podem ser classificadas como: PRÓPRIAS e

IMPRÓPRIASIMPRÓPRIAS

- Próprias podem ser classificadas em: Próprias podem ser classificadas em:

• Excelente: Excelente: Quando 80% ou mais de amostras, Quando 80% ou mais de amostras, coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas consecutivas, apresentarem no máximo 200 consecutivas, apresentarem no máximo 200 bactérias Escherichia Coli.bactérias Escherichia Coli.

• Muito Boa: Muito Boa: Quando 80% ou mais das amostras, Quando 80% ou mais das amostras, coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas consecutivas, apresentarem no máximo 400 consecutivas, apresentarem no máximo 400 bactérias escherichia coli.bactérias escherichia coli.

• Satisfatória: Satisfatória: Quando 80% ou mais das Quando 80% ou mais das amostras, coletadas em um mesmo amostras, coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas consecutivas, ponto, em 5 semanas consecutivas, apresentarem no máximo 800 bactérias apresentarem no máximo 800 bactérias escherichia coli.escherichia coli.

• Imprópria: Imprópria: Quando não se enquadra Quando não se enquadra nas categorias acima ou o valor na nas categorias acima ou o valor na última amostragem for superior a 2.000 última amostragem for superior a 2.000 bactérias escherichia coli.bactérias escherichia coli.

Metodologia

Determinação de coliformes em Água

Tubos Múltiplos

Presuntivos

•10 mL da amostra em 10 mL de caldo lactosado duplo, 5 tubos.

•Diluições consecutivas em caldo lactosado simples a partir de 1 mL da amostra para 9 do caldo, 1 mL da primeira diluição para 9 do caldo, etc.

•Inoculação em estufa a 35°C+/- 0,5°C de 24 a 48 horas. Indica coliforme quando apresenta crescimento e fermentação.

Confirmativos

•Transferência de alíquotas dos testes que deram indicação de coliformes anteriormente para caldo lactosado verde brilhante bile.

•Inoculação em estufa a 35°C+/- 0,5°C de 24 a 48 horas. Positivo para coliformes totais quando apresenta crescimento e fermentação.

Diferenciação de coliformes fecais (termotolerantes)

• São inoculados em caldo EC (São inoculados em caldo EC (E. coliE. coli) alíquotas ) alíquotas dos testes positivos para coliformes totais, que dos testes positivos para coliformes totais, que fermentarão a lactose presente neste caldo.fermentarão a lactose presente neste caldo.

• A temperatura de incubação é de 44,5°C +/- 0,2°C A temperatura de incubação é de 44,5°C +/- 0,2°C em banho-maria, com agitação e temperatura em banho-maria, com agitação e temperatura constantes. Devem ficar em incubação de 24 a 48 constantes. Devem ficar em incubação de 24 a 48 horas.horas.

Técnica do substrato definido

• Utilização do MUG e do ONPG.Utilização do MUG e do ONPG.

• Diferenciação través da enzima beta Diferenciação través da enzima beta glicoronidase.glicoronidase.

• Amarelo: Apenas Coliformes.Amarelo: Apenas Coliformes.

• Quando positivo para Quando positivo para E. coliE. coli, é produzido , é produzido um composto fosforecente de brilho azul um composto fosforecente de brilho azul quiando iluminado com luz ultra-violeta.quiando iluminado com luz ultra-violeta.

Contagem padronizada de bactérias heterotróficas em água

• Utilização do meio de cultura PCA (ágar para Utilização do meio de cultura PCA (ágar para contagem de colônias) com técnica de semeadura contagem de colônias) com técnica de semeadura pour-plate. Diluições seriadas em água peptonada pour-plate. Diluições seriadas em água peptonada são feitas anteriormente e 1 mL de cada diluição é são feitas anteriormente e 1 mL de cada diluição é inoculado na placa.inoculado na placa.

• Incubar as placas a 35°C +/- 0,5°C por 48 horas.Incubar as placas a 35°C +/- 0,5°C por 48 horas.• Fazer o cálculo das densidades das bactérias.Fazer o cálculo das densidades das bactérias.

Ensaio completo

• Inocular em placas E.A.M (eosina azul de metileno) os Inocular em placas E.A.M (eosina azul de metileno) os resultados positivos obtidos em caldo E.C. Incubar a 35°C resultados positivos obtidos em caldo E.C. Incubar a 35°C +/- 0,5°C de 24 a 48 horas.+/- 0,5°C de 24 a 48 horas.

• Utilizar o método de estrias.Utilizar o método de estrias.

• Resultados positivos Típicos: nucleadas, pequenas, com ou Resultados positivos Típicos: nucleadas, pequenas, com ou sem brilho metálico esverdeado.sem brilho metálico esverdeado.

• Resultados positivos Atípicos: rosas, grandes, tendendo à Resultados positivos Atípicos: rosas, grandes, tendendo à união, mucóides opacas e sem núcleounião, mucóides opacas e sem núcleo

• Resultados negativos: quaisquer outros crescimentos.Resultados negativos: quaisquer outros crescimentos.

Confirmação, Ensaio IMVC

• Inocular colônias isoladas em: VM/VP para Inocular colônias isoladas em: VM/VP para teste de vermelho de metila. VM/VP para teste de vermelho de metila. VM/VP para teste de voges proskauer. SIM semi sólido teste de voges proskauer. SIM semi sólido para teste de sulfeto, indol e motilidade. para teste de sulfeto, indol e motilidade. CITRATO, para confirmar a utilização de CITRATO, para confirmar a utilização de citrato como única fonte de carbono.citrato como única fonte de carbono.

Resultados e discussão

Contagem Padronizada de Bactérias Heterotróficas em água

Placa Placa /Diluição/Diluição

Volume Volume de de

amostraamostra

Número de Número de colôniascolônias

Caracterís-Caracterís-ticasticas

UFC/mlUFC/ml MédiaMédia

Placa 1 Placa 1 1010-6-6

1 mL1 mL 22 Difusas Difusas (Spreader) – (Spreader) – cremosas e cremosas e

leitosasleitosas

2 x 102 x 10-6-6

2 x 102 x 10-6-6

Placa 2Placa 21010-6-6

1 mL1 mL 22 1 colônia difusa 1 colônia difusa (spreader) – (spreader) – cremosas e cremosas e

leitosasleitosas

2 x 102 x 10-6-6

Placa 3Placa 31010-5-5

1 mL1 mL 22 Cremosas e Cremosas e leitosasleitosas

2 x 102 x 10-5-5

2 x 102 x 10-5-5

Placa 4Placa 41010-5-5

1 mL1 mL 22 Amarelas, Amarelas, cremosas e cremosas e regularesregulares

2 x 102 x 10-5-5

Controle Controle negativonegativo

__ 11 Amarela, cremosa Amarela, cremosa e regulare regular

__ __

Cálculos

Determinação de coliformes em água- Teste presuntivo -

• Técnica dos tubos múltiplos (NMP)Técnica dos tubos múltiplos (NMP)

5 tubos de CLD (caldo lactosado duplo)

5 tubos de CLS (caldo lactosado simples)

5 tubos de CLS (caldo lactosado simples)

10 mL de amostra em cada tubo

1 mL de amostra em cada tubo

0,1 mL de amostra em cada tubo

Número de tubos positivos

5

5

5

NMP/100 mL = ≥ 1600 (5-5-5)

Determinação da presença do grupo coliforme total em água – Teste confirmativo –

SérieSérie Volume inóculoVolume inóculo LeituraLeitura

1 CVBBS1 CVBBS 10 mL10 mL 4*4*

2 CVBBS2 CVBBS 1 mL1 mL 55

3 CVBBS3 CVBBS 0,1 mL0,1 mL 55

NOTA: *Como observou-se que para os demais volume inóculos os 5 tubos foram positivos, pode- se concluir que houve erro do operador e um tubo de CVBBS de volume inóculo de 10 mL não foi inoculado, pressupondo, então que se obteria 5 tubos positivos também para esse volume.

NMP/100 mL = ≥ 1600 (5-5-5)

Enumeração de Coliforme termotolerante (fecal) na amostra de

água

SérieSérie Volume inóculoVolume inóculo LeituraLeitura

1 CEC1 CEC 10 mL10 mL 3 (em 4)*3 (em 4)*

2 CEC2 CEC 1 mL1 mL 33

3 CEC3 CEC 0,1 mL0,1 mL 00

NOTA: Em decorrência do erro de operação mencionado anteriormente

NMP/100 mL = 27 (4-3-0, pois não havia a sequência 3-3-0 e notou-se um erro no preparo do CVBBS)

Método enzimático Sistema Cromogênico: Técnica do Substrato

definido• A amostra adquiriu uma cor amarelada e A amostra adquiriu uma cor amarelada e

quando houve emissão de luz UV, quando houve emissão de luz UV, observou-se fluorescência azul, observou-se fluorescência azul, confirmando a presença de confirmando a presença de E. coli.E. coli.

MUG – Confirma E. coli

Ensaio Completo

• Pequeno número de bactérias Pequeno número de bactérias heterotróficas;heterotróficas;

• Número enorme de Número enorme de E. coliE. coli na água na água (1600/100mL)(1600/100mL)

• Número relativamente pequeno de Número relativamente pequeno de coliformes fecais (27/100mL)coliformes fecais (27/100mL)

Conclusão

• A água da Lagoa da Pampulha possui A água da Lagoa da Pampulha possui contaminação de origem fecal;contaminação de origem fecal;

• De acordo com a lei, é imprópria para De acordo com a lei, é imprópria para ingestão humana eingestão humana e é própria (satisfatória) é própria (satisfatória) para a utilização geral.para a utilização geral.

Referências Bibliográficas:• Balneabilidade. Acessado em: 26/09/10. Disponível em: Balneabilidade. Acessado em: 26/09/10. Disponível em:

http://www.jurere.com.br/sae/balneabilidade.htmhttp://www.jurere.com.br/sae/balneabilidade.htm

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• PELCZAR, Michael Joseph e outros. Microbiologia: Conceitos e aplicações, vol PELCZAR, Michael Joseph e outros. Microbiologia: Conceitos e aplicações, vol 2, 2. ed. Traduzido por Sueli Fumie Yamada. São Paulo: Pearson Education do 2, 2. ed. Traduzido por Sueli Fumie Yamada. São Paulo: Pearson Education do Brasil, 1997.Brasil, 1997.

• Água. Acessado em 28/09/10. Disponível em: Água. Acessado em 28/09/10. Disponível em: http://www.aquanalise.com.br/aguahttp://www.aquanalise.com.br/agua..phpphp