Возможности применения метода Возможности применения метода высокочастотной ультразвуковой высокочастотной ультразвуковой

допплерографии на модели допплерографии на модели сосудов куриного эмбриона сосудов куриного эмбриона

ex vivoex vivo в доклинических в доклинических исследованияхисследованиях

Белянкина Е.Ю., Родина И.А., Шевченко Т.В., Тихонов В.П. ОАО Завод экологической техники и экопитания «ДИОД»

«Минимакс-Допплер-К»«Минимакс-Допплер-К»

10-дневный куриный эмбрион10-дневный куриный эмбрион

1- сосуд венозного типа; 2 – сосуд артериального типа

1 2

Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов

Допплерограмма сосуда венозного типа

Допплерограмма сосуда артериального типа

Исследуемые биологические Исследуемые биологические эффектыэффекты

Местнораздражающее действие

Антиаритмическое действие

Гипо- или гипертензивная активность

Местнораздражающее действиеМестнораздражающее действие

Cтандартный раздражающий агентРаствор калия гидроксида / Kalium hydroxidum (KOH)

Схема эксперимента 0 мин 80 сек

Раствор сравнения – физиологический раствор

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о

измерение скорости измерение скорости кровотока в кровотока в

интактных сосудахинтактных сосудах

измерение скорости измерение скорости кровотока после кровотока после

воздействиявоздействия

нанесение нанесение KOHKOH

Раздражающее действие Раздражающее действие KOHKOH на на сосуды ХАО куриных эмбрионовсосуды ХАО куриных эмбрионов

Концент-рация

KOH, %

Изменение скорости

кровотока, %

Визуальная оценка состояния сосудов

(ХЕТ-КAM-тест)

Выраженность эффекта

Физ. раствор

-2,6±1,2 без измененийотсутствие действия

1,0 -12,8 ±2,2мелкие кровоизлияния в отдельных капиллярах

слабое

1,5 -20,3 ±1,8кровоизлияния в

капиллярах, слабая гиперемия

умеренное

2,5 -38,7 ±2,2точечные кровоизлияния

по всей поверхности, выраженная гиперемия

выраженное

Оценка антиаритмического действия Оценка антиаритмического действия Исследуемые препараты1. Аритмогенный препарат 2. Антиаритмический препарат Строфантин УнитиолStrophanthidin (кат. № 66-28-4, Sigma) Dimercaptopropansulfonate sodium

Схема эксперимента нанесение нанесение унитиола строфантина

0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости измерение скорости кровотока кровотока в сосудах в сосудах после воздействия

Оцениваемые показателиЧастота возникновения аритмии (%).Выживаемость эмбрионов (%).

Допплерограммы сосудовДопплерограммы сосудов после после воздействия строфантинавоздействия строфантина

до последо посленанесения строфантинананесения строфантина

Оценка действия Оценка действия антиаритмического препаратаантиаритмического препарата

0

20

40

60

80

100

5 10 30 60

Время наблюдения, мин

Возникновение аритмии

Строфантин Унитиол +Строфантин

0

20

40

60

80

100

5 10 30 60

Время наблюдения, мин

Выживаемость эмбрионов

Строфантин Унитиол +Строфантин

Гипо- и гипертензивное действиеГипо- и гипертензивное действиеИсследуемые стандартные препараты

Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости нанесение измерение скорости кровотока в кровотока в исследуемого сосудах после воздействия интактных сосудах препарата

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)2. Изменение скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%, кровотока (%) = (Vs)о

Вазоконстриктор Вазодилятатор

Noradrenaline (кат. № 51-41-2, Sigma) Atenolol (кат. № 29122-68-7, Sigma)

Допплерограммы сосудов после Допплерограммы сосудов после воздействия норадреналинавоздействия норадреналина

Допплерограмма сосуда венозного типа

Допплерограмма сосуда артериального типа

до после нанесения норадреналина

Оценка действия Оценка действия гипо-/гипертензивных препаратов на гипо-/гипертензивных препаратов на скорость кровотока в сосудах ХАОскорость кровотока в сосудах ХАО

-20

0

20

40

60

0 5 10 30 60

Время наблюдения, минИзм

енен

ие

скор

ости

кро

вото

ка,

%

Атенолол 10-5М Атенолол 10-4М Атенолол 10-3М

Норадреналин 3х10-5М Норадреналин 10-5М Норадреналин 3х10-4М

Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов

Исследуемые препараты1.Экстракт сушеницы 2. Экстракт листа оливы

(Gnaphalii uliginosi extract siccum) (Olive leaf powder extract)

Схема эксперимента 0 мин 5 мин 10 мин 30 мин 60 мин

измерение скорости нанесение нанесение измерение скорости кровотока

кровотока в норадреналина экстракта в сосудах после воздействия

интактных сосудах

Измеряемые показатели1. Линейная скорость кровотока Vs (см/сек)

2. Изменение

скорости ((Vs)n – (Vs)o) х 100%,

кровотока (%) = (Vs)о

Оценка гипотензивного действия Оценка гипотензивного действия растительных экстрактоврастительных экстрактов

0

10

20

30

40

50

0 5 10 30 60Время наблюдения, мин

Изм

енен

ие

скор

ости

кро

вото

ка,

%

Норадреналин + Физ. раствор Норадреналин + Атенолол

Норадреналин +Экстракт сушеницы Норадреналин + Экстракт оливы

Характеристика аналитических Характеристика аналитических показателей экстракта сушеницыпоказателей экстракта сушеницы

Номер партии

Содержание дубильных веществ, %

Содержание флавоноидов, %

Содержание гидроксикорич-ных кислот, %

1 8,0 ± 0,1 0,83 ± 0,02 0,54 ± 0,05

2 8,1 ± 0,3 0,64 ± 0,01 0,65 ± 0,06

3 9,9 ± 0,5 1,15 ± 0,02 2,03 ± 0,02

4 9,5 ± 0,5 1,16 ± 0,02 1,36 ± 0,05

Сравнение действия экстрактов Сравнение действия экстрактов сушеницы разных партийсушеницы разных партий

0

10

20

30

40

50

0 5 10 30 60Время наблюдения, мин

Изм

енен

ие

скор

ости

к

ров

оток

а,%

Норадреналин + Экстракт сушеницы №1Норадреналин + Экстракт сушеницы №2Норадреналин +Экстракт сушеницы №3Норадреналин + Экстракт сушеницы №4

ЗаключениеЗаключение

Область применения:1. Оценка безопасности средств наружного применения (лекарственные, косметические и др);

2. Контроль качества субстанций и готовой продукции по некоторым видам биологической активности.3. Скрининговые исследования препаратов, обладающих потенциальным антиаритмическим, гипер- и гипотензивным действием;

СпасибоСпасибо за за

внимание!внимание!